抗PSMA抗体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及与特异性结合PSMA的抗体或抗体片段相关的组合物和方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗PSMA抗体及其用途对相关申请的交叉引用本申请要求2016年4月13日提交的美国临时申请No.62/321975的优先权。本申请的内容通过引用完整并入本文。专利技术背景显示了14％的男性在其一生中诊断出患有前列腺癌；2012年已诊断出多达280万例前列腺癌，死亡率为每10万人21.4人。然而，目前的方法，例如手术、放射疗法、化学疗法和雄激素剥夺疗法，对那些晚期癌症具有有限的效果。迄今为止，根治性手术仍是前列腺癌的主要治疗方法。因此，新兴的精准医学，特别是基于肿瘤靶向抗体的精确医学，有望改善前列腺治疗的结果。前列腺特异性膜抗原(PSMA)已被确认为前列腺上皮细胞的特异性标志物(Horoszewicz,J.S.etal.(1987)AnticancerRes,7(5B):927-35；Israeli,R.S.,etal.(1993)CancerRes,53(2):227-30；Israeli,R.S.,etal.(1994)CancerRes,54(7):1807-11；Wright,G.L.,Jr.,etal.(1995)UrolOncol,1(1):18-28；Troyer,J.K.etal.(1995)IntJCancer,62(5):552-8；Sokoloff,R.L.,etal.(2000)Prostate,43(2):150-7)，为前列腺癌靶向精准医学的发展奠定了基础。组织学研究表明几乎所有前列腺癌都表达PSMA(Bostwick,D.G.,etal.(1998)Cancer,82(11):2256-61；Kusumi,T.,etal.(2008)PatholInt,58(11):687-94；Mannweiler,S.,etal.(2009)PatholOncolRes,15(2):167-72；Ananias,H.J.,etal.(2009)Prostate,69(10):1101-8)，并且具有较高恶性，或转移或对雄激素剥夺疗法具有抗性的癌症通常表达高得多的PSMA(Ananias,H.J.,etal.(2009)Prostate,69(10):1101-8；Wright,G.L.,Jr.,etal.(1995)UrolOncol,1(1):18-28；Wright,G.L.,Jr.,etal.(1996)Urology,48(2):326-34；Sweat,S.D.,etal.(1998)Urology,52(4):637-40)。尽管PSMA被认为是前列腺特异性标志物，但后来的研究表明肠细胞、肾近端小管和唾液腺也表达低水平的PSMA(Troyer,J.K.etal.(1995)IntJCancer,62(5):552-8)。值得注意的是，正常组织中的PSMA表达水平比肿瘤低100-1000倍(Sokoloff,R.L.,etal.(2000)Prostate,43(2):150-7)，并且这些正常组织通常不容易接近循环抗体(Troyer,J.K.etal.(1995)IntJCancer,62(5):552-8)，其进一步确保PSMA靶向成像和疗法的安全性。PSMA是谷氨酸羧肽酶(Pinto,J.T.,etal.(1996)ClinCancerRes,2(9):1445-51)，并且其在前列腺癌中的功能尚不清楚。然而，揭示高PSMA表达与癌症的高浸润有关。因此，PSMA靶向成像和治疗将显著改善前列腺癌的诊断和治疗结果。除前列腺外，PSMA在许多实体瘤中也在新血管系统中高度表达，而在正常血管中不存在(Sokoloff,R.L.,etal.(2000)Prostate,43(2):150-7)。因此，PSMA不仅是前列腺癌的理想标志物，也是其他实体瘤的新血管系统靶向治疗的理想标志物。抗体是肿瘤靶向的最有效工具，因为它们可以特异性识别肿瘤细胞上表达的肿瘤相关或肿瘤特异性抗原，这为基于抗体的精准医学开辟了道路，所述基于抗体的精准医学包括肿瘤靶向成像和治疗，如用于早期肿瘤检测的光学、PET、SPECT或MRI成像、抗体药物缀合物和放射疗法、用于癌症治疗的嵌合抗原受体T细胞或NK细胞疗法。不幸的是，目前市场上还没有PSMA抗体。因此，本领域需要用于治疗癌症的靶向PSMA的组合物和方法。本专利技术满足了这种未满足的需求。附图简述当结合附图阅读时，将更好地理解本专利技术的优选实施方案的以下详细描述。出于例示本专利技术的目的，在附图中显示了目前优选的实施方案。然而，应当理解，本专利技术不限于附图中所示实施方案的精确布置和手段。图1是显示gy1scFv特异性结合PSMA+细胞的图。使用流式细胞术在LNCapFGC细胞上研究PSMA上的ScFvgy1结合。简言之，用维尔烯(versene)溶液分离LNCapFGC细胞，用PBS清洗，并且与含有gy1的酵母上清液在冰上温育1小时，所述酵母上清液用FACS缓冲液稀释3倍。用冷PBS清洗细胞三次，然后在冰上与FACS缓冲液中的1:200稀释的抗-V5-Alexa647在黑暗中温育1小时。通过用冷PBS清洗三次除去未结合的抗V5-Alexa647，然后将细胞重悬于含有8μlvia-probe(BDbiosciences)的300μlFACS中。使用流式细胞术检测在LNCapFGC细胞上的Gy1结合，其中仅对活细胞进行门控和分析。流式细胞术对照包括：(1)未染色的细胞；和(2)用抗V5-Alexa647染色的细胞。