一种快速分离外泌体的方法技术

本发明专利技术公开一种快速分离外泌体的方法，以超滤的方法对血清进行预处理，以聚乙二醇为间隔合成超顺磁纳米颗粒与配体的复合物，利用配体与外泌体表面的受体的特异性结合，形成基于外泌体的超顺磁性纳米离子团簇，在磁场作用下实现对外泌体的分离。本发明专利技术方法可以快速有效的清除血液中的游离配体，增加外泌体表面瞄定的超顺磁纳米颗粒的数目，从而快速的分离血液中的外泌体。

【技术实现步骤摘要】
一种快速分离外泌体的方法
本专利技术涉及生物
，更具体地说涉及一种优化的基于超顺磁纳米颗粒簇快速分离血液中外泌体的方法。
技术介绍
外泌体是指由哺乳动物细胞分泌到细胞外微环境的一类直径为40～100nm的膜结构囊泡，其可以从多种细胞培养基及动物体液中分离得到。由于其独特的生物来源，丰富的表面膜蛋白和脂质双分子层结构，外泌体已经在药物投递载体领域得到了越来越多的关注{vanDommelen,SusanM.,etal."Microvesiclesandexosomes:opportunitiesforcell-derivedmembranevesiclesindrugdelivery."JournalofControlledRelease161.2(2012)；Vader,Pieter,etal."Extracellularvesiclesfordrugdelivery."Advanceddrugdeliveryreviews106(2016)}。目前已经利用外泌体投递各种治疗性分子，例如化疗药物，蛋白质，基因等等。虽然这种基于外泌体的药物投递系统已取得了显著的进展，但仍面临很多挑本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种快速分离外泌体的方法，其特征在于，按照下述步骤进行：将超顺磁纳米颗粒‑聚乙二醇‑配体复合物、置于待分离样品中进行孵育，将孵育完成后用的溶液进行磁分离并用缓冲溶液洗涤，即可得到基于外泌体的超顺磁性纳米粒子团簇，其中超顺磁纳米颗粒‑聚乙二醇‑配体复合物选择聚乙二醇化的超顺磁纳米颗粒与激活的硫醇基配体反应制备，氨基官能化的超顺磁性Fe3O4纳米颗粒与活性酯聚乙二醇马来酰亚胺进行反应，以实现超顺磁纳米颗粒的聚乙二醇化；配体与2‑亚氨基四氢噻吩反应得到激活的硫醇基配体；待分离样品经过超滤处理。

【技术特征摘要】
1.一种快速分离外泌体的方法，其特征在于，按照下述步骤进行：将超顺磁纳米颗粒-聚乙二醇-配体复合物、置于待分离样品中进行孵育，将孵育完成后用的溶液进行磁分离并用缓冲溶液洗涤，即可得到基于外泌体的超顺磁性纳米粒子团簇，其中超顺磁纳米颗粒-聚乙二醇-配体复合物选择聚乙二醇化的超顺磁纳米颗粒与激活的硫醇基配体反应制备，氨基官能化的超顺磁性Fe3O4纳米颗粒与活性酯聚乙二醇马来酰亚胺进行反应，以实现超顺磁纳米颗粒的聚乙二醇化；配体与2-亚氨基四氢噻吩反应得到激活的硫醇基配体；待分离样品经过超滤处理。2.根据权利要求1所述的一种快速分离外泌体的方法，其特征在于，对待分离样品进行超滤处理时，超滤管的截留分子量为3kDa-300kDa，在3-5℃离心20-40min，离心速度为100×g-100000×g；配体采用CD63抗体、CD9抗体、CD81抗体、CD82抗体、ALIX抗体、Tsg101抗体或者转铁蛋白中的一种。3.根据权利要求1所述的一种快速分离外泌体的方法，其特征在于，待分离样品为含有外泌体的体液，如从血液样本中得到的血清、唾液、尿液、精液或者母乳。4.根据权利要求1所述的一种快速分离外泌体的方法，其特征在于，超顺磁纳米颗粒-聚乙二醇-配体复合物与待分离样品在30-40℃下孵育0.5-2h，将孵育完成后用的溶液进行磁分离，时间为10-5000min，优选30—100min，使用磷酸缓冲溶液进行洗涤。5.根据权利要求1所述的一种快速分离外泌体的方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：原续波，战琦，赵瑾，侯信，李学平，韩冬琳，
申请(专利权)人：天津大学，
类型：发明
国别省市：天津,12