The invention discloses an induction medium and induction method for directional differentiation of human bone marrow mesenchymal stem cells into endothelial cells, belonging to the technical field of cell induction and differentiation. The induction medium includes basic medium and additive components. The basic medium is IMDM medium, and the additive components include vascular endothelial growth factor, basic fibroblast growth factor and epidermis. Cell growth factor, insulin-like growth factor, fetal bovine serum, penicillin streptomycin and heparin, as well as ascorbic acid and/or hydrocortisone. The ratio of hydrocortisone to ascorbic acid and heparin was 1:1_3:8 10. The invention adopts an improved induction medium, and hydrocortisone can play a synergistic role with ascorbic acid and heparin to improve the induction effect. It can induce endothelial cells from bone marrow mesenchymal stem cells stably, efficiently and quickly, and the proportion of endothelial cells is as high as 93.5%.
【技术实现步骤摘要】
一种人骨髓间充质干细胞向内皮细胞定向分化的诱导培养基及诱导方法
本专利技术属于细胞诱导、分化
，具体地说，涉及一种人骨髓间充质干细胞向内皮细胞定向分化的诱导培养基及诱导方法。
技术介绍
随着人群老龄化和人们饮食结构的变化，下肢缺血性疾病的发病率正处于逐年上升阶段，已经成为威胁人类健康的一类重大疾病。下肢缺血性疾病的本质是下肢动脉血管狭窄、闭塞，造成血供减少，常引起间歇性跛行、下肢静息痛，甚至出现溃疡、坏疽等严重并发症，可导致截肢、死亡。随着医学技术的进步，外科血管搭桥术和介入腔内成形术已成为下肢缺血性疾病的重要治疗手段。但是，对于那些下肢血管弥漫性闭塞、膝下流出道差的严重下肢缺血患者，无论是通过外科手术还是介入腔内治疗，下肢血供都难以恢复正常，缺血症状也无法得到改善，最终仍然无法避免截肢等严重问题，患者预后差、病死率高。自“治疗性血管新生”的理念提出后，通过局部注射或动脉回输干细胞治疗促进下肢缺血部位血管新生、加强侧支循环的建立、改善组织供血被认为是严重下肢缺血性疾病最具前景的治疗方式。但是，促进血管新生只在部分动物实验中得到了验证，而在临床的应用中却发现患...
【技术保护点】
1.一种人骨髓间充质干细胞向内皮细胞定向分化的诱导培养基，其特征在于，所述诱导培养基为包括肝素及基本成分的IMDM培养基；其中，诱导培养基中肝素的用量为5‑50μg/ml。
【技术特征摘要】
1.一种人骨髓间充质干细胞向内皮细胞定向分化的诱导培养基，其特征在于，所述诱导培养基为包括肝素及基本成分的IMDM培养基；其中，诱导培养基中肝素的用量为5-50μg/ml。2.如权利要求1所述培养基，其特征在于，所述基本成分包括胎牛血清、青-链霉素和具有表皮细胞生长因子、胰岛素样生长因子的生长因子；其中，所述生长因子还包括血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子；其中，所述胎牛血清用量为培养基总体积的为2-10％、青-链霉素用量为培养基总体积的1％；血管内皮生长因子30-100ng/ml，碱性成纤维细胞生长因子5-30ng/ml、表皮细胞生长因子2-20ng/ml、胰岛素样生长因子5-40ng/ml。3.根据权利要求1或2所述的诱导培养基，其特征在于，所述诱导培养基中还含有抗坏血酸，所述的抗坏血酸的含量为0.5-10μg/ml；优选的，所述的抗坏血酸与肝素的添加量的比例为1:5-20。4.根据权利要求1-3任一所述的诱导培养基，其特征在于，所述诱导培养基中还含有氢化可的松，所述氢化可的松的含量为0.5-10μg/ml；优选的，所述的氢化可的松与肝素的添加量的比例为1:5-15；优选的，所述的氢化可的松与抗坏血酸和肝素的添加量的比例为1:1-3:8-10。5.根据权利要求1-3任一所述的诱导培养基，其特征在于，所述的诱导培养基在低温下进行配制，所述的低温为0-8℃；优选的，所述的低温为0-4℃。6.一种人骨髓间充质干细胞向内皮细胞定向分化的诱导方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)应用密度梯度离心法从人骨髓血中分离获得待测母细胞，并对待测母细胞进行培养，得到待测细胞；(2)通过检测细胞待测细胞表面抗原，鉴定获得骨髓间充质干细胞；(3)配置诱导培养基，将鉴定获得的骨髓间充质干细胞置于诱导培养基中进行培养，获得骨髓间充质干细胞来源的内皮细胞。7.根据权利要求6所述的诱导方法，其特征在于，所述的诱导培养基所述诱导培养基为包括肝素及基本成分的IMDM培养基；其中，所述基本成分包括胎牛血清、青-链霉素和生长因子；其中，所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：李渊，杨敏，刘绘绘，王承恩，邹英华，任汉云，姚子平，
申请(专利权)人：北京大学第一医院，
类型：发明
国别省市：北京,11
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。