The invention provides a method for differentiation of decidual mesenchymal stem cells from placental wall into endometrial epithelial cells, which comprises the following steps: adding tissue digestion solution to decidual tissue of placental wall for digestion, filtering and removing undigested tissue mass after digestion termination, collecting cell suspension for centrifugation, removing supernatant, cleaning and precipitation, and centrifuging again to obtain dry and fine mesenchymal of placental wall and fetal tissue. Mesenchymal stem cells were cultured on the selective medium of decidual mesenchymal stem cells from the placental wall; the primary cells of decidual mesenchymal stem cells from the placental wall were subcultured to the third generation; the third generation of decidual mesenchymal stem cells from the placental wall were taken and inoculated into the selective medium of decidual mesenchymal stem cells from the placental wall for overnight cultivation; the selective medium of decidual mesenchymal stem cells from the placental wall was removed. Endometrial epithelial cells were induced and cultured in differentiation medium of endometrial epithelial cells. The invention can successfully obtain endometrial epithelial cells with cellular activity.
【技术实现步骤摘要】
胎盘壁蜕膜间充质干细胞分化为子宫内膜上皮细胞的方法
本专利技术属于干细胞与再生医学领域,具体涉及一种胎盘壁蜕膜间充质干细胞分化为子宫内膜上皮细胞的方法。
技术介绍
女性子宫是一个具有高度再生能力的器官,在成年女性的育龄期要经历400多次的增殖、分化和脱落,形成月经。子宫内膜由上皮细胞、间质细胞和血管组成,子宫内膜上皮细胞是子宫内膜组织的重要组成部分,随着月经的发生周期性增生和脱落,是维持子宫功能的重要组成部分。子宫内膜上皮细胞的增殖和分化在子宫内膜损伤修复及组织组织工程领域扮演重要的作用。正常情况下,子宫内膜周期性增生和脱落所需的新细胞必须在正确的时间和空间上产生准确的程序化。子宫内膜病变是造成女性不孕不育的重要原因,包括子宫内膜黏连,子宫内膜癫痕等,而子宫内膜上皮细胞与这些疾病的发生密切相关。有数据统计约90%的子宫黏连发生与妊娠或非妊娠期子宫内膜的机械损伤有关,其中人工流产的清宫手术是主要原因,中国每年有超过1400万人次的人工流产,造成的宫腔粘连已经成为继发性不孕患者的最常见原因,占继发性不孕症发病原因的8%,它还可导致习惯性流产,试管婴儿植入失败等并发症,严重威胁我国育龄期妇女的生殖健康。目前主要的治疗手段是宫腔镜下的黏连松解术,但是效果并不尽如人意,手术后再次黏连发生率约15%,如果子宫内膜损伤面积过大或完全裸露,即使手术恢复了宫腔形态,内膜也很难再生,恢复功能。组织工程的出现为治疗子宫内膜损伤造成的宫腔黏连带来新的途径,通过将子宫内膜上皮细胞等种子细胞接种于支架材料上,体外培养出一种细胞膜片,通过手术将细胞膜片移植到受损的子宫内,修复内膜损伤成 ...
【技术保护点】
1.一种胎盘壁蜕膜间充质干细胞分化为子宫内膜上皮细胞的方法,其特征在于包括以下步骤:(1)分离胎盘组织中的胎盘壁蜕膜组织并剪碎清洗,加入组织消化液消化,消化终止后过滤去除未消化的组织块,收集细胞悬液离心,去除上清液,清洗沉淀并再次离心,得到胎盘壁胎膜组织间充质干细胞;(2)用胎盘壁蜕膜间充质干细胞选择性培养基培养所述胎盘壁蜕膜间充质干细胞;(3)将所述胎盘壁蜕膜间充质干细胞原代细胞传代至P3代胎盘壁蜕膜间充质干细胞;(4)取所述P3代胎盘壁蜕膜间充质干细胞,加入所述胎盘壁蜕膜间充质干细胞选择性培养基接种培养过夜;(5)去除所述胎盘壁蜕膜间充质干细胞选择性培养基,然后清洗,再加入用子宫内膜上皮细胞分化培养基进行诱导培养,得到诱导后的子宫内膜上皮细胞。
【技术特征摘要】
1.一种胎盘壁蜕膜间充质干细胞分化为子宫内膜上皮细胞的方法,其特征在于包括以下步骤:(1)分离胎盘组织中的胎盘壁蜕膜组织并剪碎清洗,加入组织消化液消化,消化终止后过滤去除未消化的组织块,收集细胞悬液离心,去除上清液,清洗沉淀并再次离心,得到胎盘壁胎膜组织间充质干细胞;(2)用胎盘壁蜕膜间充质干细胞选择性培养基培养所述胎盘壁蜕膜间充质干细胞;(3)将所述胎盘壁蜕膜间充质干细胞原代细胞传代至P3代胎盘壁蜕膜间充质干细胞;(4)取所述P3代胎盘壁蜕膜间充质干细胞,加入所述胎盘壁蜕膜间充质干细胞选择性培养基接种培养过夜;(5)去除所述胎盘壁蜕膜间充质干细胞选择性培养基,然后清洗,再加入用子宫内膜上皮细胞分化培养基进行诱导培养,得到诱导后的子宫内膜上皮细胞。2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述胎盘组织是人胎盘组织。3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述组织消化液包括H-DMEM、终浓度为10mg/ml的I型胶原酶和终浓度为0.5mg/ml的DNA酶。4.根据权利要求1所述的方法,...
【专利技术属性】
技术研发人员:朱建斌,王刚,江嘉豪,何美弟,陈炽峰,康斯敏,陈碧莹,李静静,蔡祥胜,王进辉,
申请(专利权)人:广东唯泰生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:广东,44
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