肽疫苗制剂制造技术

本发明专利技术涉及一种新型重建组合物、药物组合物以及包括所述重建组合物的组合试剂盒。本发明专利技术还涉及使用所述药物组合物和/或药物组合物用作药剂的治疗方法。还提供了使用本发明专利技术的重建组合物的一种用于重建干燥的肽的方法和制备药物组合物的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】肽疫苗制剂
本专利技术属于医学和免疫学领域。特别地，它涉及用于重建(reconstitute)用于疫苗接种的肽的新型组合物。该组合物特别适用于基于药物肽的疫苗的制备，所述疫苗进一步包括基于油的佐剂。专利技术背景临床结果表明，成功的治疗性疫苗接种的时代已经到来。由HPV引起的癌变前(premalignant)病变显示出病变消退，并且已经建立了延长存活期的临床益处。基于合成长肽的疫苗是最理想的疫苗平台之一。用于治疗持续感染和癌症的肽疫苗或基于肽的疫苗已经被开发，优选靶向免疫系统以清除表达病毒抗原、癌抗原和/或新生抗原(neo-antigen)的细胞。本领域了解，基于肽的疫苗能够激发有效的细胞免疫应答(CD4+和CD8+T细胞应答)，靶向能清除抗原表达细胞的抗原特异性细胞毒性T细胞。选择的抗原包括突变序列、选择的癌症睾丸抗原和病毒抗原(综述参见Melief等，2016JournalofClinicalInvestigation，Vol125(9)pages3401-3412)。基于肽的疫苗的挑战之一是提供物理上和化学上稳定的可注射溶液。这尤其是对包含多于一种肽和基于油的佐剂的基于肽的疫苗的一种挑战。可注射的疫苗溶液通常在给患者施用约1至3小时之前使用干的、大多为冻干肽作为起始材料现场制备。因此，需要允许干燥的肽快速重建的合适的重建组合物，所述干燥的肽随后能与基于油的佐剂容易地混合，从而得到给患者施用之前物理上和化学上稳定在室温储存至少2至3小时的乳剂。专利技术详述重建组合物本专利技术提供了用于重建用于疫苗接种的肽的新型组合物。该重建组合物包含或由以下组成：约60-80％v/v包含有机酸的水溶液、约5-10％v/v丙二醇(CAS：57-55-6)、约10-20％v/v低级醇和约5-10％v/v非离子亲水性表面活性剂。优选地，所述有机酸为弱有机酸，例如羧酸。弱有机酸在本文中应理解为具有介于-2和12之间的pKa(对数酸解离常数)的有机酸。优选地，所述弱有机酸具有1至10之间、或2至5之间或甚至3至4之间的pKa。所述弱有机酸可以是，但不限于任何选自由以下组成的组的羧酸：草酸(乙二酸)、柠檬酸(2-羟基丙烷-1，2，3-三羧酸)、苹果酸(2-羟基丁二酸)、碳酸(羟基甲酸)、苯甲酸(苯羧酸或苯基甲酸)、蚁酸(甲酸)、乳酸(2-羟基丙酸)、醋酸(乙酸)、酪酸(丁酸)、缬草酸(戊酸)、羊油酸(已酸)和初油酸(丙酸)。最优选地，所述有机酸是柠檬酸。所述有机酸可以以范围在约0.008至0.25M、或约0.01至0.2M、或0.05至0.1M的浓度存在于所述水溶液。本专利技术的重建组合物包含60-80％、或65％-75％或67％-72％、或约70％的所述水溶液，所述水溶液优选具有范围在0.05至0.2M、0.006至0.16M、0.008至0.12M、0.03至0.08M、或优选0.04至0.6M的所述有机酸的终浓度。低级醇在本文理解为具有与低级烷基或低级取代烷基的饱和碳原子键合的羟基官能团的有机化合物，其中低级烷基或低级取代烷基至多有6个碳原子并且优选具有结构CH3-(CH2)n-OH，其中n＝1、2、3、4或5。优选地，所述低级醇选自由以下组成的组：甲醇、乙醇、丙醇、丁醇和戊醇，最优选的所述低级醇是乙醇。所述非离子亲水性表面活性剂优选具有9至14之间，更优选地12至14之间的亲水亲油平衡值(HLB)。