针对人血管平滑肌细胞L型钙通道和血管紧张素1型受体的嵌合型二价降压疫苗及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种针对人血管平滑肌细胞L型钙通道和血管紧张素1型受体的嵌合型二价降压疫苗及其应用，它包括由180个或者240个重组乙肝核心蛋白单体分子自我组装形成的二十面体病毒样颗粒，所述重组乙肝核心蛋白单体分子以免疫原性载体为骨架+高血压发病相关靶分子表位组合。本发明专利技术根据乙肝核心抗原的分子结构及免疫学特性，结合目前高血压疫苗研制的实际缺陷，设计出了一种针对多靶点的治疗性降压疫苗，该疫苗能诱导产生分别针对多种治疗性靶点的特异性抗体，发挥联合降压效应，有效降低了高血压动物模型的血压。

Chimeric bivalent hypotensive vaccine targeting L-type calcium channel and angiotensin-1 receptor of human vascular smooth muscle cells and its application

The invention discloses a chimeric bivalent hypotensive vaccine for L-type calcium channel and angiotensin-1 receptor of human vascular smooth muscle cells and its application, which comprises icosahedral virus-like particles formed by self-assembly of 180 or 240 recombinant hepatitis B core protein monomers. The recombinant hepatitis B core protein monomer molecule takes the immunogenic carrier as the skeleton and the pathogenesis of hypertension. Target-closing epitope combinations. According to the molecular structure and immunological characteristics of hepatitis B core antigen and combined with the actual defects of the current development of hypertension vaccine, a therapeutic hypotensive vaccine targeting at multiple targets is designed. The vaccine can induce specific antibodies targeting at different therapeutic targets, exert combined hypotensive effect and effectively reduce the blood pressure of hypertensive animal models.

【技术实现步骤摘要】
针对人血管平滑肌细胞L型钙通道和血管紧张素1型受体的嵌合型二价降压疫苗及其应用
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种针对人血管平滑肌细胞L型钙通道和血管紧张素1型受体的嵌合型二价降压疫苗及其应用。
技术介绍
高血压是最常见的慢性疾病，目前已经成为心血管疾病、慢性肾脏疾病和糖尿病的首要危险因素，其脑卒中、心肌梗死、心力衰竭及慢性肾脏病等主要并发症，不仅致残、致死率高，而且严重消耗医疗和社会资源，给家庭和国家造成沉重负担。在最近数十年，我国高血压患病人数急剧增加，目前中国高血压患病率25.2％，全国已有2.7亿高血压患者(2014年)。虽然血管紧张素II受体阻断剂、血管紧张素转换酶抑制剂以及钙拮抗剂等化学药物已经在临床广泛使用并且展现出良好的疗效，但是由于这类化学药物往往需要每天服药甚至终身服药，因此化学药物的治疗依从性不佳，这也导致目前我国高血压人群的血压控制率仅为8％，远远落后于美国(35％)、加拿大(66％)等欧美发达国家。