The invention discloses a method for extracting mesenchymal stem cells from placental chorion by a combined method. The method comprises the following steps: after pretreatment of placenta, the placental chorionic tissue is preliminarily decomposed by partial digestion method, and then the loose products after partial digestion are inoculated by tissue to prepare placental pluripotent stem cells through culture; and then the primary cells are passed on. The procedure of culture and collection was carried out. Finally, the samples were frozen by programmed cooling, and the temperature was reduced to
【技术实现步骤摘要】
一种利用联合法从胎盘绒毛膜中提取间充质干细胞的方法
本专利技术涉及细胞分离提取领域,具体涉及一种利用联合法从胎盘绒毛膜中提取间充质干细胞的方法。
技术介绍
间充质干细胞(MSCs),是一种具有自我复制能力和多向分化潜能的成体干细胞,在胚胎发育中来源于中胚层,之后几乎分布于机体的所有器官与组织中;MSCs具有分化为多种中胚层细胞系的潜能,如骨、软骨、肌腱、脂肪、肝、肾、皮肤、肌肉、神经甚至胰腺等,因而成为再生医学中器官修复等领域的理想种子细胞。间充质干细胞具有广阔的临床应用前景,其有三个主要来源:骨髓、脂肪组织、胎盘,其中,以胎盘中存量最多,也最接近胚胎干细胞;一直以来由于对胎盘干细胞知识缺乏了解,使得胎盘分娩后便当做医疗废物丢弃,若充分利用这些干细胞资源,便能够造福于万千家庭、造福于社会;近年来,随着对胎盘研究的深入,不仅充分认识并利用了脐带血,也充分认识了胎盘类干细胞在医学上的重要作用,胎盘中不仅含有丰富的造血干资源,也含有丰富的间充质干细胞;胎盘是母体与胎儿间营养交换的通道,也形成胎盘屏障;母体面以底蜕膜将母体与胎儿分开,胎儿面则以羊膜与胎儿隔离开,并通过脐带连通胎儿,为胎儿提供营养;胎盘绒毛膜构成胎盘的胎儿部分,是胎盘的主要部分,其中含有丰富的间充质干细胞资源,目前,胎盘间充质干细胞的提取主要有组织团法、消化法两种,但两者各有弊端:组织团法不能将组织块内部的细胞爬出,造成培养成功率低、形态较差且收获率低;消化法则存在过度消化,破坏细胞的正常状态,严重影响细胞的活性;因此亟待需要有新的有效的胎盘干细胞提取方法。
技术实现思路
为了解决现有充质干细胞提取收获 ...
【技术保护点】
1.一种利用联合法从胎盘绒毛膜中提取间充质干细胞的方法,其特征在于,包括以下步骤:步骤一、选取胎盘,并对胎盘进行检测,确保病毒检测结果全阴性;剪取胎盘上新鲜的绒毛膜样品组织;步骤二、将剪取获得的样品组织置于磷酸缓冲盐溶液中进行清洗;步骤三、挑取颜色鲜艳的清洗好的样品组织,去除可见大血管、残余胎盘隔组织,再将样品组织剪成样品组织碎片;步骤四、在样品组织碎片中加入消化液,并进行摇晃消化;待消化进行到30%‑70%时,再通过培养液终止,获得其中松散的组织块;步骤五、将松散的组织块平铺接种于培养容器中,静置;步骤六、待培养容器中的组织块的周围干燥后,加入培养液,以使得组织块与培养液充分接触,再将其放入到培养箱中进行培养;步骤七、待组织块周围细胞形成密集集落时,进行传代培养;步骤八、传代培养完成后,采用磷酸缓冲盐溶液进行清洗,再重组消化酶或胰酶消化后,待细胞变圆、脱落,停止消化,终止后收集细胞悬液;将细胞悬液去上清,将细胞沉淀重悬,按每皿不低于2.0×105个细胞接种于平皿中;步骤九、待细胞长至80‑90%密度时,获得间充质干细胞,进行冻存。
【技术特征摘要】
1.一种利用联合法从胎盘绒毛膜中提取间充质干细胞的方法,其特征在于,包括以下步骤:步骤一、选取胎盘,并对胎盘进行检测,确保病毒检测结果全阴性;剪取胎盘上新鲜的绒毛膜样品组织;步骤二、将剪取获得的样品组织置于磷酸缓冲盐溶液中进行清洗;步骤三、挑取颜色鲜艳的清洗好的样品组织,去除可见大血管、残余胎盘隔组织,再将样品组织剪成样品组织碎片;步骤四、在样品组织碎片中加入消化液,并进行摇晃消化;待消化进行到30%-70%时,再通过培养液终止,获得其中松散的组织块;步骤五、将松散的组织块平铺接种于培养容器中,静置;步骤六、待培养容器中的组织块的周围干燥后,加入培养液,以使得组织块与培养液充分接触,再将其放入到培养箱中进行培养;步骤七、待组织块周围细胞形成密集集落时,进行传代培养;步骤八、传代培养完成后,采用磷酸缓冲盐溶液进行清洗,再重组消化酶或胰酶消化后,待细胞变圆、脱落,停止消化,终止后收集细胞悬液;将细胞悬液去上清,将细胞沉淀重悬,按每皿不低于2.0×105个细胞接种于平皿中;步骤九、待细胞长至80-90%密度时,获得间充质干细胞,进行冻存。2.根据权利要1所述的利用联合法从胎盘绒毛膜中提取间充质干细胞的方法,其特征在于,步骤一中选取好的胎盘需经过乙肝、丙型肝炎、梅毒、艾滋、巨细胞病毒的检测,确保全阴性。3.根据权利要1所述的利用联合法从胎盘绒毛膜...
【专利技术属性】
技术研发人员:刘召青,年泗利,张亮亮,齐念民,
申请(专利权)人:上海坤爱生物科技股份有限公司,
类型:发明
国别省市:上海,31
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