该表面活性剂可以是但不限于山梨聚糖的乙氧基化脂肪酸单-(特别是5个乙氧基)、二-或三-(特别是20个乙氧基)酯，其中所述脂肪酸优选选自由以下组成的组：油酸酯(例如乙氧基化山梨聚糖单油酸酯如吐温和/或乙氧基化山梨聚糖三油酸酯如吐温)、棕榈酸酯、硬脂酸酯(例如乙氧基化山梨聚糖三硬脂酸酯，如吐温)、异硬脂酸酯、月桂酸酯及其组合；乙氧基化脂肪醇(特别是5-10个乙氧基)(例如)、乙氧基化脂肪酸(特别是5-10个乙氧基)(例如Simulsol)、乙氧基化蓖麻油(特别是25-35个乙氧基)(例如ArlatoneArlatoneCremophor)及其组合。在本专利技术组合物的一个实施例中，所述非离子亲水性表面活性剂：a.是单、二或三酰甘油，优选乙氧基化三酰甘油，和/或b.具有在9和14之间的亲水-亲脂平衡值(HLB)值。使用公式HLB＝20(1-Is/Ia)计算所述HLB值，其中Is表示皂化指数或皂化值，并且Ia表示所述表面活性剂或所述表面活性剂混合物的酸指数或酸值。这两个指标，即皂化值和酸值，通过欧洲药典(版本8.8，分别是第2.5.6和2.5.1节)中描述的方法确定。在优选的实施方式中，所述非离子亲水性表面活性剂是乙氧基化蓖麻油，更特别是聚乙二醇35氢化蓖麻油(polyoxyl35hydrogenatedcastoroil)或聚氧乙烯甘油三蓖麻油酸酯35(polyoxyethyleneglyceroltriricinoleate35)(CASno.61791-12-6)(例如Cremophor)，其是聚氧乙烯化甘油三酯的混合物，该混合物通过蓖麻油与环氧乙烷以1∶35的摩尔比反应得到。优选地，本专利技术的重建组合物包含或由以下组成：约75％v/v在水中包含约0.1M柠檬酸水溶液的水溶液、约6.25％v/v丙二醇(CASno.57-55-6)、约12.5％v/v乙醇和约6.25％v/v聚氧乙烯甘油三蓖麻油酸酯35(CASno.61791-12-6)。换句话说，所述重建组合物在水中包含或由以下组成：约0.075M柠檬酸、约6.25％v/v丙二醇(CASno.57-55-6)、约12.5％v/v乙醇和约6.25％v/v聚氧乙烯甘油三蓖麻油酸酯35(CASno.61791-12-6)。另一种优选的重建组合物是包含或由以下组成：约75％v/v在水中包含约0.1M柠檬酸的水溶液、约6.25％v/v丙二醇(CASno.57-55-6)、约12.5％v/v乙醇、约6.25％v/v聚氧乙烯甘油三蓖麻油酸酯35(CASno.61791-12-6)和20μg/mLCpGODN1826，或包含或由在水中的以下组成：约0.075M柠檬酸、约6.25％v/v丙二醇(CASno.57-55-6)、约12.5％v/v乙醇、约6.25％v/v聚氧乙烯甘油三蓖麻油酸酯35(CASno.61791-12-6)和20μg/mLCpGODN1826。所述重建组合物特别适合于重建如下文在标题药物组合物下所定义的储存肽(即优选具有15至100个氨基酸之间的长度)。本领域知晓重建上述长度的肽时形成稳定溶液的困难，特别是在不同肽的情况下，即具有不同氨基酸序列并因此具有不同化学性质并表现出物理上不同的肽。因此，很难在一种以及相同溶液中重建它们。除此之外，如果这些肽中的一种或多种包含半胱氨酸，则必须处理形成SS-桥的趋势。尽管疫苗肽中可能需要分子内二硫键以具有免疫原性，但是分子间二硫桥形成是不被希望的，因为它导致溶液的不稳定。本专利技术人现已确定本专利技术的重建组合物特别适用于形成高度稳定的重建肽组合物，其中分子间二硫桥的量被最小化，而不损害所述重建肽的免疫原性。因此，本专利技术的重建组合物防止待如本文进一步定义的那样重建的所述肽的分子间二硫化物的形成，而不损害这些肽的免疫原性。