铂-纳米花及其制备方法和应用技术

铂‑纳米花及其制备方法和应用，属于食源性致病菌快速检测领域。本发明专利技术的一种靶标食源性病菌的检测方法采用具有催化硼烷氨效应的铂‑纳米花(PPN)传感器体系实现，将修饰生物素Biotin的食源性病原菌抗体固定在标记链霉亲和素SA的磁珠上；加入待测样品37℃恒温孵育2h，用0.1～0.5mM磷酸盐缓冲液PBS清洗3次后吸干；加入铂‑纳米花，在靶标食源性病原菌存在时磁珠上的靶标抗体与铂‑纳米花之间形成三明治夹心免疫复合物；加入氢氧化钠充分释放纳米花中的纳米铂，再加入产气底物硼烷氨，激发硼烷氨分解并产生氢气，采用氢气探测仪并读取氢气浓度，利用其读数进行计算实现靶标食源性病菌浓度的测定。本发明专利技术操作简单、成本低廉、灵敏度高、特异性好。

Pt-nanoflowers and their preparation methods and Applications

Platinum nanoflowers and their preparation methods and applications belong to the field of rapid detection of foodborne pathogenic bacteria. The detection method of the target foodborne pathogens of the present invention is realized by a platinum nanoflower (PPN) sensor system with catalytic borane ammonia effect. The food-borne pathogenic bacteria antibody modified biotin Biotin is fixed on the magnetic beads labeled streptavidin SA; the tested samples are incubated at 37 C for 2 hours at constant temperature, cleaned with 0.1-0.5mM phosphate buffer PBS for 3 times, and then dried; and platinum nanoparticles are added. Flowers form sandwich immune complexes between target antibodies on magnetic beads and platinum nanoflowers in the presence of target foodborne pathogens; Nanoplatinum in nanoflowers is fully released by adding sodium hydroxide, then borane ammonia is added to stimulate borane ammonia decomposition and hydrogen generation. Hydrogen detector is used to read hydrogen concentration, and its readings are used to calculate the target food source. Determination of the concentration of venereal pathogens. The invention has the advantages of simple operation, low cost, high sensitivity and good specificity.

【技术实现步骤摘要】
铂-纳米花及其制备方法和应用
本专利技术属于食源性致病菌快速检测
，具体涉及一种铂-纳米花及其制备方法和应用。
技术介绍
近几年，食品安全问题得到了愈加广泛的关注，在所有食源性疾病致病因素包括微生物因素、化学物理以及有毒动植物因素中，微生物因素是最重要的致病因素，高居第一位。食源性病原菌作为一种常见微生物，分布极为广泛，是影响食品安全的最重要的因素之一。因此，开展食源性致病菌的快速检测研究势在必行。目前用于检测鉴定食源性致病菌的方法主要包括传统的分离鉴定检测方法，免疫学法及分子生物学检测方法。传统培养方法如平板划线法，由于操作繁琐、所需时间长、低灵敏度等原因，已经无法满足现代检测工作中对快速便捷检测的要求。酶联免疫法(ELISA)方法容易污染，检测灵敏度受抗原-抗体结合能力影响，且需要制备高效抗体。常用的聚合酶链式反应技术(PCR)，具有较好的灵敏性，但是PCR技术需要反复的变温加热，所需仪器复杂，对操作人员技术要求较高。随着现代食品卫生及检测速度的发展要求，对食源性致病菌的检测手段要求操作简便、灵敏快速、适应性强，显然上述方法已不能满足这些要求。自纳米技术问世以来，因其具有制本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.铂‑纳米花，其特征在于，其组成成分为：纳米铂、抗菌肽、CuSO4和磷酸盐缓冲液PBS。

【技术特征摘要】
1.铂-纳米花，其特征在于，其组成成分为：纳米铂、抗菌肽、CuSO4和磷酸盐缓冲液PBS。2.制备权利要求1所述的铂-纳米花的方法，其特征在于，包括以下步骤：取1.5mL离心管，依次加入10～100μL、0.5mg/mL纳米铂、0.01～0.1/mL抗菌肽悬浮于800～1500μL、10mM的磷酸盐缓冲液PBS中，所述磷酸盐缓冲液PBS中含有20μL、120mM的CuSO4，经震荡混匀、常温静置孵育12～24h后，10000rpm离心3～5min，弃上清后加入100μL、0.1mM的磷酸盐缓冲液PBS悬浮，4℃保存备用。3.一种含有权利要求1所述的铂-纳米花的具有催化硼烷氨效应的铂-纳米花传感器体系。4.根据权利要求3所述的铂-纳米花传感器体系，其特征在于，该体系包括修饰生物素Biotin的食源性病原菌抗体、链霉亲和素SA标记的磁珠、铂-纳米花、硼烷氨，用于检测靶标食源性病菌。5.采用权利要求3所述的铂-纳米花传感器体系检测靶标食源性病菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、制备修饰生物素Biotin的食源性病原菌抗体；步骤二、将修饰生物素Biotin的食源性病原菌抗体固定在标记链霉亲和素SA的磁珠上；步骤三、加入待测样品，37℃恒温孵育2h进行磁性分离，用0.1～0.5mM磷酸盐缓冲液PBS清洗3次后吸干；步骤四、加入铂-纳米花，在靶标食源性病原菌存在时，磁珠上的靶标抗体与铂-纳米花之间形成三明治夹心免疫复合物；步骤五、加入3～5M氢氧...

【专利技术属性】
技术研发人员：万家余，王奎宇，卜胜君，
申请(专利权)人：军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所，
类型：发明
国别省市：吉林,22