用于治疗癌症的PD-l拮抗剂和RAF抑制剂的组合制造技术

本申请公开了用于预防癌症、延缓癌症进展或治疗癌症的药物组合，其中所述药物组合展现出协同功效。所述药物组合包含针对PD‑1的人源化拮抗剂单克隆抗体和RAF抑制剂。本申请还公开了用于在受试者中预防癌症、延缓癌症进展或治疗癌症的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的针对PD‑1的人源化拮抗剂单克隆抗体和治疗有效量的RAF抑制剂。

Combination of PD-l antagonists and RAF inhibitors for cancer treatment

This application discloses a combination of drugs for cancer prevention, delaying cancer progression, or treating cancer, wherein the combination of drugs exhibits synergistic effects. The drug combination comprises a humanized antagonist monoclonal antibody and a RAF inhibitor for PD 1. The application also discloses methods for preventing cancer, delaying cancer progression or treating cancer in subjects, including the application of a therapeutic effective dose of humanized antagonist monoclonal antibody against PD_1 and a therapeutic effective dose of RAF inhibitor to the subjects.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗癌症的PD-l拮抗剂和RAF抑制剂的组合本申请要求国际申请PCT/CN2016/088591的优先权，通过引用将其全部内容并入本申请。
本申请公开了用于预防癌症、延缓癌症进展或治疗癌症的药物组合，其中所述药物组合展现出协同功效。所述药物组合包含针对PD-1的人源化拮抗剂单克隆抗体和RAF抑制剂。本申请还公开了用于在受试者中预防癌症、延缓癌症进展或治疗癌症的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的针对PD-1的人源化拮抗剂单克隆抗体和治疗有效量的RAF抑制剂。
技术介绍
由RAS-RAF-MEK-ERK激酶级联构成的丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号传导途径是调节多种细胞活性诸如细胞存活、生长、分化和增殖的关键信号转导途径之一。通常在人类癌症中观察到导致MAPK途径组成性活化的遗传畸变。已在多种人类恶性肿瘤中检测到致癌性B-Raf突变，其中V600E突变占至少90％。选择性靶向于突变的B-Raf的抑制剂诸如威罗菲尼(vemurafenib)和达拉菲尼(dabrafenib)已实现高响应率并被FDA批准用于治疗携带B-RafV600E的黑素瘤患者。先前的研究表明B-Raf靶向疗法可增加抗原表达，降低肿瘤微环境中的免疫抑制因子并改善T效应细胞向肿瘤的归巢。因此，选择性B-Raf抑制剂被认为具有免疫增敏性质并可与免疫疗法联用以在治疗癌症中实现较持久的疾病控制/响应。程序性死亡1蛋白(PD-1、Pdcd-1或CD279)是一种与CD28/CTLA4共刺激/抑制受体家族相关的55KD受体蛋白(Blank等人,2005CancerImmunolImmunother54:307-314)。全长PD-1含有288个氨基酸残基(NCBI登录号:NP_005009)。它的细胞外结构域由氨基酸残基1-167构成且胞质C末端尾部包含残基191-288，其具有两个假设的免疫调节基序即一个基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM；Vivier等人,1997ImmunolToday18:286-291)和一个免疫受体酪氨酸切换基序(ITSM；Chemnitz等人,2004JImmunol173:945-954)。已鉴定了两种与序列相关的配体即PD-L1(B7-H1)和PD-L2(B7-DC)与PD-1特异性相互作用，由此诱导细胞内信号转导，其抑制由CD3和CD28介导的T细胞活化(Riley,2009ImmunolRev229:114-125)，这又减弱T细胞活性，例如减少细胞增殖、IL-2和IFN-γ分泌及其它生长因子和细胞因子分泌。经常在诸如T细胞、B细胞、单核细胞和天然杀伤(NK)细胞的免疫细胞中发现PD-1的表达。其很少在诸如肌肉、上皮、神经元组织等的其它人类组织中表达。另外，高水平的PD-1表达常常与免疫细胞的活化相关。例如，当人T细胞系Jurkat通过植物血凝素(PHA)或佛波醇酯(12-O-十四酰基佛波醇-13-乙酸酯或TPA)来活化时，在Western印迹中可见PD-1表达的上调(Vibharka等人,1997ExpCellRes232:25-28)。