优选地，本专利技术的重建组合物本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于重建干燥的肽的组合物，其中所述组合物包含或由以下组成：约60‑80％v/v的包含有机酸的水溶液、约5‑10％v/v丙二醇(CAS号57‑55‑6)、约10‑20％v/v低级醇和约5‑10％v/v非离子亲水性表面活性剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.06.20 EP 16175215.91.用于重建干燥的肽的组合物，其中所述组合物包含或由以下组成：约60-80％v/v的包含有机酸的水溶液、约5-10％v/v丙二醇(CAS号57-55-6)、约10-20％v/v低级醇和约5-10％v/v非离子亲水性表面活性剂。2.根据权利要求1的组合物，其中所述有机酸为柠檬酸，并且其中所述柠檬酸以约0.05-0.1M的浓度存在于所述水溶液中。3.根据权利要求1或2的组合物，其中所述低级醇为乙醇。4.根据权利要求1-3中任一项的组合物，其中所述非离子亲水性表面活性剂：a.是单酰甘油、二酰甘油或三酰甘油，优选乙氧基化三酰甘油，和/或b.具有在9和14之间的亲水-亲脂平衡(HLB)值。5.根据权利要求1-4中任一项的组合物，其中所述非离子亲水性表面活性剂是乙氧基化蓖麻油，优选聚氧乙烯甘油三蓖麻油酸酯35(CAS号61791-12-6)。6.根据权利要求4或5的组合物，其中所述组合物包含或由以下组成：约75％v/v的包含约0.1M柠檬酸的水溶液、约6.25％v/v丙二醇(CAS号57-55-6)、约12.5％v/v乙醇和约6.25％v/v聚氧乙烯甘油三蓖麻油酸酯35(CAS号61791-12-6)。7.药物组合物，其包含如权利要求1-6中任一项所述的重建组合物，并且进一步包含肽，优选长度为15至100个氨基酸的肽。8.根据权利要求7的药物组合物，进一步包含基于油的佐剂。9.根据权利要求7或8的药物组合物，其中所述组合物包含至少三种不同的肽。10.根据权利要求7-9中任一项的药物组合物，其中所述肽衍生自至少一种蛋白抗原，其中优选地，所述蛋白抗原是在感染的、癌变前的和/或癌变的细胞上特异性表达的蛋白抗原，并且其中优选地，所述蛋白抗原是人乳头瘤病毒蛋白。11.根据权利要求7-10中任一项的药物组合物，其中所述组合物不包含以下两种性质均满足的任何肽：a.碱性氨基酸残基的百分比等于酸性氨基酸残基的百分比，和b.疏水性氨基酸残基的百分比为48％或更高。12.根据权利要求7-11中任一项的药物组合物，其中所述肽包含或由以下组成：HPV免疫原性区E6和/或E7内的连续序列，优选HPV16血清型的HPV免疫原性区E6和/或E7内的连续序列。13.根据权利要求7-12的药物组合物，其中所述连续氨基酸序列包含表位，所述表位包含选自由SEQIDNO：20-104表示的氨基酸序列组成的组的连续氨基酸序列。14.根据权利要求7-13中任一项的药物组合物，其中所述肽是肽的混合物，其具有：至少2、3、4或5种包含或由选自SEQIDNO：1-5的序列组成的肽；至少2、3、4、5或6种包含或由以下组成的肽：选自由SEQIDNO：1-6表示的氨基酸序列组成的组的连续氨基酸序列；或至少2、3、4、5、6或7种包含或由以下组成的肽：选自由SEQIDNO：7-13表示的氨基酸序列组成的组的连续氨基酸序列。15.根据权利要求7-14中任一项的药物组合物，其中所述组合物包含或由以下组成：在...

【专利技术属性】
技术研发人员：G·E·米尔德，
申请(专利权)人：ISA制药有限公司，
类型：发明
国别省市：荷兰,NL