治疗癌症的方法和组合物技术

发明专利技术人已经在BALB/c小鼠中开发了转移性4T1乳腺肿瘤模型。他们已经证明，异种胚胎干细胞与丙戊酸(VPA)联合接种产生针对乳腺癌的更高的抗肿瘤反应并抑制转移发展。他们确定，与单独使用ESC或iPSC相比，这些反应仅通过在治疗方案中添加丙戊酸实现。因此，本发明专利技术人提供了治疗表达胚胎抗原的癌症的新治疗策略。因此，本发明专利技术涉及治疗患有癌症的受试者的方法，包括以下步骤：向所述受试者同时、分别或依次施用治疗量的作为组合制剂的i)多能细胞群和ii)选自激活MHC表达的组的化合物。

Methods and compositions for the treatment of cancer

The inventor has developed a metastatic 4T1 breast cancer model in BALB/c mice. They have demonstrated that co-inoculation of xenogeneic embryonic stem cells with valproic acid (VPA) produces a higher anti-tumor response against breast cancer and inhibits metastasis. They determined that these reactions were achieved only by adding valproic acid to the treatment regimen, compared with ESC or iPSC alone. Therefore, the inventor provides a new therapeutic strategy for cancer expressing embryonic antigen. Therefore, the present invention relates to a method for treating cancerous subjects, including the following steps: i) pluripotent cell populations and I i) compounds selected from groups that activate MHC expression are administered simultaneously, individually or sequentially to the subjects as combinations of agents.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】治疗癌症的方法和组合物
本专利技术属于肿瘤学领域，更具体地，本专利技术涉及一种抗癌疫苗联合疗法。更具体地，本专利技术涉及产生包含多能细胞的组合物的方法，所述多能细胞呈递多种新抗原，并且其可用于制备癌细胞疫苗。
技术介绍
大多数癌症是由在发育和组织维持期间所需的正常干细胞的DNA复制期间产生的随机突变引起的。癌症干细胞(CSC)在动态状态中是异质性的并且在表观遗传上是塑性的。由CSC产生的肿瘤细胞由同时积累的存在于癌基因、肿瘤抑制基因和信号传导途径上的突变驱动，导致肿瘤进化的克隆波。在“克隆-进化模型”中，突变的类型随着癌症的发展而变化，因此个体癌细胞变得越来越变化和侵略性。在早期肿瘤发展中获得的突变在晚期疾病中持续存在。随着时间的推移，这些突变导致寡克隆肿瘤扩增，以及与进行性免疫编辑和耗尽相关的癌细胞抗性。癌症的突变特征与基因组的不稳定性高度相关。突变产生具有免疫原性表位的新型非自身新抗原。然而，由于肿瘤微环境通常是免疫抑制的，宿主免疫系统通常不能正确地破坏这些细胞并对抗这些癌症。免疫检查点抑制剂的T细胞应答报告的临床益处与肿瘤的突变率和突变谱密切相关。癌症干细胞(CSC)代表了一小部分自我更新的癌细胞，这些细胞有助于肿瘤持续存在和复发，因为它们经常对常规治疗产生抗性。在各种来源的实体瘤中描述了最初在造血系统恶性肿瘤中发现的CSC，包括乳腺癌、成胶质细胞瘤、前列腺癌、结肠癌、头颈部鳞状细胞癌、卵巢癌、膀胱癌、肺癌、胰腺癌。CSC的特征在于在小鼠中形成异种肿瘤和肿瘤发生能力。此外，它们具有放射性和化学抗性，导致患者缺乏治疗性反应。因此，在治疗完成后，CSC持续性地引起肿瘤复发和/或转移。一些出版物已经表明了肿瘤发病机制与胚胎干细胞(ESC)状态之间的分子联系。