实线灰色线表示未染色的细胞；黑色虚线表示抗V5-Alexa647染色的细胞；而黑色实线表示用gy1scFv，然后用抗V5-Alexa647染色的细胞。图2描绘了实验结果，证明gy1scFv在LnCap细胞上的抗原结合后显著内化。将LnCapFGC细胞接种在两个48孔板中。次日，将100μl含有gy1scFv的酵母上清液在室温在200μl体积(100μl上清液加100μl细胞培养基)中与4μl抗V5-Alexa467预温育1小时。然后，用培养基清洗细胞一次，并且与200μl含有gy1的培养基(100μl新鲜培养基加100μl预温育的gy1-染料培养基)分别于37℃和4℃在黑暗中温育1小时。作为对照，对于这两种温度，还将细胞与相同浓度的抗-V5-Alexa467一起温育。用冷PBS清洗两次后，将200μl胰蛋白酶加入孔中以在室温消化细胞表面蛋白30分钟。然后，向每个孔中加入500μl培养基以停止胰蛋白酶处理，并将细胞清洗两次，然后悬浮在含有via-probe的FACS缓冲液中用于流式细胞术分析。左图代表4℃温育细胞，并且右图代表37℃温育细胞。灰色实线代表仅用普通培养基温育的细胞；黑色虚线表示用抗V5-Alexa647温育的细胞；而黑色实线代表用预先形成的gy1-抗V5-Alexa647复合物温育的细胞。图3描绘了测量gy1scFv亲和力的实验结果。使用捕获ELISA测量Gy1scFv亲和力。简言之，将抗Flag抗体(Sigma)在ELISA板上于4℃在PBS中包被过夜。将板清洗并用PBSTM封闭，并与一式三份3倍连续稀释的gy1scFv一起温育。然后清洗平板并与生物素化的PSMA一起温育，并用链霉抗生物素蛋白-HRP检测结合，并使用TMB，然后使用停止缓冲本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.抗体或抗体片段，其包含下列一项或多项：a.)轻链可变区FR1，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:7的氨基酸序列和与SEQ ID NO:7具有大于约90％同源性的氨基酸序列；b.)轻链CDR1，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:9的氨基酸序列和与SEQ ID NO:9具有大于约90％同源性的氨基酸序列；c.)轻链可变区FR2，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:11、与SEQ ID NO:11具有大于约90％同源性的氨基酸序列、SEQ ID NO:39和与SEQ ID NO:39具有大于约90％同源性的氨基酸序列；d.)轻链CDR2，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:13、与SEQ ID NO:13具有大于约90％同源性的氨基酸序列、SEQ ID NO:41和与SEQ ID NO:41具有大于约90％同源性的氨基酸序列；e.)轻链可变区FR3，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:15的氨基酸序列和与SEQ ID NO:15具有大于约90％同源性的氨基酸序列；f.)轻链CDR3，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:17的氨基酸序列和与SEQ ID NO:17具有大于约90％同源性的氨基酸序列；g.)轻链可变区FR4，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:19、与SEQ ID NO:19具有大于约90％同源性的氨基酸序列、SEQ ID NO:43和与SEQ ID NO:43具有大于约90％同源性的氨基酸序列；h.)重链可变区FR1，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:23的氨基酸序列和与SEQ ID NO:23具有大于约90％同源性的氨基酸序列；i.)重链CDR1，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:25、与SEQ ID NO:25具有大于约90％同源性的氨基酸序列、SEQ ID NO:45和与SEQ ID NO:45具有大于约90％同源性的氨基酸序列；j.)重链可变区FR2，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:27的氨基酸序列和与SEQ ID NO:27具有大于约90％同源性的氨基酸序列；k.)重链CDR2，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:29的氨基酸序列和与SEQ ID NO:29具有大于约90％同源性的氨基酸序列；l.)重链可变区FR3，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:31、与SEQ ID NO:31具有大于约90％同源性的氨基酸序列、SEQ ID NO:47和与SEQ ID NO:47具有大于约90％同源性的氨基酸序列；m.)重链CDR3，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:33、与SEQ ID NO:33具有大于约90％同源性的氨基酸序列、SEQ ID NO:49和与SEQ ID NO:49具有大于约90％同源性的氨基酸序列；n.)