一种水光注射仪注射脐带间充质干细胞制剂及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种水光注射仪注射脐带间充质干细胞制剂及其应用，所述脐带间充质干细胞制剂为由脐带间充质干细胞和生理盐水组成的干细胞悬液，其中：脐带间充质干细胞和生理盐水的总体积为5毫升，干细胞悬液中脐带间充质干细胞的细胞总数为1×10

A preparation of umbilical cord mesenchymal stem cells injected by water-light injector and its application

The invention discloses a preparation of umbilical cord mesenchymal stem cells injected by a water-light injector and its application. The preparation of umbilical cord mesenchymal stem cells is a stem cell suspension composed of umbilical cord mesenchymal stem cells and physiological saline. The total volume of umbilical cord mesenchymal stem cells and physiological saline is 5 ml, and the total number of umbilical cord mesenchymal stem cells in stem cell suspension is 1*10.

【技术实现步骤摘要】
一种水光注射仪注射脐带间充质干细胞制剂及其应用
本专利技术属于美容
，涉及一种水光注射仪注射脐带间充质干细胞制剂及其在皮肤年轻化治疗上的应用。
技术介绍
皮肤的衰老与机体的衰老是同步进行的，目前关于皮肤衰老的机理比较具有代表性的有皮肤衰老的基因调控学说、自由基学说、代谢失调学说、光老化作用等。尽管关于皮肤衰老确切机制不清楚，但是越来越多的研究认为活性氧是导致衰老的一个关键因素。Sohal等在传统自由基衰老学说的基础上提出了“氧化应激(oxidativestress)衰老学说”，认为过量活性氧能破坏组织中活性氧的产生和清除之间的平衡，可破坏组织细胞的结构和功能，造成程序性的和不可逆转的损伤。面部衰老是机体和面、颈部的软、硬组织共同变化的结果，面部老化与体质、遗传因素、生活环境、心理情绪、工作性质、营养状况、疾病、局部皮肤护理等因素有着密切的关联。一般人到25岁以后，便开始出现衰老征象，面部皮肤皱纹的形成是一个重要特征和指标。皮肤表皮细胞的自我更新、再生修复以及衰老退变是由来自毛囊或表皮基底层的成体干细胞——表皮干细胞的增殖分化所决定的。随着年纪的增加，表皮干细胞的数量逐渐减少、功能逐渐降低。随着生活水平的提高，人们对外形的要求越来越高，在追求美的同时对安全性、有效性也有了更高的要求，水光注射仪的注射技术，微创、无痛，恢复快、效果好，受到了爱美人士的青睐。早在2000年前我国《黄帝内经》中已记载梅花针将药物导入皮肤治疗皮肤疾病，后来临床上通过注射器将透明质酸等药物进行皮肤局部注射，取得了很好的效果。水光注射仪注射技术则是在微电脑的控制下，通过负压系统将皮肤吸起，使接受注射的皮肤远离皮下的血管组织，然后通过9针型针头(针头直径仅32G，远远小于常规注射器针头直径)将药物注射至真皮层，注射过程中可以减少大量出血和血肿的风险；是一种使用负压把制剂精确、均匀导入到相应的真皮层的一种治疗方法。水光注射仪利用9针型针头，结合真空负压技术，使之使用相同的剂量，对每个单位面积(1cm2)进行平均覆盖，是从传统的点状充填到面状充填的新突破。相比5针型针头，9针型针头在相同的皮肤接触面积上，针孔更小，单位面积注射的药液更多更均匀，皮肤微创针孔恢复更快。相比通过皮下注射的方法将美容产品注射至皮肤软组织的方法，水光注射仪能更广泛地覆盖治疗面积，通过术前外敷麻醉剂，达到无痛微创美容的功效；并且微电脑控制施药，避免注射器人工注射剂量不易精确控制；使用快捷方便，治疗仅需十几分钟，术后恢复快，效果明显。