CSC表达大量胚胎抗原，所述胚胎抗原也由人胚胎干细胞(hESC)和人诱导的多能干细胞(hiPSC)表达。首先，OCT4、NANOG和SOX2转录因子是主要调节因子，它们作为高度整合网络(与c-myc和多梳(polycomb)网络相关)的一部分一起工作，使用表观遗传机制通过组蛋白修饰和DNA甲基化重塑染色质，以驱动体细胞转变为CSC或iPSC。这些因子在正常成体干细胞中不存在。胚胎干细胞样基因表达和定义人多能干细胞(ESC/IPSC)身份的多梳调控基因的低表达在低分化的人肿瘤中与临床结果差和化疗后远处复发相关，无论癌症来源如何(乳腺癌、胰腺癌、膀胱癌、肺癌、前列腺癌、成神经管细胞瘤...)。具有“干性”特征的低分化肿瘤与具有上皮-间充质“EMT”标志物的癌细胞的间充质性状、低水平的MHC-I表达、具有促肿瘤炎性白细胞的免疫抑制性肿瘤微环境、基质细胞和巨噬细胞相关。经历EMT的肿瘤细胞获得干性性质并且成为具有在整个生物体中非常早地迁移且长时间持续处于休眠期的能力的CSC。CSC充当种子储库并补充肿瘤隔室。它们还通过自我更新扩增，传播到不同的组织，产生转移。这些CSC具有多能胚胎基因特征，并且对抗癌药物和放疗具有抗性。由于上述原因(免疫抑制性微环境)，它们也逃避了免疫抗肿瘤防御。据报道，胎儿组织可用于使小鼠免疫，并且这可以诱导移植肿瘤的排斥，包括皮肤癌、肝癌和胃肠道癌。这种反应可以通过以下事实来解释：这些肿瘤细胞表达大量癌胚抗原。迄今为止，已经建立了几种人类癌症疫苗试验，以靶向胚胎抗原，例如癌胚抗原(CEA)、甲胎蛋白或癌症/睾丸抗原。不幸的是，已经证明单独靶向一种抗原不足以产生强的抗肿瘤免疫应答以介导肿瘤排斥，因为逃逸突变体的快速出现导致单价癌症疫苗的普遍低效。最近对干细胞在再生医学中的潜力的兴趣使得定义明确的ESC系以及在表型上和功能上与ESC相似的iPSC得以广泛应用。癌症相关的表观遗传畸变是癌症干细胞的特征性状，涉及表观遗传机制的每个组分(DNA甲基化、组蛋白修饰、非编码RNA、特别是microRNA表达)。目前，几种具有肿瘤抑制活性的表观遗传修饰药物在肿瘤学中用于临床，包括低甲基化剂如阿扎胞苷或地西他滨，以及组蛋白脱乙酰基酶抑制剂如伏立诺他或罗米地辛。使用这些药物，可以重新编程癌细胞。此外，表观遗传药物对肿瘤微环境的表观遗传重编程是一种癌症治疗的有吸引力的操作方法，因为有明确证据表明癌症发展中癌症-基质的相互作用。因此，仍然需要新的方法来预防和/或治疗具有干细胞特征的癌症。这些癌症表达与ESC/IPSC共有的一组胚胎基因(即，也称为新抗原)，尤其包括胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、结肠癌、肺癌、肾癌、前列腺癌、成神经管细胞瘤、胆管癌、肝癌、慢性和急性白血病和骨髓瘤。这类癌症主要与间充质样特征相关，其需要开发特异性靶向CSC的疗法以改善癌症患者的存活并提高生活质量。特别地，这样的策略应导致恢复允许的抗肿瘤微环境(肿瘤微环境通常是免疫抑制的，因此应重建为具有免疫活性)和免疫抗CSC应答。本专利技术的主题全部或部分地解决了这个需求和其他需求。专利技术简述本专利技术基于专利技术人确定，当向患者施用HDACi(组蛋白脱乙酰基酶抑制剂)与含有目标抗原或靶向目标抗原的免疫原性组合物的组合时，任选随后用HDACi进一步治疗，HDACi可用于针对所述目标抗原刺激患者的免疫应答。免疫原性组合物旨在允许针对目标抗原的免疫应答的发生。使用HDACi作为佐剂对于治疗癌症特别令人感兴趣，特别是对于具有干细胞特征的癌症。本专利技术尤其由权利要求限定。专利技术详述专利技术人已经表明，将HDACi与多能细胞群一起使用导致免疫系统针对肿瘤细胞的协同作用和有效应答。实际上，专利技术人进一步假设，多能干细胞如hESC或hiPSC可用作疫苗以产生针对肿瘤细胞共有的各种胚胎抗原的免疫应答。他们发现，用hESC或hiPSC联合一种能够诱导MHCI的化合物(如丙戊酸)免疫接种小鼠能够诱导针对乳腺癌的有效免疫和抗肿瘤反应，而没有副作用和自身免疫疾病的迹象。此外，他们发现，这种联合方案与肺转移的显著抑制有关。令人惊讶的是，他们证实，与单独使用ESC或iPSC相比，通过在治疗方案中加入HDACI，特别是丙戊酸，可以极大改进这些反应。用于改进免疫应答的HDACi本专利技术涉及增强患者中疫苗组合物的功效的方法，包括向患者施用HDACi和所述疫苗组合物。特别地，可以在疫苗组合物中加入HDACi。功效增强可以理解为疫苗组合物的免疫原性增强，针对疫苗组合物的免疫应答增强或由免疫组合物产生的免疫应答增强。