重链可变区FR4，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:35、与SEQ ID NO:35具有大于约90％同源性的氨基酸序列、SEQ ID NO:51和与SEQ ID NO:51具有大于约90％同源性的氨基酸序列；和o.)接头域，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:37的氨基酸序列、与SEQ ID NO:37具有大于约90％同源性的氨基酸序列。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.04.13 US 62/321,9751.抗体或抗体片段，其包含下列一项或多项：a.)轻链可变区FR1，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO:7的氨基酸序列和与SEQIDNO:7具有大于约90％同源性的氨基酸序列；b.)轻链CDR1，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO:9的氨基酸序列和与SEQIDNO:9具有大于约90％同源性的氨基酸序列；c.)轻链可变区FR2，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO:11、与SEQIDNO:11具有大于约90％同源性的氨基酸序列、SEQIDNO:39和与SEQIDNO:39具有大于约90％同源性的氨基酸序列；d.)轻链CDR2，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO:13、与SEQIDNO:13具有大于约90％同源性的氨基酸序列、SEQIDNO:41和与SEQIDNO:41具有大于约90％同源性的氨基酸序列；e.)轻链可变区FR3，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO:15的氨基酸序列和与SEQIDNO:15具有大于约90％同源性的氨基酸序列；f.)轻链CDR3，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO:17的氨基酸序列和与SEQIDNO:17具有大于约90％同源性的氨基酸序列；g.)轻链可变区FR4，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO:19、与SEQIDNO:19具有大于约90％同源性的氨基酸序列、SEQIDNO:43和与SEQIDNO:43具有大于约90％同源性的氨基酸序列；h.)重链可变区FR1，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO:23的氨基酸序列和与SEQIDNO:23具有大于约90％同源性的氨基酸序列；i.)重链CDR1，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO:25、与SEQIDNO:25具有大于约90％同源性的氨基酸序列、SEQIDNO:45和与SEQIDNO:45具有大于约90％同源性的氨基酸序列；j.)重链可变区FR2，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO:27的氨基酸序列和与SEQIDNO:27具有大于约90％同源性的氨基酸序列；k.)重链CDR2，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO:29的氨基酸序列和与SEQIDNO:29具有大于约90％同源性的氨基酸序列；l.)重链可变区FR3，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO:31、与SEQIDNO:31具有大于约90％同源性的氨基酸序列、SEQIDNO:47和与SEQIDNO:47具有大于约90％同源性的氨基酸序列；m.)重链CDR3，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO:33、与SEQIDNO:33具有大于约90％同源性的氨基酸序列、SEQIDNO:49和与SEQIDNO:49具有大于约90％同源性的氨基酸序列；n.)重链可变区FR4，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO:35、与SEQIDNO:35具有大于约90％同源性的氨基酸序列、SEQIDNO:51和与SEQIDNO:51具有大于约90％同源性的氨基酸序列；和o.)接头域，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO:37的氨基酸序列、与SEQIDNO:37具有大于约90％同源性的氨基酸序列。2.权利要求1的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含：(i)包含SEQIDNO:5的氨基酸序列的轻链和包含SEQIDNO:21的氨基酸序列的重链；(ii)SEQIDNO:3的氨基酸序列；(iii)SEQIDNO:39、SEQIDNO:45、和SEQIDNO:51...

【专利技术属性】
技术研发人员：A周，W温，Y韩，
申请(专利权)人：奥里马布斯有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US