用于牙髓干细胞提取的源齿筛选方法技术

本发明专利技术公开了用于牙髓干细胞提取的源齿筛选方法。本发明专利技术的研究结果表明：自然脱落的乳牙为无牙髓的牙齿，无干细胞；乳牙在II度松动以内，牙根吸收2/3以上或牙根完全吸收但髓室底完整存在的情况下，牙髓干细胞提取成功率高，且对恒牙的萌出无太大影响，为最佳的乳牙源齿采集时机。本发明专利技术的方法为今后临床乳牙牙髓干细胞源齿的采集时机提供理论基础。

Screening of source teeth for extraction of dental pulp stem cells

The invention discloses a source tooth screening method for extracting dental pulp stem cells. The results of the present invention show that the deciduous teeth which are naturally exfoliated are pulpless teeth and have no stem cells; when the deciduous teeth are less than 2/3 loose, the root absorbs more than 2/3 or the root absorbs completely, but the pulp floor is intact, the extraction success rate of the pulp stem cells is high, and the eruption of the permanent teeth is not greatly affected, so it is the best time for collecting the deciduous teeth. The method of the invention provides a theoretical basis for collecting timing of clinical deciduous pulp stem cell source teeth in the future.

【技术实现步骤摘要】
用于牙髓干细胞提取的源齿筛选方法
本专利技术属于生物
，具体涉及用于牙髓干细胞提取的源齿筛选方法。
技术介绍
间充质干细胞来源于多种组织，如骨髓、牙髓、胎盘、脐带和脂肪等，其中来自乳牙牙髓的间充质干细胞具有强大的干性和生物学活性，无排异反应，免疫调节能力强，是非常优秀的生物治疗细胞来源之一。由于来自乳牙牙髓的间充质干细胞取材方便，适宜于大规模培养，因此为牙髓干细胞的产业化奠定了良好基础。由于我国国民产值的不断提高，生活方式不断改善，如今的儿童食谱与过去相比减少了很多较硬的成人食谱成分，因此咀嚼过程对乳牙的影响大为削弱，导致如今儿童的乳牙相对过去不容易正常脱落替换，而易于发生滞留，因此往往需要到医院进行拔除。在过去，拔除的乳牙作为医疗废弃物被大量丢弃，而牙髓干细胞的发现和研究进展，使得这些废弃物作为牙髓干细胞的重要来源而获得再利用机会，为牙髓干细胞产业化提供了资源保证。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是如何选择合适的源齿以保证牙髓干细胞提取的成功率，获得足量和优质的牙髓干细胞。为解决上述技术问题，本专利技术首先提供了源齿作为提取或制备牙髓干细胞的原料中的应用：所述源齿满足如下1)和2)所述的条件：1)II度松动以内；2)无龋坏或龋坏程度在中龋以下。本专利技术还提供了满足上述条件的源齿在提取或制备牙髓干细胞中的应用。上述应用中，所述II度松动以内包括I度松动和II度松动。Ⅰ度松动是指牙齿颊舌方向(内外方向)的动度在1mm以内，其他方向没有动度；II度松动有两种情况：一为牙齿颊舌方向(内外方向)的动度在1-2mm之间，二为牙齿存在颊舌方向(内外方向)及近远中方向(左右方向)两个方向的动度。上述应用中，所述源齿为乳牙。所述源齿具体可为如下a1)-a5)中至少一种：a1)I度松动且牙根吸收1/3的源齿；a2)I度松动且牙根吸收1/2的源齿；a3)II度松动且牙根吸收1/2的源齿；a4)II度松动且牙根吸收2/3的源齿；a5)II度松动且牙根完全吸收但髓室底完整存在的源齿。在实际应用中，选择I度松动至II度松动的牙齿作为源齿，通过目视判断源齿有无龋坏及龋坏程度，当源齿无龋坏或龋坏程度在中龋以下时，对源齿进行采集，并在采集后立即放入充满保存液的容器中，然后密封容器，放入低温环境下进行保存或运输。其中，优选地，所述源齿为II度松动且牙根吸收2/3的乳牙或II度松动且牙根完全吸收但髓室底完整存在的乳牙。其中，优选地，在采集源齿之前，还包括用消毒剂对源齿外表进行消毒的步骤。所述消毒的方法具体可为用碘伏等消毒液擦拭牙冠或复方氯己定等含漱液含漱。其中，优选地，在源齿采集后置于(2-4)℃环境下进行保存或运输。其中，优选地，在源齿采集后的10秒内将源齿放入充满保存液的容器中。其中，优选地，所述容器是采购自北京泰盛生物科技有限公司的源齿采集管，所述保存液是采购自北京泰盛生物科技有限公司的源齿采集保存液。所述源齿还可以为恒牙或智齿，当源齿为恒牙或智齿时，源齿不包括判断其松动度的步骤，其他步骤与源齿为乳牙时相同。在采集源齿前，还包括对源齿进行筛选的步骤，对源齿进行筛选是保证牙髓干细胞提取成功的关键，应尽量避免选择龋坏(含继发龋)、存在填充体的牙齿作为源齿；如果有龋坏或存在充填体，建议拍摄根尖片判断原龋坏深度。若原龋坏为浅龋或中龋，进行牙髓活力测试有活性，去除龋坏组织后可尝试进行干细胞储存；若原龋坏为深龋，则不建议储存，感染风险大，提取成功率低。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了用于牙髓干细胞提取的源齿的筛选方法。本专利技术提供的用于牙髓干细胞提取的源齿的筛选方法包括选取满足如下1)和2)所述条件的源齿：所述源齿满足如下1)和2)所述的条件：1)II度松动以内；2)无龋坏或龋坏程度在中龋以下。上述方法中，所述源齿为乳牙。所述源齿具体可为如下a1)-a5)中至少一种：a1)I度松动且牙根吸收1/3的源齿；a2)I度松动且牙根吸收1/2的源齿；a3)II度松动且牙根吸收1/2的源齿；a4)II度松动且牙根吸收2/3的源齿；a5)II度松动且牙根完全吸收但髓室底完整存在的源齿。在实际筛选中，选择I度松动至II度松动的牙齿作为源齿，通过目视判断源齿有无龋坏及龋坏程度，当源齿无龋坏或龋坏程度在中龋以下时，对源齿进行采集，并在采集后立即放入充满保存液的容器中，然后密封容器，放入低温环境下进行保存或运输。其中，优选地，所述源齿为II度松动且牙根吸收2/3的乳牙或II度松动且牙根完全吸收但髓室底完整存在的乳牙。其中，优选地，在采集源齿之前，还包括用消毒剂对源齿外表进行消毒的步骤。所述消毒的方法具体可为用碘伏等消毒液擦拭牙冠或复方氯己定等含漱液含漱。其中，优选地，在源齿采集后置于(2-4)℃环境下进行保存或运输。其中，优选地，在源齿采集后的10秒内将源齿放入充满保存液的容器中。其中，优选地，所述容器是采购自北京泰盛生物科技有限公司的源齿采集管，所述保存液是采购自北京泰盛生物科技有限公司的源齿采集保存液。所述源齿还可以为恒牙或智齿，当源齿为恒牙或智齿时，筛选方法中不包括判断其松动度的步骤，其他步骤与源齿为乳牙时相同。所述筛选方法还包括尽量避免选择龋坏(含继发龋)、存在填充体的牙齿作为源齿的步骤。如果有龋坏或存在充填体，建议拍摄根尖片判断原龋坏深度。若原龋坏为浅龋或中龋，进行牙髓活力测试有活性，去除龋坏组织后可尝试进行干细胞储存；若原龋坏为深龋，则不建议储存，感染风险大，提取成功率低。上述方法在提取或制备牙髓干细胞中的应用也属于本专利技术的保护范围。对源齿牙髓干细胞提取的情况统计分析发现：牙根吸收1/3的源齿32颗，牙髓干细胞提取成功30颗，成功率93.75％；牙根吸收1/2的源齿35颗，牙髓干细胞提取成功32颗，成功率91.42％；牙根吸收2/3的源齿59颗，牙髓干细胞提取成功54颗，成功率91.53％；牙根完全吸收但髓室底完整的源齿37颗，牙髓干细胞提取成功34颗，成功率91.89％；自然脱落的乳牙10颗，牙髓干细胞提取成功0颗。除自然脱落的乳牙采集成功率低，其它采集成功率差异无明显统计学意义。对源齿采集后牙齿异位萌出的情况统计分析发现：牙根吸收1/3的源齿继承恒牙异位萌出12颗，恒牙萌出平均时间为2.19±0.18；牙根吸收1/2的源齿继承恒牙异位萌出11颗，恒牙萌出平均时间为1.89±0.13；牙根吸收2/3的源齿继承恒牙异位萌出8颗，恒牙萌出平均时间为1.42±0.12，牙根完全吸收但髓室底完整的源齿继承恒牙异位萌出2颗，恒牙萌出平均时间为1.03±0.15。本专利技术的研究结果表明：自然脱落的乳牙为无牙髓的牙齿，无干细胞；乳牙在II度松动以内，牙根吸收2/3以上或牙根完全吸收但髓室底完整存在的情况下，牙髓干细胞提取成功率高，且对恒牙的萌出无太大影响，为最佳的乳牙源齿采集时机。本专利技术为今后临床乳牙牙髓干细胞源齿的采集时机提供理论基础。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。下述实施例中的乳牙滞留是指继承恒牙已经萌出，未能按时脱落的乳牙；或者恒牙未萌出，保留在恒牙列中的乳牙。下述实施例中的源齿是指为提本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.源齿在作为提取或制备牙髓干细胞的原料中的应用；所述源齿满足如下1)和2)所述的条件：1)II度松动以内；2)无龋坏或龋坏程度在中龋以下。