这可以与不存在HDACi时产生的免疫应答进行比较。疫苗组合物包括旨在使患者产生针对一个或多个目标抗原的免疫应答的免疫原性元件。目标抗原是期望免疫应答的任何抗原，包括来自自身的(例如来自癌细胞的抗原)或外源的任何肽、蛋白质，例如细菌、病毒或寄生虫蛋白，其他种类的抗原，例如核酸、糖、脂多糖等。因此，本专利技术涉及HDACi作为佐剂，特别是用于增强针对疫苗组合物的免疫应答的用途，并且涉及用作佐剂，或用于增强针对疫苗组合物的免疫应答的HDACi。本专利技术还涉及HDACi在制备含有一种或多种目标抗原的疫苗组合物中的用途，所述疫苗组合物旨在使患者产生针对目标抗原的免疫应答。当疫苗组合物是癌症疫苗组合物，即含有由癌细胞表达的目标抗原时，本文公开的方法和用途特别令人感兴趣。特别地，该方法和用途非常适用于实体瘤癌症。实际上，在这些类型的癌症中，免疫微环境特别是免疫抑制的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种治疗受试者的方法，包括向所述受试者同时、分别或依次施用治疗有效量的(i)组蛋白脱乙酰基酶抑制剂(HDACi)和(ii)含有免疫原性元件的疫苗组合物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.05.25 EP 16305607.01.一种治疗受试者的方法，包括向所述受试者同时、分别或依次施用治疗有效量的(i)组蛋白脱乙酰基酶抑制剂(HDACi)和(ii)含有免疫原性元件的疫苗组合物。2.权利要求1所述的方法，进一步包括在施用所述疫苗组合物后一段时间施用HDACi的步骤。3.权利要求1或2任一项所述的方法，其中所述疫苗组合物中的免疫原性元件选自：a.目标抗原；b.来自细胞组合物的提取物，其中所述组合物的细胞表达目标抗原；c.细胞组合物，其中所述组合物的细胞表达目标抗原；d.包含已经通过目标抗原体外引发的抗原呈递细胞的细胞组合物；e.已经通过暴露于呈递目标抗原的抗原呈递细胞针对目标抗原体外引发的T细胞淋巴细胞。4.权利要求1-3任一项所述的方法，其中所述目标抗原是癌细胞表达的抗原，尤其是癌细胞表达的新抗原。5.权利要求1-4任一项所述的方法，其中所述治疗是治疗性治疗。6.权利要求1-4任一项所述的方法，其中所述治疗是预防性治疗。7.一种生产细胞组合物的方法，包括以下步骤：i)在维持细胞多能性的这种条件下，在扩增步骤期间诱导所述群体中的MHC-I抗原呈递的试剂存在下，扩增多能细胞，ii)将扩增的细胞暴露于将使细胞灭活的灭活剂，同时保持细胞被膜的完整性，iii)回收并调节扩增的灭活细胞。8.权利要求7所述的方法，其中所述多能细胞群选自：人胚胎干细胞、诱导的多能干细胞(iPS)、同种异体、异种、自体或同基因干细胞。9.权利要求7或8所述的方法，其中所述多能细胞在扩增期间暴露于诱变剂以在所述群体的细胞中诱导基因突变。10.权利要求9所述的方法，其中所述诱变剂选自化学诱变剂和辐射诱变剂(X射线、UV辐射)。11.权利要求7-10任一项所述的方法，其中所述诱变剂选自ENU、活性氧、脱氨剂、多环芳烃、芳香胺和叠氮化钠。12.权利要求9所述的方法，其中所述诱变剂是烷化剂，尤其是ENU，并且其中所述多能细胞暴露于诱变剂持续进行至少15天，更优选至少30天，更优选至少45天，更优选至少60天。13.权利要求7-12任一项所述的方法，其中所述诱导MHC-I抗原呈递的试剂是组蛋白脱乙酰基酶抑制剂(HDACi)。14.权利要求13所述的方法，其中所述组蛋白脱乙酰基酶抑制剂选自丙戊酸(VPA)、伏立诺他、帕比司他、吉维斯特、贝利司他、恩替诺特、莫西诺司他、Practinostat、西达本胺、奎司他斯特和阿昔诺司他。15.权利要求7-14任一项所述的方法，其中所述组合物包含DNA甲基转移酶抑制剂，尤其是5-氮杂胞苷。16.权利要求7-15任一项所述的方法，其中所述细胞通过暴露于致死剂量的辐射灭活。17.权利要求7-16任一项所述的方法，其中所述回收包括洗涤并将细胞重悬于合适缓冲剂的步骤。18.权利要求7-17任一项所述的方法，其中所述调节包括冷冻或冻干细胞的步骤。19.包含多能细胞的细胞组合物，其中在扩增后，所述群体中的细胞在选自以下的至少三个基因中呈现至少0.1％的突变率：TP5...

【专利技术属性】
技术研发人员：F·格里瑟利，A·蒂汉，A·贝纳瑟格里瑟利，
申请(专利权)人：国家医疗保健研究所，巴黎第十一大学，雷卡尔巴黎大学，巴黎公共救济院，
类型：发明
国别省市：法国,FR