当通过抗CD3抗体进行刺激时，在经刺激的鼠类T和B淋巴细胞及原代人类CD4+T细胞中观察到相同的现象(Agata等人,1996IntImmunol8:765-772；Bennett等人,2003JImmunol170:711-118)。PD-1表达在刺激T效应细胞后的增加再次使活化的T效应细胞趋向于耗竭和减少免疫活性。因此，由PD-1介导的抑制信号在免疫耐受中发挥重要作用(Bour-Jordan等人,2011ImmunolRev241:180-205)。在涉及不同类型组织和器官的多种癌症中报告了PD-1表达在肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)中的增加和PD-1配体表达在肿瘤细胞中的增加，所述组织和器官为诸如肺(Konishi等人,2004ClinCancerRes10:5094-5100)、肝(Shi等人,2008IntJCancer128:887-896；Gao等人,2009ClinCancerRes15:971-979)、胃(Wu等人,2006ActaHistochem108:19-24)、肾(Thompson等人,2004ProcNatlAcadSci101:17174-17179；Thompson等人,2007ClinCancerRes13:1757-1761)、乳腺(Ghebeh等人,2006Neoplasia8:190-198)、卵巢(Hamanishi等人2007ProcNatlAcadSci104:3360-3365)、胰腺(Nomi等人,2007ClinCancerRes13:2151-2157)、黑素细胞(Hino等人,2010Cancer116:1757-1766)和食道(Ohigashi等人,2005ClinCancerRes11:2947-2953)。更经常地，PD-1和PD-L1表达在那些癌症中的增加与患者生存结果的不良预后是相关的。敲除PD-1基因由此抑制异体移植癌细胞生长的转基因小鼠进一步阐明了PD-1信号传导在用于癌症根治或耐受的免疫系统调节中的重要性(Zhang等人,2009Blood114:1545-1552)。WO2013/097224A1公开了第二代B-RAF抑制剂，其已表现出针对RAF家族的丝氨酸/苏氨酸激酶的强效抑制活性。PCT申请PCT/CN2016/079251在WO2013/097224A1中公开了第二代B-RAF抑制剂的药用盐，具体为5-(((1R,1aS,6bR)-1-(6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-1a,6b-二氢-1H-环丙并[b]苯并呋喃-5-基)氧基)-3,4-二氢-1,8-二氮杂萘-2(1H)-酮倍半马来酸盐(以下称为化合物1)，其用于治疗在RAF-MEK-ERKMAPK途径中具有畸变(包括B-Raf突变、K-Ras/N-Ras突变和NF1突变)的癌症，其具有针对RAF家族激酶(包括A-Raf、B-Raf、C-Raf和B-RafV600E)的强效和可逆抑制活性。WO2015/035606A1公开了包含重链可变区(Vh)和轻链可变区(Vk)(分别包含SEQIDNo24和SEQIDNo26)及IgG4重链效应子或恒定结构域(包含SEQIDNO:88)的单克隆抗体(以下称为Mab1)，其特异性结合PD-1，尤其是包含K45和I93或I93、L95和P97的PD-1残基且在免疫细胞中抑制由PD-1介导的细胞信号传导和活性，结合至其配体结合所需要的一组氨基酸残基的抗体。本申请专利技术人已发现上述抗PD1抗体(即Mab1)及其抗体片段与选择性B-Raf抑制剂(即化合物1)的组合令人惊讶且预料不到地在患有与K-Ras突变相关的癌症的受试者中通过增加IFN-γ产生而增强T细胞响应。具体地，本申请专利技术人已预料不到地发现具体的抗PD1抗体(即Mab1)和具体的选择性B-Raf抑制剂(即化合物1)的组合与单独的所述抗PD1抗体或B-Raf抑制剂的单一疗法相比在与K-Ras突变相关的癌症中实现对肿瘤生长的协同抑制。
技术实现思路
在第一个方面，本申请公开了用于预防癌症、延缓癌症进展或治疗癌症的药物组合，其本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于在受试者中预防癌症、延缓癌症进展或治疗癌症的方法，其包括向有此需要的受试者施用治疗有效量的PD‑1拮抗剂与治疗有效量的RAF抑制剂的组合，其中所述PD‑1拮抗剂为与人PD‑1特异性结合的抗体或其抗原结合片段；且其中所述RAF抑制剂为式(I)化合物或其立体异构体或其药用盐：

