一种促间充质干细胞生长的培养基及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种能够促进间充质干细胞分裂生长的培养基，包括无血清的基础培养基及在其基础上增添的添加剂，添加剂包含木芙蓉提取物、海藻多糖、黄芪甲苷、人血白蛋白、转铁蛋白、谷氨酰胺、血小板衍生因子、表皮生长因子、成纤维生长因子、人胰岛素生长因子、维生素A；木芙蓉提取物具有抗氧化及激活细胞活性，复配海藻多糖与黄芪甲苷可有效的促进细胞代谢生长；人血白蛋白、转铁蛋白、谷氨酰胺与维生素A为干细胞生长提供必需的营养物质；血小板衍生因子、表皮生长因子、成纤维生长因子与人胰岛素生长因子等细胞因子共同促进干细胞迅速生长增殖；培养基不仅能够提高间充质干细胞的生长活力、缩短培养时间、促进细胞生长因子的表达，还可保持其分化潜能的干细胞活性；在日常培养中又不使干细胞进行分化，为科学研究提供便利。

A Culture Medium for Promoting Mesenchymal Stem Cell Growth and Its Preparation Method

The invention discloses a culture medium capable of promoting the division and growth of mesenchymal stem cells, including a serum-free basic culture medium and additives added thereto. The additives include Hibiscus mutabilis extract, seaweed polysaccharide, astragaloside, human serum albumin, transferrin, glutamine, platelet-derived factor, epidermal growth factor, fibroblast growth factor and human insulin. Growth factors and vitamin A; Muhilus Hibiscus extract has antioxidant and activating cell activity, and the combination of seaweed polysaccharide and astragaloside can effectively promote cell metabolism and growth; human serum albumin, transferrin, glutamine and vitamin A provide essential nutrients for stem cell growth; platelet-derived factor, epidermal growth factor, fibroblast growth factor and insulin life Cytokines such as growth factors can promote the rapid growth and proliferation of stem cells. Medium can not only improve the growth vitality of mesenchymal stem cells, shorten the culture time, promote the expression of growth factors, but also maintain the differentiation potential of stem cells. In daily culture, stem cells are not allowed to differentiate, which provides convenience for scientific research.

