从非肿瘤样品中分离单细胞的方法技术

技术编号：20857446 阅读：40 留言：0更新日期：2019-04-13 11:18

本发明专利技术涉及单细胞分离领域，公开了从非肿瘤样品中分离单细胞的方法。所述方法包括：将非肿瘤样品与消化液混合进行消化，所述消化液含有VIII型胶原酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶抑制剂和脱氧核糖核酸酶，其中，所述VIII型胶原酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶抑制剂和脱氧核糖核酸酶的酶活力单位之间的比值为10‑1250:0.1‑20:500‑100000:1。本发明专利技术能够在总消化时间较短的情况下实现单细胞的高收率和高活率提取，特别是胰腺组织，攻克了现有胰腺组织单细胞收率和活率较低的难题。

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【技术实现步骤摘要】
从非肿瘤样品中分离单细胞的方法
本专利技术涉及单细胞分离领域，具体涉及从非肿瘤样品中分离单细胞的方法。
技术介绍
胰腺是人体中兼具内分泌和外分泌功能的器官。组织学上包含胰岛细胞、腺泡细胞、导管细胞以及间质细胞等多个细胞组分。胰腺产生分泌的胰液中含有胰蛋白酶、胰脂肪酶、胰淀粉酶等多种消化酶。随着近年来单细胞分析技术的兴起，人们对与人体组织器官的研究从不同成分混合，互相干扰的整体组织分析逐渐深入到对构成组织器官的单个细胞的研究，其重要性不言而喻。而在胰腺研究领域，由于胰腺器官大体上柔软而脆弱、组织学上成分复杂且因为强效的胰酶而容易发生自身消化，使得胰腺单细胞研究往往止步于第一步——也即可供分析的胰腺组织单细胞的获取。人体或动物模型组织器官单细胞分离方法，从最初的毛细管吸取，到流式分选再到微流体技术，众多的单细胞分离技术在不同的组织当中或多或少都取得了较为满意的结果，但在胰腺组织上则差强人意。通过查阅文献可知，目前研究人员在分离小鼠胰腺癌单细胞时，大多采用以II型胶原酶为主的酶消化解离方法，但是，胰腺单细胞研究者均表示在胰腺单细胞分离时遇到了极大的挑战，要么单细胞收率不高，要么细胞活率较低，因此，开发能够有效分离的胰腺单细胞的制剂或方法具有极为重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服现有技术存在的单细胞收率和细胞活率较低的问题，提供一种新的从非肿瘤样品中分离单细胞的方法。为了实现上述目的，本专利技术提供了一种从非肿瘤样品中分离单细胞的方法，该方法包括：将非肿瘤样品与消化液混合进行消化，所述消化液含有VIII型胶原酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶抑制剂和脱氧核糖...

【技术保护点】
1.一种从非肿瘤样品中分离单细胞的方法，其特征在于，该方法包括：将非肿瘤样品与消化液混合进行消化，所述消化液含有VIII型胶原酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶抑制剂和脱氧核糖核酸酶，其中，所述VIII型胶原酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶抑制剂和脱氧核糖核酸酶的酶活力单位之间的比值为10‑1250:0.1‑20:500‑100000:1，优选为50‑625:0.5‑10:2000‑50000:1。

【技术特征摘要】
1.一种从非肿瘤样品中分离单细胞的方法，其特征在于，该方法包括：将非肿瘤样品与消化液混合进行消化，所述消化液含有VIII型胶原酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶抑制剂和脱氧核糖核酸酶，其中，所述VIII型胶原酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶抑制剂和脱氧核糖核酸酶的酶活力单位之间的比值为10-1250:0.1-20:500-100000:1，优选为50-625:0.5-10:2000-50000:1。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述中性蛋白酶为DispaseII；和/或，所述脱氧核糖核酸酶为DNaseI。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，相对于每毫克的VIII型胶原酶，所述消化液中溶剂的含量为0.1-12.5mL。4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述溶剂为含有4-10体积...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴文铭，彭俊雅，陈澔，黄丹，刘路路，洪夏飞，丛林，李冬晶，赵玉沛，
申请(专利权)人：中国医学科学院北京协和医院，
类型：发明
国别省市：北京,11

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