针对人胃组织制备单细胞悬液的解离试剂盒及方法技术

本发明专利技术公开了一种针对人胃组织制备单细胞悬液的解离试剂盒及方法，所述试剂盒包括BufferE、对细胞裂解产生的DNA进行消化的酶A、用于消化组织中连接部分使其成为单个细胞的酶B、对多种组织类型进行消化的酶C和提高组织中液体渗透能力的酶D。本发明专利技术能够更高效地从人胃组织中解离单细胞悬液，可重复性高，且得到的单细胞活力高、表位完整，不会影响后续实验。

【技术实现步骤摘要】
针对人胃组织制备单细胞悬液的解离试剂盒及方法
本专利技术涉及细胞分子生物，具体地，涉及一种针对人胃组织制备单细胞悬液的解离试剂盒及胃组织单细胞悬液的制备方法。
技术介绍
在生物医药领域的研究中，经常需要观察和研究各个组织的单细胞的特性，因此，获取各种组织的解离试剂盒有利于研究实验的高效进行。现有技术中，已经出现了不少的组织解离试剂盒，比如肿瘤组织解离试剂盒、新生鼠心脏解离试剂盒、骨骼肌、皮肤、脑、神经球等等，一般的组织解离试剂盒是通过采用特定的酶溶液，需要很好地保护细胞表面抗原，使得到的单细胞活力高、表位完整，不影响下游流式等实验。但是在检索中，尚未发现有人胃组织制备单细胞悬液的解离试剂盒的报道。
技术实现思路
针对现有技术中的缺陷，本专利技术的目的主要是提供一种针对人胃组织制备单细胞悬液的解离试剂盒。本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现的：本专利技术提供的第一个方面，是一种针对人胃组织制备单细胞悬液的解离试剂盒，所述试剂盒包括BufferE、对细胞裂解产生的DNA进行消化的酶A、用于消化组织中连接部分使其成为单个细胞的酶B、对多种组织类型进行消化的酶C和提高组织中液体渗透能力的酶D。上述组分之间相互协调配合，能够用于对人胃组织制备单细胞悬液，具体来说：酶A—对细胞裂解产生的DNA进行消化，防止DNA缠绕导致细胞粘连；酶B—主要用于哺乳动物组织细胞的分离，用于消化组织中连接部分使其成为单个细胞；酶C—能够对多种组织类型进行消化；酶D—能够提高组织中液体渗透能力，降低细胞间质的粘连。优选地，所述酶A选用脱氧核糖核酸酶I(DeoxyribonucleaseI，DNaseI)；所述酶B选用I型胶原蛋白水解酶(CollagenaseI)；所述酶C选用Ⅳ型胶原蛋白水解酶(CollagenaseⅣ)；所述酶D选用透明质酸酶(hyaluronidase，HAase)。优选地，所述BufferE选用Hanks平衡盐溶液。优选地，所述酶A、酶B、酶C和酶D均为冻干粉；所述解离试剂盒中酶A、酶B、酶C和酶D的冻干粉的重量比为(1-2):(32-48):(32-48):(8-12)；所述解离试剂盒中BufferE的体积与酶A、B、C、D冻干粉的总重的比值为20:(73-110)。本专利技术提供的第二个方面，是一种利用针对人胃组织制备单细胞悬液的解离试剂盒制备胃组织单细胞悬液的方法，包括：S1:酶溶液准备：取部分BufferE加入酶A冻干粉中得酶A溶液，分装，冻存备用；所述酶A溶液浓度为0.5-1mg/ml；取部分BufferE加入酶B冻干粉中得酶B溶液，分装，冻存备用；所述酶B溶液浓度为4-6mg/ml；取部分BufferE加入酶C冻干粉中得酶C溶液，分装，冻存备用；所述酶C溶液浓度为4-6mg/ml；取部分BufferE加入酶D冻干粉中得酶D溶液，分装，冻存备用；所述酶D溶液浓度为4-6mg/ml；S2：解离液制备：将步骤S1中冻存备用的酶A溶液、酶B溶液、酶C溶液、酶D溶液进行混合，制得酶混合液，即解离液；S3：胃组织单细胞悬液制备：将培养基和所述解离液配制成含酶液混合液，加入到分离管中；将胃组织小块加入分离管中，密封分离管，对组织进行解离，经细胞筛过滤，离心并洗涤细胞沉淀，于培养基中重悬细胞，即得所述胃组织单细胞悬液。优选地，S1中，加入酶A、B、C、D冻干粉中的BufferE分别占BufferE总体积的1/10、2/5、2/5、1/10。优选地，S2中，所述酶A溶液、酶B溶液、酶C溶液、酶D溶液的体积比为1:4:4:1。优选地，S3中，将培养基和所述解离液按4:1的比例配制成含酶液混合液。优选地，S3中，每10ml含酶液混合液中加入胃组织小块180～220mg。优选地，S3中，所述对组织进行解离是指：于37℃对组织进行解离30-60min。优选地，所述经细胞筛过滤是指：经70μm细胞筛过滤。优选地，所述冻存是指-20℃冻存。优选地，所述培养基为RPMI1640或DMEM。与现有技术相比，本专利技术具有如下的有益效果：根据本专利技术试剂盒，能够更高效地从人胃组织中解离单细胞悬液，可重复性高，且得到的单细胞活力高、表位完整，不会影响后续实验。附图说明通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本专利技术的其它特征、目的和优点将会变得更明显：图1为光学显微镜观察胃组织样本解离后细胞悬液结果示意图；其中，A为癌旁组织解离后细胞悬液明场图，B为胃癌组织解离后细胞悬液明场图；图2为AO/PI染色后胃癌旁组织样本解离单细胞悬液中活细胞和死细胞分布情况示意图；其中，A为癌旁组织样本单细胞悬液中活细胞分布情况；B为癌旁组织样本单细胞悬液中死细胞分布情况；图3为AO/PI染色后胃癌组织样本解离单细胞悬液中活细胞和死细胞分布情况示意图；其中，A为胃癌组织样本单细胞悬液中活细胞分布情况；B为胃癌组织样本单细胞悬液中死细胞分布情况。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本专利技术，但不以任何形式限制本专利技术。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本专利技术的保护范围。实施例1本实施例对针对人胃组织制备单细胞悬液设计的解离试剂盒进行说明。针对人胃组织制备单细胞悬液的解离试剂盒由5种成分组成，分别是BufferE、酶A、酶B、酶C和酶D，酶A—对细胞裂解产生的DNA进行消化，防止DNA缠绕导致细胞粘连；酶B—主要用于哺乳动物组织细胞的分离，用于消化组织中连接部分使其成为单个细胞；酶C—能够对多种组织类型进行消化；酶D—能够提高组织中液体渗透能力，降低细胞间质的粘连。其中酶A-D是冻干粉，因此在制备解离液之前需要用BufferE分别对酶A-D进行溶解，在一实验中，溶解的方法如下：分别取2ml、8ml、8ml和2ml的BufferE加入到酶A、酶B、酶C和酶D中，于无菌Ep管分装后于-20℃冻存备用(注：避免反复冻融，易损伤酶的活性)，其中，酶A溶液浓度为0.5-1mg/ml，酶B溶液浓度为4-6mg/ml，酶C溶液浓度为4-6mg/ml，酶D溶液浓度为4-6mg/ml。然后再将酶A溶液、酶B溶液、酶C溶液和酶D溶液以1:4:4:1的体积比进行混合，制备解离液。本实施例中，酶A选用脱氧核糖核酸酶I；酶B选用I型胶原蛋白水解酶；酶C选用Ⅳ型胶原蛋白水解酶；酶D选用透明质酸酶。BufferE选用Hanks平衡盐溶液。酶A、酶B、酶C和酶D的冻干粉的重量比为(1-2):(32-48):(32-48):(8-12)；解离试剂盒中BufferE的体积与酶A、B、C、D冻干粉的总重的比值为20ml:(73-110)mg。更好地，酶A、酶B、酶C和酶D的冻干粉的重量比为1.5:40:40:10；解离试剂盒中BufferE的体积与酶A、B、C、D冻干粉的总重的比值为20ml:90-92mg。本实施例解离试剂盒能够更高效地从人胃组织中解离单细胞悬液，可重复性高，且得到的单细胞活力高、表位完整，不会影响后续实验。实施例2本实施例对针对人胃组织制备单细胞悬液的解离试剂盒、应用该解离试剂盒配制解离液以及进一步制备胃组织单细胞悬液的方法进行详细的说明。1.酶溶液准备：(本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种针对人胃组织制备单细胞悬液的解离试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括BufferE、对细胞裂解产生的DNA进行消化的酶A、用于消化组织中连接部分使其成为单个细胞的酶B、对多种组织类型进行消化的酶C和提高组织中液体渗透能力的酶D。