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.07.05 CN PCT/CN2016/0885911.用于在受试者中预防癌症、延缓癌症进展或治疗癌症的方法，其包括向有此需要的受试者施用治疗有效量的PD-1拮抗剂与治疗有效量的RAF抑制剂的组合，其中所述PD-1拮抗剂为与人PD-1特异性结合的抗体或其抗原结合片段；且其中所述RAF抑制剂为式(I)化合物或其立体异构体或其药用盐：其中X选自CH2和O；R8、R9、R10和R11可相同或不同，各自选自氢、卤素、烷基、烯基、环烷基、芳基、杂环基、杂芳基、炔基、-NR13R14、-OR13、-COR13、-CO2R13、-CONR13R14、-C(＝NR13)NR14R15、-NR13COR14、-NR13CONR14R15、-NR13CO2R14、-SO2R13、-SO2芳基、-NR13SO2NR14R15和-NR13SO2R14，其中所述烷基、烯基、炔基、环烷基、杂芳基、芳基和杂环基各自任选取代有至少一个取代基R16；或(R8和R9)和/或(R9和R10)和/或(R10和R11)与和它们连接的环一起形成选自杂环基和杂芳基环的稠环，其任选取代有至少一个取代基R16；R13、R14和R15可相同或不同，各自选自H、卤代烷基、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；或(R13和R14)和/或(R14和R15)与和它们连接的原子一起各自形成选自杂环基和杂芳基环的环，其取代有至少一个取代基R16；R16选自卤素、卤代烷基、烷基、烯基、环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、炔基、氧代、-CN、-OR’、-NR’R”、-COR’、-CO2R’、-CONR’R”、-C(＝NR’)NR”R”’、-NR’COR”、-NR’CONR’R”、-NR’CO2R”、-SO2R’、-SO2芳基、-NR’SO2NR”R”’、-NR’O2R”和-NR’SO2芳基，其中R’、R”和R”’独立选自H、卤代烷基、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；或(R’和R”)和/或(R”和R”’)与和它们连接的原子一起形成选自杂环基和杂芳基环的环。2.权利要求1的方法，其中所述PD-1拮抗剂为包含重链可变区(Vh)和轻链可变区(Vk)的抗体，所述重链可变区(Vh)和轻链可变区(Vk)含有下列互补决定区(CDR)：a)mu317CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3(分别为SEQIDNO:11,12,13)；和CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3(分别为SEQIDNO:14,15,16)；b)mu326CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3(分别为SEQIDNO:17,18,19)；和CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3(分别为SEQIDNO:20,21,22)；c)317-4B6CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3(分别为SEQIDNO:31,32,33)；和CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3(分别为SEQIDNO:34,35,36)；d)326-4A3CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3(分别为SEQIDNO:37,38,39)；和CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3(分别为SEQIDNO:40,41,42)；e)317-1HCDR-H1、CDR-H2和CDR-H3(分别为SEQIDNO:ll,59,13)；和CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3(分别为SEQIDNO:14,15,16)；f)317-4B2CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3(分别为SEQIDNO:ll,60,13)；和CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3(分别为SEQIDNO:61,15,16)；g)317-4B5CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3(分别为SEQIDNO:11,60,13)；和CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3(分别为SEQIDNO:61,15,16)；h)317-4B6CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3(分别为SEQIDNO:11,32,13)；和CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3(分别为SEQIDNO:61,15,16)；i)326-1CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3(分别为SEQIDNO:17,62,19)；和CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3(分别为SEQIDNO:20,21,22)；j)326-3B1CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3(分别为SEQIDNO:17,62,19)；和CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3(分别为SEQIDNO:20,21,22)；或k)326-3G1CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3(分别为SEQIDNO:17,62,19)；和CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3(分别为SEQIDNO:20,21,22)。