The invention discloses a method of cell proliferation in vitro and separated the dry deciduous teeth, the teeth, teeth cutting method includes teeth stem cells, stem cells proliferation of deciduous teeth and other steps, the beneficial effect of the invention is: using this method to obtain purified human deciduous teeth stem cells under certain conditions can be specific to the types of cells including osteoblasts, adipocytes, neural cell differentiation, provide a broader space for the study of dental pulp stem cells.
【技术实现步骤摘要】
脱落乳牙干细胞的分离与体外增殖方法
本专利技术涉及干细胞
,尤其是涉及一种脱落乳牙干细胞的分离与体外增殖方法,通过人脱落乳牙干细胞进行分离,然后利用有限稀释法克隆纯化人脱落乳牙干细胞,并使人脱落乳牙干细胞得到增殖。
技术介绍
干细胞是一种具有多分化潜能和自我复制功能的早期未分化细胞。根据细胞来源可将干细胞分为胚胎干细胞和成体干细胞。胚胎干细胞是最原始的干细胞,它位于个体发育的顶端,能够分化为组成机体的所有类型的细胞,进而形成机体的任何组织和器官,具有发育的全能性。但是胚胎干细胞的研究利用牵涉到一定的伦理问题。成体干细胞是成体组织中具有自我更新能力和定向分化潜能的细胞,其存在使组织和器官保持生长和衰退的动态平衡。大量研究表明成体干细胞已经可以从多种组织器官中分离培养出来,其多向分化潜能及可塑性也得到了公认。随着干细胞研究的进一步发展,人们发现成体干细胞还存在于口腔组织的牙髓、牙周膜、牙胚、口腔上皮等组织。这些组织来源的成体干细胞同样具有多向分化潜能,可以向骨、软骨、脂肪等组织分化,但在细胞生物学特性以及分化潜能上又存在一定区别。其中,人脱落乳牙干细胞具有离成熟细胞近、可塑性强、免疫排斥小以及高度增殖能力和多向分化的潜能。人脱落乳牙干细胞作为一种有很大潜能的干细胞,在牙髓干细胞的研究中有较大的应用前景。因此,人脱落乳牙组织的分离和体外增殖成为干细胞分化的基础,如何有效得获得人脱落乳牙干细胞成为研究的关键。为了解决上述问题,选择并收集6-10岁健康儿童因滞留而拔除的,无牙体牙髓疾病的乳牙,使用酶消化分离法得到原代人脱落乳牙干细胞,再利用有限稀释克隆法分离纯 ...
【技术保护点】
脱落乳牙干细胞的分离与体外增殖方法,其特征在于,该方法包括以下步骤:步骤a,选择并收集6‑10岁健康儿童因滞留而拔除的,无牙体牙髓疾病的乳牙,拔除后立即放入装有含PBS试剂的试管中保存备用,在4小时内进行取材;步骤b,取出所述乳牙,无菌条件下沿牙齿长轴劈开牙冠,取出冠根部牙髓,在超净台内切除根尖部的牙髓组织,置于含有不完全培养液的EP管内,用无菌PBS反复洗涤后放入培养皿中,在培养皿中用眼科剪将牙髓组织剪成小块,并置于无菌离心管中;步骤c,将所述牙髓组织消化,离心分离,再经培养获得原代人脱落乳牙干细胞;步骤d,采用有限稀释法克隆纯化所述原代人脱落乳牙干细胞,使所述原代人脱落乳牙干细胞增殖。
【技术特征摘要】
1.脱落乳牙干细胞的分离与体外增殖方法,其特征在于,该方法包括以下步骤:步骤a,选择并收集6-10岁健康儿童因滞留而拔除的,无牙体牙髓疾病的乳牙,拔除后立即放入装有含PBS试剂的试管中保存备用,在4小时内进行取材;步骤b,取出所述乳牙,无菌条件下沿牙齿长轴劈开牙冠,取出冠根部牙髓,在超净台内切除根尖部的牙髓组织,置于含有不完全培养液的EP管内,用无菌PBS反复洗涤后放入培养皿中,在培养皿中用眼科剪将牙髓组织剪成小块,并置于无菌离心管中;步骤c,将所述牙髓组织消化,离心分离,再经培养获得原代人脱落乳牙干细胞;步骤d,采用有限稀释法克隆纯化所述原代人脱落乳牙干细胞,使所述原代人脱落乳牙干细胞增殖。2.根据权利要求1所述的脱落乳牙干细胞的分离与体外增殖方法,其特征在于:所述步骤c中还包括以下分步骤:分步骤1,在所述无菌离心管中加入3mg/mlI型胶原酶和4mg/mlDispase酶各1ml,将所述无菌离心管置入恒温(37℃)水浴箱中消化,多次摇晃,直至所述牙髓组织呈絮状;分步骤2,所述牙髓组织经消化后,在所述无菌离心管中以1000r/min离心10分钟,使用所述PBS试剂洗涤2次且每次离心2分...
【专利技术属性】
技术研发人员:张建国,周彦恒,
申请(专利权)人:北京泰盛生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:北京,11
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