【技术实现步骤摘要】
一种促间充质干细胞生长的培养基及其制备方法
本专利技术属于干细胞培养基
，具体涉及到一种促进间充质干细胞生长的新型培养基及其制备方法。
技术介绍
干细胞是一类具有多分化潜能及自我更新能力的原始未分化的细胞。根据干细胞的发育阶段可分为胚胎干细胞与成体干细胞，胚胎干细胞又被称之为“种子细胞”，可分化为各种类型的组织细胞；成体干细胞是存在于已分化组织中的未分化细胞，如神经系统的神经干细胞、血液循环系统中的血液干细胞、脂肪组织中的脂肪干细胞等。根据干细胞的分化潜能又可分为全能干细胞(如胚胎干细胞)、多能干细胞(如间充质干细胞)、单能干细胞(亦称之为专能干细胞，如造血干细胞)。自1976年Freidenstein首次发现骨髓间充质干细胞后，后续的研究发现间充质干细胞不仅具有多向分化潜能，还具有造血支持、促进干细胞植入、免疫调控和自我复制等多项潜能。因此，间充质干细胞被认为是最接近临床应用的干细胞产品。同时，间充质干细胞在科研界也被认为是继胚胎干细胞、造血干细胞之后的又一主要科研热点，是一种能够治疗多种系统疾病的“实用型干细胞”。其中，间充质干细胞中的脂肪干细胞被认为是《时代周刊》评为“当今最棒的50项专利技术之一”，可通过分泌一些细胞因子(例如HGF,TGF-β,VEGF,bFGF，PGF等)促进细胞的增殖生长，是21世纪最有效的抗衰老技术，可见间充质干细胞未来在医美行业的应用前景。干细胞的应用大多数离不开体外培养，而干细胞体外培养的关键又在于培养液的选择。间充质干细胞的培养液大都是在基础培养基中添加血清，血清中包含多种不同分子量大小的蛋白成分，为细胞的生长增殖提供必要的营养因子。但是，动物源血清的添加，由于其成分复杂不清晰不仅会引入外源污染、细胞毒性及影响细胞培养标准化，在医疗方面也存在人体异源排斥反应以及影响细胞形态分化方向发生异变，在一定程度上也会影响细胞表达产物的分离与鉴定。目前，干细胞培养基的应用逐渐往无血清添加的方向转化，利用一些血清替代物进行添加。血清替代物虽然规避了血清潜在的弊端，但血清替代物组分繁多且价格成本较高，培养的细胞增殖速度慢，是科研及医疗应用亟需解决的主要问题。
技术实现思路
针对目前干细胞培养基存在一些不足，本专利技术意在提供一种促间充质干细胞生长的培养基及其制备方法，其成分明确、简单，且价格成本低的无血清干细胞培养基，并在一定程度上提高间充质干细胞的生长增殖速率。本专利技术的技术方案如下：一种促间充质干细胞生长的培养基，包括无血清的基础培养基及在其基础上增添的添加剂，所述添加剂的成分以终浓度计，包含木芙蓉提取物80-120ng/mL、海藻多糖30-50ng/mL、黄芪甲苷25-40ng/mL、人血白蛋白30-50μg/mL、转铁蛋白10-20μg/mL、谷氨酰胺3-5nM/mL、血小板衍生因子10-20ng/mL、表皮生长因子10-20ng/mL、成纤维生长因子10-18ng/mL、人胰岛素生长因子10-20ng/mL、维生素A3-5ng/mL。进一步，所述添加剂的成分以终浓度计，包含木芙蓉提取物80ng/mL、海藻多糖30ng/mL、黄芪甲苷25ng/mL、人血白蛋白30μg/mL、转铁蛋白10μg/mL、谷氨酰胺3nM/mL、血小板衍生因子10ng/mL、表皮生长因子10ng/mL、成纤维生长因子10ng/mL、人胰岛素生长因子10ng/mL、维生素A3ng/mL。进一步，所述添加剂的成分以终浓度计，包含木芙蓉提取物120ng/mL、海藻多糖50ng/mL、黄芪甲苷40ng/mL、人血白蛋白50μg/mL、转铁蛋白20μg/mL、谷氨酰胺5nM/mL、血小板衍生因子20ng/mL、表皮生长因子20ng/mL、成纤维生长因子18ng/mL、人胰岛素生长因子20ng/mL、维生素A5ng/mL。进一步，所述添加剂的成分以终浓度计，包含木芙蓉提取物110ng/mL、海藻多糖40ng/mL、黄芪甲苷30ng/mL、人血白蛋白45μg/mL、转铁蛋白15μg/mL、谷氨酰胺4nM/mL、血小板衍生因子15ng/mL、表皮生长因子15ng/mL、成纤维生长因子15ng/mL、人胰岛素生长因子15ng/mL、维生素A4ng/mL。进一步，所述基础培养基为DMEM或F12培养基。一种促间充质干细胞生长的培养基的制备方法，包括以下步骤：(1)准确称取相应量的木芙蓉提取物、海藻多糖、黄芪甲苷、人血白蛋白、转铁蛋白、谷氨酰胺、血小板衍生因子、表皮生长因子、成纤维生长因子、人胰岛素生长因子、维生素E，先将木芙蓉提取物、海藻多糖、黄芪甲苷加入到无血清基础培养基中，搅拌混匀约20-30min；再将人血白蛋白、转铁蛋白、谷氨酰胺、血小板衍生因子、表皮生长因子、成纤维生长因子、人胰岛素生长因子加入上述混匀溶液中，继续搅拌10-15min；最后，加入维生素A，并加以搅拌均匀。(2)利用质量分数为6％-8％的碳酸钠溶液对步骤(1)所得混合培养基进行PH调节，将混合培养基的PH调至7.05-7.35。(3)将步骤(2)所得混合培养基进行0.22μm滤膜过滤除菌，即可得新型培养基。进一步，所述步骤(1)搅拌时间为30分钟。进一步，所述步骤(1)继续搅拌10分钟。进一步，所述步骤(2)向步骤(1)所得混合培养基中加入质量分数为7％的碳酸钠溶液。进一步，所述步骤(2)调节培养基的pH至7.2。采用上述技术方案，专利技术是在无血清的基础培养基中增添添加剂，添加剂包含木芙蓉提取物、海藻多糖、黄芪甲苷、人血白蛋白、转铁蛋白、谷氨酰胺、血小板衍生因子、表皮生长因子、成纤维生长因子、人胰岛素生长因子、维生素A。其中木芙蓉提取物中富含植物胎盘素及植物性生长因子，不仅能够刺激干细胞的再生，改善细胞氧气供应，还可强化细胞对脂肪、蛋白质及碳水化合物等物质的吸收，从而增加细胞营养与机能；海藻多糖具有抗氧化作用，可降低干细胞内的氧分压，与木芙蓉复配可进一步促进细胞的增殖生长；黄芪甲苷可刺激干细胞分泌细胞生长因子，同时在培养基中额外加入主要细胞因子(血小板衍生因子、表皮生长因子、成纤维生长因子、人胰岛素生长因子)低浓度组合可起到协同促进间充质干细胞的增殖作用，并延缓间充质干细胞在培养过程中的老化现象；人血白蛋白不仅可作为干细胞内的渗透压调节剂与自由基清除剂，还可运载生长因子为干细胞转运营养物质；转铁蛋白通过与细胞表面相应受体结合以转运铁元素，用于调节细胞内铁元素的代谢，还可通过与其他微量元素结合调节细胞的生长增殖；谷胱甘肽、人血白蛋白与维生素A相互联合，可进一步清除细胞内的自由基，维持多种蛋白与酶的完整结构，保持蛋白酶的酶活性，保证细胞的生物活性，并降低细胞凋亡概率。相对于现有干细胞培养基，本专利技术的有益效果主要为：1.本专利技术提供的培养基不含有血清，可避免免疫排斥反应、细胞毒性、病原体污染等弊端；2.本专利技术首次采用木芙蓉提取物用于间充质干细胞的培养，并复配黄芪甲苷与细胞生长因子，不仅可使干细胞的生长增殖速度得到进一步的提高，同时在维持干细胞“干性”(多分化潜能与自我更新能力)的情况下延缓细胞衰老；3.本专利技术组分明确简易、成本较低、制备工艺简单、操作方便，并能促进间充质干细胞的生长与增殖，减少扩增时间，有利于科学研究及医疗实验等体外干细胞的培养。附图本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种促间充质干细胞生长的培养基，其特征在于，包括无血清的基础培养基及在其基础上增添的添加剂，所述添加剂的成分以终浓度计，包含木芙蓉提取物80‑120ng/mL、海藻多糖30‑50ng/mL、黄芪甲苷25‑40ng/mL、人血白蛋白30‑50μg/mL、转铁蛋白10‑20μg/mL、谷氨酰胺3‑5nM/mL、血小板衍生因子10‑20ng/mL、表皮生长因子10‑20ng/mL、成纤维生长因子10‑18ng/mL、人胰岛素生长因子10‑20ng/mL、维生素A 3‑5ng/mL。