3.权利要求1的方法，其中所述PD-1拮抗剂为包含重链可变区(Vh)和轻链可变区(Vk)的抗体，所述重链可变区(Vh)和轻链可变区(Vk)含有下列CDR的任意组合：(a)CDR-H1(SEQIDNO31)、CDR-H2(SEQIDNO12,32,59或60)和CDR-H3(SEQIDNO33)，CDR-L1(SEQIDNO14,34或61)、CDR-L2(SEQIDNO35)和CDR-L3(SEQIDNO36)；或(b)CDR-H1(SEQIDNO37)、CDR-H2(SEQIDNO18,38或62)和CDR-H3(SEQIDNO39)，CDR-L1(SEQIDNO40)、CDR-L2(SEQIDNO41)和CDR-L3(SEQIDNO42)。4.权利要求2-3中任一项的方法，其中所述PD-1拮抗剂为包含重链可变区(Vh)和轻链可变区(Vk)的抗体，所述重链可变区(Vh)和轻链可变区(Vk)包含：a)mu317(分别为SEQIDNO:4和6)；p)317-3H1(分别为SEQIDNO:69和26)；b)mu326(分别为SEQIDNO:8和10)；q)317-311(分别为SEQIDNO:70和26)；c)317-4B6(分别为SEQIDNO:24和26)；d)326-4A3(分别为SEQIDNO:28和30)；r)317-4B1(分别为SEQIDNO:71和26)；e)317-4B2(分别为SEQIDNO:43和44)；s)317-4B3(分别为SEQIDNO:72和26)；f)317-4B5(分别为SEQIDNO:45和46)；t)317-4B4(分别为SEQIDNO:73和26)；g)317-1(分别为SEQIDNO:48和50)；u)317-4A2(分别为SEQIDNO:74和26)；h)326-3B1(分别为SEQIDNO:51和52)；v)326-3A1(分别为SEQIDNO:75和30)；i)326-3GI(分别为SEQIDNO:53和54)；w)326-3C1(分别为SEQIDNO:76和30)；j)326-1(分别为SEQIDNO:56和58)；x)326-3D1(分别为SEQIDNO:77和30)；k)317-3A1(分别为SEQIDNO:64和26)；y)326-3E1(分别为SEQIDNO:78和30)；l)317-3C1(分别为SEQIDNO:65和26)；z)326-3F1(分别为SEQIDNO:79和30)；m)317-3E1(分别为SEQIDNO:66和26)；aa)326-3BN55D(分别为SEQIDNO:80和30)；n)317-3F1(分别为SEQIDNO:67和26)；ab)326-4A1(分别为SEQIDNO:28和81)；或o)317-3G1(分别为SEQIDNO:68和26)；ac)326-4A2(分别为SEQIDNO:28和82)。5.权利要求2-3中任一项的方法，其中所述PD-1拮抗剂为含有IgG4重链效应子或恒定域的抗体，所述IgG4重链效应子或恒定域包含SEQIDNO:83-88中的任何一种。6.权利要求2-3中任一项的方法，其中所述PD-1拮抗剂为含有F(ab)或F(ab)2的抗体，所述F(ab)或F(ab)2包含权利要求2-5中任一项的结构域。7.权利要求1的方法，其中所述PD-1拮抗剂为包含重链可变区(Vh)和轻链可变区(Vk)及IgG4重链效应子或恒定域的抗体，所述IgG4重链效应子或恒定域包含SEQIDNO:87或88，其中所述重链可变区(Vh)和轻链可变区(Vk)包含：a)mu317(分别为SEQIDNO:4和6)；p)317-3H1(分别为SEQIDNO:69和26)；b)mu326(分别为SEQIDNO:8和10)；q)317-311(分别为SEQIDNO:70和26)；c)317-4B6(分别为SEQIDNO:24和26)；d)326-4A3(分别为SEQIDNO:28和30)；r)317-4B1(分别为SEQIDNO:71和26)；e)317-4B2(分别为SEQIDNO:43和44)；s)317-4B3(分别为SEQIDNO:72和26)；f)317-4B5(分别为SEQIDNO:45和46)；t)317-4B4(分别为SEQIDNO:73和26)；g)317-1(分别为SEQIDNO:48和50)；u)317-4A2(分别为SEQIDNO:74和26)；h)326-3B1(分别为SEQIDNO:51和52)；v)326-3A1(分别为SEQIDNO:75和30)；i)326-3GI(分别为SEQIDNO:53和54)；w)326-3C1(分别为SEQIDNO:76和30)；j)326-1(分别为SEQIDNO:56和58)；x)326-3D1(分别为SEQIDNO:77和30)；k)317-3A1(分别为SEQIDNO:64和26)；y)326-3E1(分别为SEQIDNO:78和30)；l)317-3C1(分别为SEQIDNO:65和26)；z)326-3F1(分别为SEQIDNO:79和30)；m)317-3E1(分别为SEQIDNO:66和26)；aa)326-3BN55D(分别为SEQIDNO:80和30)；n)317-3F1(分别为SEQIDNO:67和26)；ab)326-4A1(分别为SEQIDNO:28和81)；或o)317-3G1(分别为SEQIDNO:68和26)；ac)326-4A2(分别为SEQIDNO:28和82)。