【技术特征摘要】
1.源齿在作为提取或制备牙髓干细胞的原料中的应用；所述源齿满足如下1)和2)所述的条件：1)II度松动以内；2)无龋坏或龋坏程度在中龋以下。2.源齿在提取或制备牙髓干细胞中的应用。所述源齿满足如下1)和2)所述的条件：1)II度松动以内；2)无龋坏或龋坏程度在中龋以下。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述源齿为乳牙；或，所述源齿为如下a1)-a5)中至少一种：a1)I度松动且牙根吸收1/3的源齿；a2)I度松动且牙根吸收1/2的源齿；a3)II度松动且牙根吸收1/2的源齿；a4)II度松动且牙根吸收2/3的源齿；a5)II度松动且牙根完全吸收但髓室底完整存在的源齿；或，所述源齿为II度松动且牙根吸收2/3的乳牙或II度松动且牙根完全吸收但髓室底完整存在的乳牙。4.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述源齿为恒牙或智齿，当源齿为恒牙或智齿时，所述源齿满足权利要求1或2中2)所述的条件。5.根据权利要求1-4中任一所述的应用，其特征在于：所述源齿在采集后在(2-4)℃温度下进行保存或运输；或，所述源齿在采集后的10秒内置于含有保存液的容器中；或，所述源齿采集前，还包括用消毒剂对源齿外表进行消毒的步骤，所述消毒的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：张建国，赵秀兰，马玉实，邹智群，
申请(专利权)人：北京泰盛生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11