【技术特征摘要】
1.一种促间充质干细胞生长的培养基，其特征在于，包括无血清的基础培养基及在其基础上增添的添加剂，所述添加剂的成分以终浓度计，包含木芙蓉提取物80-120ng/mL、海藻多糖30-50ng/mL、黄芪甲苷25-40ng/mL、人血白蛋白30-50μg/mL、转铁蛋白10-20μg/mL、谷氨酰胺3-5nM/mL、血小板衍生因子10-20ng/mL、表皮生长因子10-20ng/mL、成纤维生长因子10-18ng/mL、人胰岛素生长因子10-20ng/mL、维生素A3-5ng/mL。2.根据权利要求1所述一种促间充质干细胞生长的培养基，其特征在于，包括无血清的基础培养基及在其基础上增添的添加剂，所述添加剂的成分以终浓度计，包含木芙蓉提取物80ng/mL、海藻多糖30ng/mL、黄芪甲苷25ng/mL、人血白蛋白30μg/mL、转铁蛋白10μg/mL、谷氨酰胺3nM/mL、血小板衍生因子10ng/mL、表皮生长因子10ng/mL、成纤维生长因子10ng/mL、人胰岛素生长因子10ng/mL、维生素A3ng/mL。3.如权利要求1所述一种促间充质干细胞生长的培养基，其特征在于，所述添加剂的成分以终浓度计，包含木芙蓉提取物120ng/mL、海藻多糖50ng/mL、黄芪甲苷40ng/mL、人血白蛋白50μg/mL、转铁蛋白20μg/mL、谷氨酰胺5nM/mL、血小板衍生因子20ng/mL、表皮生长因子20ng/mL、成纤维生长因子18ng/mL、人胰岛素生长因子20ng/mL、维生素A5ng/mL。4.根据权利要求1所述一种促间充质干细胞生长的培养基，其特征在于，所述添加剂的成分以终浓度计，包含木芙蓉提取物110ng/mL、海藻多糖40ng/mL、黄芪甲苷30ng/mL、人血白蛋白45μg/mL、转铁蛋白1...

【专利技术属性】
技术研发人员：饶焕文，林建平，萧自智，潘发伍，叶美娜，高媛媛，
申请(专利权)人：嘉文丽福建化妆品有限公司，
类型：发明
国别省市：福建,35