一种针对KRAS基因突变检测的试剂盒制造技术

本发明专利技术提出了一种新的针对KRAS基因突变检测的试剂盒，运用了双相酶系统RNase H2和DNA聚合酶技术，由于采用的是双酶系统扩增法，在普通引物的基础上有所改变，即在引物序列SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.7的3'端连接有间隔臂x，这样使引物能够特异地与模板序列结合，并在RNase H2剪切后能特异扩增；设计了针对KRAS基因突变位点的引物探针，采用荧光PCR，封闭式检测，减少了后期污染的可能性；本发明专利技术提供的试剂盒的敏感度高，检测快速，稳定性好，封闭式检测，减少了后期污染的可能性。

A Kit for Detecting KRAS Gene Mutation

The present invention proposes a new kit for KRAS gene mutation detection, which uses two-phase enzyme system RNase H2 and DNA polymerase technology. Due to the use of double-enzyme system amplification method, it has been changed on the basis of common primers, i.e., the 3'end of primer sequence SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.7 is connected with spacer arm x, so that primers can specifically bind with template sequence, and After RNase H2 shearing, it can amplify specifically; a primer probe for mutation site of KRAS gene is designed, which uses fluorescent PCR and closed detection to reduce the possibility of late contamination; the kit provided by the invention has high sensitivity, fast detection, good stability, closed detection, and reduces the possibility of late contamination.

【技术实现步骤摘要】
一种针对KRAS基因突变检测的试剂盒
本专利技术涉及分子生物学
，具体涉及一种针对KRAS基因突变进行检测的试剂盒。
技术介绍
KRAS属于Ras基因家族主要成员之一，位于EGFR信号通路的下游。KRAS编码P21蛋白，在MAPK信号通路中起作用，是一种致癌基因，能够与GDP/GTP结合并促进GTP酶活性。当KRAS发生突变时不能被水解酶水解失活，并处于持续激活状态，可以引起RAF/MAPK的上调，传递多种生存通路信号，从而使细胞过度生长、增殖，抑制EGFR-TKIs的作用。17％到25％人类肿瘤中存在KRAS基因的突变，其突变可以导致多种恶性肿瘤，包括胰腺(95％)，甲状腺(55％)，大肠癌(35％)，肺癌(35％)等。KRAS基因被激活最常见的方式是点突变，多发生在N端的第12、13和61、146密码子，其中以第12密码子突变最常见。Ras家族基因在癌症中没有可用的药物直接拮抗此靶点，主要影响信号通路上下游靶点药物的使用效果，突变主要导致EGFR靶向药，BRAF靶向药的耐药性等。全球结直肠癌每年新发病例数约120万，年病死人数超过60万，发病率居第4位。近些年，结直肠癌的发本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种针对KRAS基因突变检测的引物组合，其特征在于：所述引物组合包括：引物序列SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.8。

【技术特征摘要】
1.一种针对KRAS基因突变检测的引物组合，其特征在于：所述引物组合包括：引物序列SEQIDNO.1～SEQIDNO.8。2.一种针对KRAS基因突变检测的探针，其特征在于：所述探针包括针对KRAS基因突变对应的探针序列SEQIDNO.9，序列SEQIDNO.9的5’端标记有荧光基团，3’端标记有淬灭基团。3.如权利要求2所述的一种针对KRAS基因突变检测的探针，其特征在于：所述SEQIDNO.9探针5’端标记有FAM荧光基团，3’端标记有淬灭基团BHQ1。4.一种针对KRAS基因突变检测的酶混合液，其特征在于：包括RNaseH2和TaqDNA聚合酶，所述RNaseH2和TaqDNA聚合酶酶活性浓度比为1:50～1:400。5.如权利要求4所述的一种针对KRAS基因突变检测的酶混合液，其特征在于：所述酶混合液中，RNaseH2与TaqDNA聚合酶酶活性浓度比为1:300。6.一种针对KRAS基因突变检测的试剂盒，其特征在于：包括权利要求1所述的引物序列SEQIDNO.1～SEQIDNO.8、权利要求2所述探针序列SEQIDNO.9、权利要求4所述酶混合液、PCR缓冲液和4种dNTPs。7.如权利要求6所述的一种针对KRAS基因突变检测的试剂盒，其特征在于：包括如下试剂：(1)PCR反应预混液：成分包括PCR缓冲液、4种dNTPs、探针SEQIDNO.9和通用人源性内标探针、引物由SEQIDNO.1～SEQI...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐志勇，秦伟，
申请(专利权)人：武汉千麦医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42