一种BHK21细胞无血清培养基制造技术

本发明专利技术公开了一种BHK21细胞无血清培养基，包括葡萄糖、半乳糖、丝胶蛋白水解产物、玉米粉琼脂、氨基酸类、矿物质类、非离子表面活性剂、脂肪酸酯复合剂、维生素、乙醇胺、抗氧化剂和pH缓冲溶液，细胞在该培养基中静置培养时以半贴壁半悬浮状态生长，细胞存活率达95％以上；无动物来源成分，提高最终产品的生物安全性；支持细胞生长的同时还支持培养后期的病毒增殖过程，产生较高的病毒滴度；制备方法简单，价格较低，具备放大规模生产应用的前景。

【技术实现步骤摘要】
一种BHK21细胞无血清培养基
本专利技术涉及培养基制备
，尤其涉及一种BHK21细胞无血清培养基。
技术介绍
目前应用于重组病毒载体扩增、重组蛋白表达或是疫苗规模化制备所用的宿主细胞基本来源于哺乳动物细胞，如幼小仓鼠肾细胞(BHK21)，这些细胞在传统培养过程中通常需要添加一定量(5-10％)的牛血清，血清中含有细胞生长所需的生长因子、激素、载体蛋白、贴壁因子、微量元素以及其他营养物质，可以促进细胞生长。但是，在规模化生产和实际应用中，血清的添加存在如下缺点：没有商品化的全化学合成产品，而动物的水解乳蛋白的化学成分并不固定，因此，培养基的质量不能得到保证，从而使得BHK21细胞所合成的疫苗的质量得不到保证；而且，动物来源的水解乳蛋白的保质期一般较短，需要严格控制储存的环境，否则易于变质；同时，该培养基所采用的三合一的制备方法的工艺较为繁琐，生产效率较低。为了克服血清添加带来的上述缺陷，自上世纪八十年代起许多科研单位或生物医药公司就相继开发出了若干无血清培养基，但同时也存在不足之处：1.无血清培养基中依然含有动物蛋白来源成分，如牛血清白蛋白(BSA)、胰岛素、转铁蛋白等，仍然遗留着应用血清可能出现的问题，此外其价格昂贵，一般只适合实验室小规模培养使用；2.目前开发的无血清培养基对细胞具有较高的特异性，通常一种培养基只能适合一种细胞株的生长，而不适合其他细胞株；所以目前急需开发出无血清培养基，同时要求该培养基的添加组分中无动物来源成分，满足细胞生长所需的营养成分。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种BHK21细胞无血清培养基，该培养基不含动物来源成分，以提高生物安全性，且细胞存活率高。为达到上述目的，本专利技术采用的技术方案是：一种BHK21细胞无血清培养基，包括如下组分，氨基酸类：矿物质类：进一步地，BHK21细胞无血清培养基，包括如下组分，氨基酸类：矿物质类：进一步地，所述脂肪酸酯复合剂为次亚麻油酸、亚麻油酸、肉豆蔻酸和油酸中的一种或几种。进一步地，所述非离子表面活性剂为脂肪醇聚氧乙烯醚或异构醇聚氧乙烯醚，如脂肪醇聚氧乙烯醚AEO-9，或异构醇聚氧乙烯醚TO-13，非离子性表面活性剂可防止细胞在无血清驯化过程中聚团生长，并有利于细胞在振荡悬浮培养时能迅速适应悬浮生长环境，减小剪切作用对细胞造成的伤害，而且脂肪醇聚氧乙烯醚和异构醇聚氧乙烯醚均具有环保性，不含禁限用物质。进一步地，所述维生素为叶酸、烟酰胺、吡哆醇、硫胺素、氯化胆碱和维生素C中的一种或几种。进一步地，所述辅助添加剂为核黄素或硫酸腺嘌呤中的一种或二种。进一步地，所述pH缓冲溶液为醋酸、丁二酸或其组合。本专利技术的培养基制备方法简单，采用常规的方法将上述组分根据其各自溶解特性分类溶解，然后混合于无热源的超纯水中，缓冲溶液调节溶液的pH值为7.2，定容至1000ml后经0.22um无菌过滤膜过滤后即完成配制。本专利技术中各组分的功效如下，丝胶蛋白水解产物提供细胞生长所需的氨基酸、短肽、维生素以及酮类物质等；玉米粉琼脂其养分较少，一般细胞在这种培养基上生长较差，但适用于细胞保存，提高细胞存活率；氨基酸可补充Lys、Val、Leu、Ile、Try、Pro-OH等；脂肪酸复合剂：脂肪酸酯复合剂作为细胞膜、细胞器膜的组成物质，有利于细胞结构完整，维持正常生理代谢；抗氧化试剂防止细胞在无血清驯化培养过程中发生过氧化作用；乙醇胺作为磷脂和细胞膜合成的前体物质，对细胞的生长具有促进作用。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：细胞在该培养基中静置培养时以半贴壁半悬浮状态生长，细胞存活率达95％以上；无动物来源成分，提高最终产品的生物安全性；支持细胞生长的同时还支持培养后期的病毒增殖过程，产生较高的病毒滴度；制备方法简单，价格较低，具备放大规模生产应用的前景。具体实施方式以下是本专利技术的具体实施例，对本专利技术的技术方案作进一步的描述，但本专利技术并不限于这些实施例。实施例1氨基酸类：矿物质类：实施例2氨基酸类：矿物质类：实施例3氨基酸类：矿物质类：从液氮中取出BHK21细胞，离心弃去上清液，加入少量实施例1至实施例3的待测定的培养基配成的完全培液重悬细胞，并接种于无菌培养瓶内，细胞个数为1*104/mL，再加入上述相同配置的培液于37℃、5％二氧化碳培养箱内培养三天，显微镜观察，细胞长满瓶壁，形态良好；更换培养液，再进行分瓶培养继续培养三代，显微镜观察，细胞长满瓶壁，形态良好，合格。细胞在该培养基中静置培养时以半贴壁半悬浮状态生长，细胞存活率达95％以上；无动物来源成分，提高最终产品的生物安全性；支持细胞生长的同时还支持培养后期的病毒增殖过程，产生较高的病毒滴度；制备方法简单，价格较低，具备放大规模生产应用的前景。本文中所描述的具体实施例仅仅是对本专利技术精神作举例说明。本专利技术所属
的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，但并不会偏离本专利技术的精神或者超越所附权利要求书所定义的范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种BHK21细胞无血清培养基，其特征在于，包括如下组分，

【技术特征摘要】
1.一种BHK21细胞无血清培养基，其特征在于，包括如下组分，氨基酸类：矿物质类：。2.根据权利要求1所述的BHK21细胞无血清培养基，其特征在于，包括如下组分，氨基酸类：矿物质类：。3.根据权利要求1所述的BHK21细胞无血清培养基，其特征在于，所述脂肪酸酯复合剂为次亚麻油酸、亚麻油酸、肉豆蔻酸和油酸中的一种或几种。4.根据权利要求1所述的BHK21细胞无血清培养基，其特征在于，所述非离子表面活性...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐斌，
申请(专利权)人：苏州工业园区旭太生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32