【技术特征摘要】
1.一种针对人胃组织制备单细胞悬液的解离试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括BufferE、对细胞裂解产生的DNA进行消化的酶A、用于消化组织中连接部分使其成为单个细胞的酶B、对多种组织类型进行消化的酶C和提高组织中液体渗透能力的酶D。2.根据权利要求1所述的针对人胃组织制备单细胞悬液的解离试剂盒，其特征在于：所述酶A选用脱氧核糖核酸酶I；所述酶B选用I型胶原蛋白水解酶；所述酶C选用Ⅳ型胶原蛋白水解酶；所述酶D选用透明质酸酶。3.根据权利要求1所述的针对人胃组织制备单细胞悬液的解离试剂盒，其特征在于：所述BufferE选用Hanks平衡盐溶液。4.根据权利要求1所述的针对人胃组织制备单细胞悬液的解离试剂盒，其特征在于：所述酶A、酶B、酶C和酶D均为冻干粉；所述解离试剂盒中酶A、酶B、酶C和酶D的冻干粉的重量比为(1-2):(32-48):(32-48):(8-12)；所述解离试剂盒中BufferE的体积与酶A、B、C、D冻干粉的总重的比值为20ml:(73-110)mg。5.一种利用权利要求1-4任一项所述的解离试剂盒制备胃组织单细胞悬液的方法，其特征在于：包括：S1:酶溶液准备：取部分BufferE加入酶A冻干粉中得酶A溶液，分装，冻存备用；所述酶A溶液浓度为0.5-1mg/ml；取部分BufferE加入酶B冻干粉中得酶B溶液，分装，冻存备用；所述酶B溶液浓度为4-6mg/ml；取部分BufferE加入酶C冻干粉中得酶C溶液，分装，冻存备用；...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈岱，
申请(专利权)人：上海烈冰生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31