与传统化学药物相比，疫苗接种能够诱导针对高血压相关靶分子的特异性抗体，减少给药频率，从而为当前的困境提供一种可能的解决方案。目前研究中的高血压疫苗主要针对肾素-血管紧张素系统，且多为针对单一靶点的疫苗。瑞士Cytos公司研制的针对血管紧张素II的CYT006-AngQb疫苗被认为是极有希望的降压疫苗。但是在后续临床试验中，与安慰剂组相比，该疫苗将受试者的日间平均动态血压从基线水平下调-9/-4mmHg，这一降压幅度还不能完全满足临床实际要求。据分析，这种情况可能是由于三个方面的因素导致：首先，针对血管紧张素II疫苗免疫会诱导肾素-血管紧张素系统反馈激活，这可能在一定程度上削弱了疫苗的降压效应；其次，原发性高血压基本上是多种因素的联合作用效果，而实际上针对多个靶点的联合用药往往能获得更佳的预后效果。该疫苗仅针对单一靶点，可能导致无法获得理想的疗效；最后，CYT006-AngQb疫苗作为一种化学偶联疫苗，其疫苗载体颗粒表面展示的血管紧张素II表位密度不足，载体蛋白表位大量暴露于机体免疫系统，导致该疫苗主要诱导产生的是针对载体颗粒的抗体，而不是期待的针对RAS系统成分血管紧张素II的抗体，这可能进一步制约疫苗的疗效。
技术实现思路
本专利技术的目的在针对现有的血管紧张素II的治疗性高血压疫苗面临单一靶点、肾素-血管紧张素系统反馈激活、以及疫苗载体的抗体滴度过高等问题，提供了一种针对人血管平滑肌细胞L型钙通道和血管紧张素1型受体的嵌合型二价降压疫苗。为实现上述目的，本专利技术所设计一种针对人血管平滑肌细胞L型钙通道和血管紧张素1型受体的嵌合型二价降压疫苗，其特征在于：所述嵌合型二价疫苗包括由180个或者240个重组乙肝核心蛋白单体分子自我组装形成的二十面体病毒样颗粒，所述重组乙肝核心蛋白单体分子以免疫原性载体为骨架+高血压发病相关靶分子表位组合，即为：将高血压发病相关靶分子表位组合的氨基酸序列插入在免疫原性载体氨基酸序列中第76至82位氨基酸之间任意一个位点中，或者，将高血压发病相关靶分子表位组合替换免疫原性载体氨基酸序列中第76至82位氨基酸之间的一段任意长度的氨基酸序列；其中，免疫原性载体的氨基酸序列如SEQIDNo.1，高血压发病相关靶分子表位组合的氨基酸序列含有两种高血压发病相关靶分子表位的氨基酸序列。高血压的发病为多因素交互作用的结果，交感神经系统亢进、RAS系统激活、血管活性物质异常改变以及血管重构等机制被认为在高血压发病过程中发挥重要作用。以参与高血压发病过程的相关分子为治疗靶点研制药物，是抗高血压药物研发的重要策略。瑞士Cytos公司研制的CYT006-AngQb疫苗正是以RAS系统的重要成分血管紧张素II(序列为DRVYIHPF)为治疗靶点。本专利技术以高血压发病相关分子(例如血管紧张素1型受体和血管平滑肌细胞L型钙通道)为靶点设计抗原表位(本专利技术称之高血压发病相关靶分子表位)，构建降压疫苗。进一步地，所述高血压发病相关靶分子表位组合包含一个以上人血管平滑肌细胞L型钙通道抗原表位和一个以上人血管紧张素1型受体抗原CQ10表位的组合多肽；其中，所述人血管紧张素1型受体抗原CQ10表位氨基酸序列为AFHYESQ，如SEQIDNo.2所示；所述人血管平滑肌细胞L型钙通道抗原表位氨基酸序列为VPAEDDPSPC、DSSKQTEAECK、DSHTEDKGPI和CAPESEPSNSTE中任意一种，它们分别如SEQIDNo.3、SEQIDNo.4、SEQIDNo.5和SEQIDNo.6所示，简称分别为VC10、DK11、DI10、CE12。再进一步地，所述人血管平滑肌细胞L型钙通道抗原表位氨基酸序列为CAPESEPSNSTE，如SEQIDNo.6所示，简称CE12表位。再进一步地，所述高血压发病相关靶分子表位组合两个人血管平滑肌细胞L型钙通道抗原表位和两个人血管紧张素1型受体抗原CQ10表位通过连接短肽交替连接而成，其氨基酸序列为CAPESEPSNSTEGSGAFHYESQGSGCAPESEPSNSTEGSGAFHYESQ，如SEQIDNo.7所示；上述序列替换免疫原性载体氨基酸序列中第79至80位氨基酸，形成重组乙肝核心蛋白单体分子HBcAg-CE12-CQ10-CE12-CQ10，其氨基酸序列如SEQIDNo.8所示。再进一步地，所述嵌合型二价疫苗还包括佐剂，所述佐剂为氢氧化铝。本专利技术还提供了一种上述嵌合型疫苗在制备治疗高血压药物中的应用。