The present invention proposes a new kit for detecting gene mutation at EGFR T790M locus, which uses two-phase enzymatic system RNase H2 and DNA polymerase technology. Because of the double-enzyme system amplification method, it has been changed on the basis of common primers, i.e. the 3'end of primer sequence SEQ ID NO.1 is connected with spacer arm x, so that the primers can specifically bind to template sequence and bind to R. Nase H2 can be specifically amplified after shearing; a primer probe for EGFR T790M mutation site is designed, using fluorescent PCR and closed detection to reduce the possibility of late contamination; the kit provided by the invention has high sensitivity, fast detection, good stability, closed detection, and reduces the possibility of late contamination.
【技术实现步骤摘要】
一种针对EGFRT790M位点突变进行检测的试剂盒
本专利技术涉及分子生物学领域,具体涉及一种针对EGFRT790M位点突变进行检测的试剂盒。
技术介绍
近年来,以表皮生长因子受体(EpidermalGrowthFactorReceptor,EGFR)为治疗靶标的分子靶向治疗(MolecularTargetedTherapy)受到了国内外肿瘤界的普遍关注,其中EGFR酪氨酸激酶抑制剂Genfitinib(又称Iressa)和Erlotinib(又称Tarceva)已被美国食品药品管理局(FDA)批准用于治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC),并且Gefitinib还分别获得包括日本、澳大利亚等27个国家的批准,我国也于2005年2月批准了Genfitinib进入临床。资料显示,大量临床研究证实,EGFR突变阳性者对EGFR-TKI的有效率为50%~80%,而野生型患者的有效率仅约10%~15%。而且,诊断明确的NSCLC病人,给予吉非替尼或埃罗替尼治疗,治疗开始阶段病情有明显改善,但在继续用药过程中病情复发,有研究证实可能是EGFR基因编码区出现T790M(2369C>T)突变造成的药物失效,需要及时更换新的有效抑制剂或应用其它治疗方法。关于T790M突变造成耐药的研究早已有报道。2005年2月Kobayashi等发表于《NEnglJMed》上的文章对1例治疗前组织中有delL747-S752位点缺失突变、接受吉非替尼二线治疗达完全缓解28个月后疾病进展的71岁患者进行了二次活检,分析其活检组织基因突变状况,发现在原有突变基础上EGFR确实发生了新的基因 ...
【技术保护点】
1.一种针对EGFR T790M位点基因突变检测的引物组合,其特征在于:所述引物组合包括:引物序列SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2。
【技术特征摘要】
1.一种针对EGFRT790M位点基因突变检测的引物组合,其特征在于:所述引物组合包括:引物序列SEQIDNO.1和SEQIDNO.2。2.一种针对EGFRT790M位点基因突变检测的探针,其特征在于:所述探针包括针对EGFRT790M位点基因突变对应的探针序列SEQIDNO.3,序列SEQIDNO.3的5’端标记有荧光基团,3’端标记有淬灭基团。3.如权利要求2所述的一种针对EGFRT790M位点基因突变检测的探针,其特征在于:所述SEQIDNO.3探针5’端标记有FAM荧光基团,3’端标记有淬灭基团BHQ1。4.一种针对EGFRT790M位点基因突变检测的酶混合液,其特征在于:包括RNaseH2和TaqDNA聚合酶,所述RNaseH2与TaqDNA聚合酶酶活性浓度比为1:50~1:400。5.如权利要求4所述的针对EGFRT790M位点基因突变检测的酶混合液,其特征在于:所述酶混合液中,RNaseH2与TaqDNA聚合酶酶活性浓度比为1:250。6.一种针对EGFRT790M位点基因突变检测的试剂盒,其特征在于:包括权利要求1所述引物序列SEQIDNO.1和SEQIDNO.2、权利要求2所述探针序列SEQIDNO.3、权利要求4所述酶混合液、PCR缓冲液和4种dNTPs。7.如权利要求6所述的针对EGFRT790M位点基因突变检测的试剂盒,其特征在于:包括如下试剂:(1)PCR反应预混液:成分包括PCR缓冲液、4种dNTPs、探针序列SEQIDNO.3和通用人源性内标探针,及由SEQID...
【专利技术属性】
技术研发人员:徐志勇,秦伟,
申请(专利权)人:武汉千麦医学检验所有限公司,
类型:发明
国别省市:湖北,42
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