8.权利要求1的方法，其中所述PD-1拮抗剂为包含重链可变区(Vh)和轻链可变区(Vk)及IgG4重链效应子或恒定域的抗体，所述IgG4重链效应子或恒定域包含SEQIDNO:88，其中所述重链可变区(Vh)和轻链可变区(Vk)分别包含SEQIDNO:24和SEQIDNO:26。9.权利要求1的方法，其中式(I)中的R8、R9、R10和R11可相同或不同，各自独立选自烷基、氢、卤代烷基、卤素、羟基、-CN、-O烷基、-O卤代烷基和芳基。10.权利要求1的方法，其中所述RAF抑制剂为式(I)化合物或其立体异构体或其药用盐：其中X选自CH2和O；R8、R9、R10和R11可相同或不同，各自选自氢、卤素、烷基、-CN、环烷基、芳基、杂环基、-OR13、-CONR13R14，其中所述烷基和芳基各自任选取代有至少一个取代基R16；或(R8和R9)和/或(R9和R10)和/或(R10和R11)与和它们连接的环一起形成选自环烷基的稠环；R13和R14可相同或不同，各自选自H、烷基和卤代烷基；R16选自卤素、卤代烷基和烷基。11.权利要求1的方法，其中所述RAF抑制剂为式(I)化合物或其立体异构体或其药用盐：其中X选自CH2和O；R8选自H、F、Cl和Br；R9选自H、F、Cl、Br和C1-6烷基；R10选自H、F、Cl、Br、OH、-CN、C1-6烷基、CF3、苯基、OC1-6烷基、OC1-6卤代烷基和-CONR13R14，其中R13和R14可相同或不同，各自选自H和C1-6烷基；R11选自H、F、Cl、Br和CF3；或(R9和R10)与和它们连接的环一起形成选自C5-6环烷基的稠环。12.权利要求1的方法，其中所述RAF抑制剂为选自以下化合物的化合物或其立体异构体或其药用盐：13.权利要求1的方法，其中所述RAF抑制剂为选自以下化合物的化合物或其立体异构体或其药用盐：14.权利要求1的方法，其中所述RAF抑制剂为选自以下化合物的化合物或其药用盐：15.权利要求1的方法，其中所述RAF抑制剂为式(II)化合物或其药用盐：16.权利要求1的方法，其中所述RAF抑制剂为式(II)化合物的马来酸盐。17.权利要求1的方法，其中所述RAF抑制剂为式(III)化合物：其中n为约0.5至约1.5的数字。18.权利要求1的方法，其中所述RAF抑制剂为式(IIIa)化合物：19.权利要求1-18中任一项的方法，其中所述癌症为实体肿瘤。20.权利要求1-18中任一项的方法，其中所述癌症或肿瘤选自肾上腺癌、膀胱癌、骨癌、脑癌、乳腺癌、子宫颈癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌、头颈癌、肾癌、肝癌、肺癌(包括小细胞肺癌或非小细胞肺癌)、淋巴瘤、黑素瘤、卵巢癌、胰腺癌、皮肤癌或甲状腺肿瘤及其并发症。21.权利要求20的方法，其中所述癌症或肿瘤与B-Raf突变、K-Ras/N-Ras突变和/或NF1突变相关。22.权利要求21的方法，其中所述癌症或肿瘤为各自与K-Ras突变相关的非小细胞肺癌、结肠直肠癌和子宫内膜癌。23.权利要求1-22中任一项的方法，其中所述PD-1拮抗剂和所述RAF抑制剂同时、依序或分开施用。24.权利要求1-22中任一项的方法，其中所述RAF抑制剂以5-80mg的剂量每天一次口服施用。25.权利要求1-22中任一项的方法，其中所述PD-1拮抗剂以0.5-10mg/kg的剂量每周一次或每两周一次或每三周一次或每四周一次胃肠外施用。26.权利要求1的方法，其中所述PD-1拮抗剂为包含重链可变区(Vh)和轻链可变区(Vk)及IgG4重链效应子或恒定域的抗体，所述IgG4重链效应子或恒定域包含SEQIDNO:88，其中所述重链可变区(Vh)和轻链可变区(Vk)分别包含SEQIDNO:24和SEQIDNO:26；且所述RAF抑制剂为式(IIIa)化合物：27.权利要求1的方法，其中所述PD-1拮抗剂Mab-1以0.5-10mg/kg的剂量每周一次或每两周一次或每三周一次施用且作为所述RAF抑制剂的式(IIIa)化合物以5-80mg的剂量每天一次施用。28.权利要求1的方法，其中所述PD-1拮抗剂Mab-1以0.5-10mg/kg的剂量每周一次或每两周一次或每三周一次施用且作为所述RAF抑制剂的式(IIIa)化合物以10-30mg的剂量每天一次施用。2...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋兢，汪来，李康，张彤，罗侣松，魏旻，汤志宇，张国良，周昌友，
申请(专利权)人：百济神州有限公司，
类型：发明
国别省市：开曼群岛,KY