间充质干细胞(mesenchymalstemcell,MSCs)是来源于中胚层的具有高度自我更新能力和多向分化潜能的多能干细胞，是人体各器官、组织的储备细胞，可以长时间自我复制而维持其干细胞性，在体外经连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能；在体内或体外特定的诱导条件下，可分化为骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、神经细胞等，可以作为组织工程研究的细胞来源，修复受损的组织和细胞，促进组织愈合；另外，间充质干细胞也可以分泌多种生物活性分子(旁分泌作用)，包括生长因子、细胞因子和趋化因子，例如肝细胞生长因子、基质源性因子-1和单核细胞趋化蛋白-1、血管内皮生长因子、胰岛素样生长因子-1、金属蛋白、基质金属蛋白酶-2、白细胞介素-8、脑源性神经营养因子和胶质细胞源性神经营养因子，可抑制组织细胞的凋亡，调节免疫功能，促进组织本身内源性干细胞的增殖和分化，加速组织损伤恢复；并且这种旁分泌作用可能在组织修复中的作用更重要，因为从静脉注射移植的MSC绝大部分发布在肝、脾、肺和其他组织内的毛细血管中，能归巢到需要修复组织的MSC极少。除此以外，MSC还可通过紧密连接，缝隙连接等与需要修复的细胞发生相互作用，影响其增殖、分化、迁徙能力。人脐带间充质干细胞(HumanUmbilicalcord-mesenchymalstemcells，hUC-MSCs)是指存在于新生儿脐带组织中的一种多功能干细胞。hUC-MSCs形态、免疫表型以及多向分化潜能等多种生物学特性与骨髓MSCs极为相似，并且hUC-MSCs表达SSEA4、Oct-4、Nanog和Sox-2等胚胎干细胞标志物，可能是一群更为原始的干细胞。此外，hUC-MSCs还有取材方便、安全无病毒感染风险；脐带内含量高，细胞增殖能力稳定，可在短时间内大量扩增，易于工业化制备；不表达/低表达HLA-I类分子、不表达HLA-II类分子及共刺激分子，因此免疫原性极低，不易引起免疫排斥反应；回输体内后在组织局部微环境中能定向分化成多种组织细胞，安全性高和成瘤性低、不受伦理和法律限制等优势，使其较其他类型MSCs成为更为理想的种子细胞，是目前研究最多的间充质干细胞，具有广阔的临床应用前景。hUC-MSCs在体外条件下可分化为上皮细胞，形成3-4层类上皮细胞，具有向皮肤表皮和真皮分化的能力，并可形成微血管，是面部组织工程和再生医学领域的研究热点。除了作为种子细胞直接修复、替代衰老损伤的表皮细胞外，hUC-MSCs可通过旁分泌作用，调节衰老的皮肤干细胞的微环境，促进皮肤固有的表皮干细胞的增殖，并且hUC-MSCs可分化为表皮细胞和成纤维细胞，使得皮肤厚度增加，真皮中的胶原含量也显著性增加。目前，药物美容和外科整形美容都是一种治标不治本的临时措施，存在高风险、并发症、并伴有疼痛和淤青并且可能发生后遗症。而微创美容凭借高效、安全、易于操作及恢复快等优势日趋流行。其中微针美容被大多数求美者青睐。皮肤特别是角质层对药物透皮吸收具有屏障作用，阻碍药物的吸收，微针能够刺穿皮肤的角质层屏障，产生微通道来增加药物的渗入，药物(干细胞)通过微针孔隙渗入皮肤真皮层的毛细血管网的间隙中，通过微循环提供的氧气和营养物质干细胞可在局部定植、存活，可作为种子工程细胞补充皮肤局部随着年龄增加逐渐减少的表皮干细胞，并在局部通过旁分泌作用修复局部衰老受损的细胞或者促进皮肤固有的表皮干细胞的增殖、活化另外干细胞的多向分化潜能使局部定植的干细胞在表皮局部微环境的作用下定向分化为表皮细胞、成纤维细胞等，促进表皮增厚、胶原合成等，从而增加皮肤的弹性和厚度，可有效缓解皮肤皱纹的产生。相比注射玻尿酸、肉毒杆菌素等方法，注射干细胞到皮肤局部能明显提高皮肤的功能，结合水光注射仪的使用，能够达到足量、快速的给药目的，大大减少了药物的剂量和提高了药物的疗效。由于水光注射仪一般穿刺深度仅在角质层及真皮浅层，未接触到大的神经和血管，同时结合负压技术吸起皮肤，使接受注射的皮肤远离皮下的血管组织，结合直径为32G针头的使用，进一步减少大量出血和血肿的风险，减少了对机体组织的损伤程度和机体的疼痛感，同时可刺激真皮层的成纤维细胞增生、合成胶原纤维从而使皮肤增厚、皱纹减轻甚至消失。已有研究已经证实了微针的安全性和无刺激性。因此，微针透皮导入药物方式是安全、高效和无痛给药的最佳方式。
技术实现思路
本专利技术综合利用干细胞移植技术和微针给药技术，提供了一种水光注射仪注射脐带间充质干细胞制剂及其应用。本专利技术利用微针透皮技术可以增加干细胞输送效率，直接到达皮肤需要治疗的部位，可以定点、定层、定量的将有效成分直接输送到所需的皮肤组织，治疗面积广泛，可全面覆盖整个治疗区域，连续使用可明显减少眼角周本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种水光注射仪注射脐带间充质干细胞制剂，其特征在于所述制剂为由脐带间充质干细胞和生理盐水组成的干细胞悬液，其中：脐带间充质干细胞和生理盐水的总体积为5毫升，干细胞悬液中脐带间充质干细胞的细胞总数为1×10