本专利技术原理：本专利技术针对血管紧张素1型受体表位CQ10的疫苗可以有效降低高血压动物模型的血压，并且提供有效的靶器官保护效应，而不反馈激活肾素-血管紧张素系统。为了获得更优的降压效果，经过反复对比、分析、实验研究，找到一段来源于L型CaV1.2钙通道的线性表位，它能诱导针对L型钙通道的特异性抗体，并且降低高血压动物模型的血压，可以作为另一个新的治疗性高血压疫苗靶点。乙肝核心抗原(HBcAg)是由180或者240个乙肝核心蛋白单体分子自我组装形成的二十面体病毒颗粒。乙肝核心蛋白的76-82位氨基酸构成的免疫优势区(majorimmunodominantregion,MIR)暴露于乙肝核心抗原颗粒的长刺突表面，极具免疫原性。MIR区成功容纳了多达238个氨基酸长度的外源序列，而不影响病毒颗粒自我组装，因此被认为是展示外源表位并且遮蔽载体蛋白表位的理想位置。本专利技术的有益效果：1、本专利技术根据乙肝核心抗原的分子结构及免疫学特性，结合目前高血压疫苗研制的实际缺陷，设计出了一种针对多靶点的治疗性降压疫苗，该疫苗能诱导产生分别针对多种治疗性靶点的特异性抗体，发挥联合降压效应，有效降低了高血压动物模型的血压。2、本专利技术以乙肝核心抗原病毒样颗粒为疫苗载体构建二价疫苗，该疫苗克服了现有疫苗的诸多不足，在动物模型中诱导的主要是针对插入表位的特异性抗体，而不是针对载体蛋白的抗体，同时二价疫苗在高血压动物模型展示出了优于传统偶联疫苗的降压效应。因此，本专利技术创新性的解决了上述问题，提供了一种新的治疗性高血压疫苗构建策略。3、本专利技术制备得到的二价疫苗在多种高血压动物模型中均展示了良好的降压效果，因此该疫苗可以应用于制备治疗高血压药物。附图说明图1为实施例4中二价HBcAg-CE12本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种针对人血管平滑肌细胞L型钙通道和血管紧张素1型受体的嵌合型二价降压疫苗，其特征在于：所述嵌合型二价疫苗包括由180个或者240个重组乙肝核心蛋白单体分子自我组装形成的二十面体病毒样颗粒，所述重组乙肝核心蛋白单体分子以免疫原性载体为骨架+高血压发病相关靶分子表位组合，即为：将高血压发病相关靶分子表位组合的氨基酸序列插入在免疫原性载体氨基酸序列中第76至82位氨基酸之间任意一个位点中，或者，将高血压发病相关靶分子表位组合替换免疫原性载体氨基酸序列中第76至82位氨基酸之间的一段任意长度的氨基酸序列；其中，免疫原性载体的氨基酸序列如SEQ ID No.1，高血压发病相关靶分子表位组合的氨基酸序列含有两种高血压发病相关靶分子表位的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
1.一种针对人血管平滑肌细胞L型钙通道和血管紧张素1型受体的嵌合型二价降压疫苗，其特征在于：所述嵌合型二价疫苗包括由180个或者240个重组乙肝核心蛋白单体分子自我组装形成的二十面体病毒样颗粒，所述重组乙肝核心蛋白单体分子以免疫原性载体为骨架+高血压发病相关靶分子表位组合，即为：将高血压发病相关靶分子表位组合的氨基酸序列插入在免疫原性载体氨基酸序列中第76至82位氨基酸之间任意一个位点中，或者，将高血压发病相关靶分子表位组合替换免疫原性载体氨基酸序列中第76至82位氨基酸之间的一段任意长度的氨基酸序列；其中，免疫原性载体的氨基酸序列如SEQIDNo.1，高血压发病相关靶分子表位组合的氨基酸序列含有两种高血压发病相关靶分子表位的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述针对人血管平滑肌细胞L型钙通道和血管紧张素1型受体的嵌合型二价降压疫苗，其特征在于：所述高血压发病相关靶分子表位组合包含一个以上人血管平滑肌细胞L型钙通道抗原表位和一个以上人血管紧张素1型受体抗原CQ10表位的组合多肽；其中，所述人血管紧张素1型受体抗原CQ10表位氨基酸序列为AFHYESQ，如SEQIDNo.2所示；所述人血管平滑肌细胞L型钙通道抗原表位氨基酸序列为VPAEDDPSPC、DSSKQTEAECK、DSHTEDKGPI和CAPES...

【专利技术属性】
技术研发人员：廖玉华，陈霄，吴海浪，邱志华，廖梦阳，
申请(专利权)人：武汉华纪元生物技术开发有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42