一种人多能干细胞定向肺类器官分化流程制造技术

本发明专利技术公开了一种人多能干细胞定向肺类器官分化流程；具体流程包括：1)人多能干细胞培养于基质胶包被的培养板；2)ESC/iPSC生长至月95％汇合度的时候开始诱导分化；3)分化的第二阶段为腹部前肠内胚层阶段；4)分化的第三个阶段为肺系分化阶段；5)41天的诱导；本发明专利技术提供的人多能干细胞定向肺类器官分化流程，本诱导分化流程为目前最经济，仅用5种细胞因子/小分子化合物的3D肺类器官定向分化平台。

【技术实现步骤摘要】
一种人多能干细胞定向肺类器官分化流程
本专利技术涉及一种人多能干细胞定向肺类器官分化流程。
技术介绍
多能干细胞，是能够分化成多种类型体细胞的干细胞，包括胚胎干细胞和诱导多能干细胞。这个多能的意思，顾名思义：有多种分化能力。多能干细胞的概念是相对于单能干细胞和全能干细胞而言的。人类多能干细胞凭借其无限自我更新，非常适合扩增；具有的多向分化潜能，可作为体细胞损伤、缺失的替代者，是理想的再生医学种子细胞。自体多能干细胞来源的组织细胞可避免组织器官移植的排异现象，使得组织器官的自体再造和移植成为可能。肺损伤甚至肺功能衰竭是临床常见的致命性疾病，目前物理人造肺尚不能使得肺衰竭患者有质量地生存；肺移植治疗也存在移植肺来源有限、移植排异等诸多问题。所以，以多能干细胞为原料的组织工程肺是肺损伤患者理想的治疗材料。然而，许多研究者多年来一直没有理想的定向肺类器官分化的方案。
技术实现思路
本专利技术为解决上述技术问题而采用的技术方案是提供一种人多能干细胞定向肺类器官分化流程，其中，具体技术方案为：具体流程包括：1)人多能干细胞培养于基质胶包被的培养板，培养基为多能干细胞专用培养基；2)ESC/iPSC生本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人多能干细胞定向肺类器官分化流程，其特征在于：具体流程包括：1)人多能干细胞培养于基质胶包被的培养板，培养基为多能干细胞专用培养基；2)ESC/iPSC生长至月95％汇合度的时候开始诱导分化，分化第一个阶段为定型内胚层阶段，诱导培养基为RPMI1640基础培养基含100ng/ml的活化素A，每天跟换诱导培养基，DE阶段持续3天，ESC/iPSC进入DE阶段，应表达DE阶段特异性标志物SOX17和FOXA2，同时下调多能性标志物OCT4；3)分化的第二阶段为腹部前肠内胚层阶段，诱导培养基为Advanced‑DMEM/F12基础培养基含200ng/ml Noggin,500ng/ml FG...

【技术特征摘要】
1.一种人多能干细胞定向肺类器官分化流程，其特征在于：具体流程包括：1)人多能干细胞培养于基质胶包被的培养板，培养基为多能干细胞专用培养基；2)ESC/iPSC生长至月95％汇合度的时候开始诱导分化，分化第一个阶段为定型内胚层阶段，诱导培养基为RPMI1640基础培养基含100ng/ml的活化素A，每天跟换诱导培养基，DE阶段持续3天，ESC/iPSC进入DE阶段，应表达DE阶段特异性标志物SOX17和FOXA2，同时下调多能性标志物OCT4；3)分化的第二阶段为腹部前肠内胚层阶段，诱导培养基为Advanced-DMEM/F12基础培养基含200ng/mlNoggin,500ng/mlFGF4,10μMSB431542和2μMCHIR99021，每天跟换诱导培养基，AFE阶段持续4天；4)分化的第三个阶段为肺系分化阶段，诱导培养基为含1％FBSAdvanced-DMEM/F12培养基，细胞经过DE和AFE阶段共7天的诱导后，PBS洗2次，酶,消化3分钟,1％FBSAdvanced-DMEM/F12培养基中和，1000转离心，弃去上清，细胞包埋于预冷的基质胶中,37℃，5％CO2培养箱中静置30分钟，待基质胶固化后加入含1％FBSAdvanced-DMEM/F12培养基，每3天跟换培养基，6-8天传代一次，诱导35天；5)经过41天的诱导，形成3D立体结构的肺类器官，表达多种肺系标志物，同时电镜应能看到“9+2”微管结构，即肺近端纤毛细胞特异...

【专利技术属性】
技术研发人员：董永聘，冯荣，
申请(专利权)人：上海淮泊生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31