【技术特征摘要】
1.一种水光注射仪注射脐带间充质干细胞制剂，其特征在于所述制剂为由脐带间充质干细胞和生理盐水组成的干细胞悬液，其中：脐带间充质干细胞和生理盐水的总体积为5毫升，干细胞悬液中脐带间充质干细胞的细胞总数为1×106～1×107个。2.根据权利要求1所述的水光注射仪注射脐带间充质干细胞制剂，其特征在于所述脐带间充质干细胞为第四代脐带间充质干细胞。3.根据权利要求1或2所述的水光注射仪注射脐带间充质干细胞制剂，其特征在于所述脐带间充质干细胞的制备方法如下：步骤一、干细胞种子库的建立(1)无菌条件下获取经检测合格的脐带组织，保存至4℃无菌生理盐水中、密封，4h内冷链运输至GMP车间；(2)生物安全柜中，将脐带转至10cm培养皿中，浸于75～80％乙醇中消毒2～5min，氯化钠注射液清洗3～5次，去除血渍；无菌剪刀剪去脐带两端手术结扎线，然后将制备用脐带剪至2～3cm数段，按血管螺旋走向剔除2条脐动脉和1条脐静脉；用有齿镊将位于羊膜与血管间的白色组织Wharton胶质剥离下来，氯化钠注射液洗涤胶体3～5次；(3)将获得的胶体转移至50ml离心管，加入20～30ml氯化钠注射液，离心5～10min，弃上清液，称重记录，加入1～2ml培养基，用无菌组织剪将胶体剪至1～4mm3组织匀浆块；加入培养基使将组织匀浆块浓度定为0.5～1.0g/ml，电动移液器吹打均匀后，每个T175培养瓶中接种2.33ml组织匀浆，补加25ml培养基；(4)原代培养5～6天后进行培养基全量换液，9～10天后吸掉半量培养基，补足等量新鲜培养基进行半量换液；根据细胞生长状态，培养至12～13天再进行一次半量换液，培养至第14～17天，待细胞克隆团面积百分比达80～85％时，用胰酶消化后收获细胞；(5)将细胞按5～10×103/cm2的密度接种至2层细胞工厂中进行干细胞扩增培养；培养3～5天后当细胞融合至90～95％，将干细胞消化，继续按5～10×103/cm2的密度接种至10层细胞工厂中进行干细胞扩增培养；培养3～5天后当细胞融合至90～95％，将干细胞消化，每个10层细胞工厂生产的干细胞取样、做质控检测，然后用无血清细胞冻存液重悬、按5～10×106cells/ml/管的密度分装于细胞冻存管中，在-80℃放置至少24小时后置于液氮罐中深低温保存，建立干细胞种子库，并进行种子库的检定；(6)复苏干细胞，离心去除冻存液后，氯化钠注射液洗涤细胞沉淀1次后，按5～10×103/cm2的密度将干细胞接种于2层细胞工厂中进行干细胞扩增培养；培养3～5天后当细胞融合至90～95％时，将干细胞消化、吹打混匀后，将单细胞悬液按5～10×103/cm2的密度接种于10层细胞工厂中进行干细胞扩增培养；待细胞融合度达到90～95％，将干细胞消化，回收干细胞，每个10层细胞工厂生产的干细胞取样、做质控检测，然后用无血清细胞冻存液重悬、按5～10×106cells/ml/管分装，冻存，建立干细胞工作库，并进行干细胞工作库的检定；步骤二、脐带间充质干细胞的制备(1)在干细胞种子库中取1支装5～10×106cells/ml/管的P2代脐带间充质干细胞，将其复苏后按5～10×103cells/cm2的密度接种到1个2层细胞工厂中进行干细胞扩增培养；(2)待细胞融合度达90～95％时，将2层细胞工厂的干细胞消化下来，按5～10×103cells/cm2的密度接种到1个10层细胞工厂中进行干细胞扩增培...

【专利技术属性】
技术研发人员：王冰，张伟涛，王康，沈洁，沈艳，
申请(专利权)人：深圳市旷逸生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44