一株55型腺病毒及其制备的疫苗制品制造技术

本发明专利技术“一株55型腺病毒及其制备的疫苗制品”，属于医药领域，其毒株编号为DW55‑C20，保藏号为CGMCC No.13790。该毒株培养制得的纯病毒液滴度可到7.8±0.5LgCCID50/ml。制成的含有辅料的剂型，其病毒含量不低于4.5LgCCID50/mL。制成的疫苗制剂，纯度高，免疫活性高，具有良好的应用前景；本发明专利技术还提供了上述疫苗的制备方法，以及高效腺病毒毒株的筛选方法。

【技术实现步骤摘要】
一株55型腺病毒及其制备的疫苗制品
本专利技术涉及病毒疫苗技术，更具体地涉及一株55型腺病毒及其制备的疫苗制品。技术背景腺病毒是一种常见的呼吸道和消化道病原体，可以引起各种症状表现，常在军营和学校爆发流行。在美国军队，腺病毒引起的急性发热呼吸道感染是一个重要的死亡原因。在健康的新兵中，超过50％的发热呼吸道感染和超过90％的肺炎由腺病毒引起。美国新兵训练营多次有腺病毒感染爆发流行，常有死亡病例报道，病死原因多为并发肺炎。根据国外文献报道，腺病毒感染引起的肺炎如果不进行治疗，死亡率可以高达50％。腺病毒于1953年从人的增殖腺分离出来的，是一种无包膜的DNA病毒，可感染人和畜禽。腺病毒科分为哺乳动物腺病毒属和禽类腺病毒属，具有严格的寄主特异性，不感染其他动物，迄今共发现100余个血清型，其中人腺病毒有57种，分为7个亚群。腺病毒是呈二十面体对称的线性双链病毒，病毒颗粒直径约65～80nm，由蛋白衣壳、核心蛋白和DNA组成。蛋白衣壳由六邻体(hexon)、五邻体(penton)和纤突(fiber)三种主要的蛋白构成，共252个壳粒，二十面体12个顶角的壳粒即为五邻体，每个五邻体上有1条纤突，剩下240个非顶角壳粒为六邻体。蛋白衣壳的表面有四种小蛋白IIIa，VI，VIII和IX。病毒核心有六种结构成分，分别是V、VII、TP、μ、IVa2和ATP，前五种与双链DNA的基因组有关，ATP在病毒粒子装配过程中至关重要的蛋白酶。Fiber蛋白的结构包括球部、柄部和尾部，长度约为10～30nm，纤突球部有HAdV不同组别和型别的抗原表位，且不同的HAdV血清型纤突的长度和弯曲度均不同。每个六邻体蛋白是由基底部的五面体和塔尖的三角形组成，塔区有Loop1～Loop4四个环状结构构成，其中Loop1结构包括6个高变区，Loop2上有1个高变区，7个高变区含有血清型特异的抗原决定簇。因此，编码六邻体和纤维蛋白的基因序列适用于人腺病毒血清型间基因差异分析。历史上，腺病毒7型和腺病毒4型腺病毒在美国军队中是引起发热呼吸道感染的重要病原体。但是，近年来一个新的腺病毒亚型14型引发了一系列发热呼吸道感染，而且腺病毒14型成为美军中腺病毒感染的主要亚型。在2004年到2007年期间,美国的传染病监测系统检测到17次腺病毒14型疫情，其中十例(60％)来源于美国军队。上述情况说明14型腺病毒在美国军队发病率较高。2006-2007年间美国NewYork，Oregon，Washington,Texas等四个州共确诊140例腺病毒14型腺病毒引起的呼吸系统感染，其中53例(38％)住院，24例(17％)进入ICU，9例(5％)死亡。这些数字表明14型腺病毒具有较强的致病力。腺病毒55型是由腺病毒14型演化而来，它的基因组的绝大部分区域和腺病毒14型高度同源，只有保护性抗原Hexon基因大部分来源于腺病毒11型，因此腺病毒55型为一种新型的重组腺病毒，该病毒的定型是由美国国立卫生研究院人类腺病毒专业委员会主席、中国病原微生物生物安全国家重点实验室客座教授DonaldSeto于2010年正式定名。由于该病毒在抗原性及其编码基因上与11型腺病毒更加接近，过去被错误的定名为11a型。事实上，腺病毒55型与腺病毒14型的同源性远远高于和11型的同源性，而且从过去的几次在亚洲的流行特点来看，其感染特性和毒力也与腺病毒14型比较接近。虽然腺病毒55型只是在2010年才被定名，但是从NCBI核酸序列数据库的检索分析结果进行推测，可知该新型病毒早在2001年和2002年的台湾地区就已经出现，较大的疫情是在2004年4月，土耳其军营发生一次55型腺病毒疫情，该军营共有2,250名18-40岁男性参加了军事训练，几百人出现发病症状，一名26岁男性死亡，其中两名军人随后在德国被证实感染55型腺病毒(当时命名为腺病毒11a型)。另外一次腺病毒55型暴发疫情发生在新加坡，时间为2005年2-6月及10月，当时在招募的226名新兵中共监测到30例腺病毒阳性的临床病例，核酸序列分析证实其该腺病毒与2006年中国陕西分离的腺病毒毒株同源性为99.9％。目前没有针对腺病毒的特效治疗药物，治疗原则主要是对症治疗，采用支持疗法。研究显示，针对14型腺病毒，目前常见的抗病毒治疗药物疗效并不显著，更昔洛韦(Ganciclovir)体外抗病毒作用显著，但临床治疗无效。西多福韦(Cidofovir，CDV)是一种能抑制DNA多聚酶的广谱抗病毒药(包括单纯疱疹病毒、带状疱疹病毒、巨细胞病毒、EB病毒等)，经临床试验证实该药对腺病毒感染病例有效。缺点是只能静注，并且具有较严重的不可逆肾脏毒性。腺病毒感染的防控。腺病毒既可以通过呼吸道传播，也可以通过消化道传播，在防控上难道较大，通过控制传染源：早期发现患者，及时进行隔离治疗，对密切接触者进行医学观察和预防用药。切断传播途径：避免集体活动，减少人员外出，进行环境消毒，勤通风换气，保护易感人群：注意劳逸结合，提高机体免疫力。针对腺病毒引起的聚集性的急性上呼吸道感染流行状况，通过接种疫苗的方式，是有效预防腺病毒引起的急性上呼吸道感染疾病的爆发的理想方案，因此有必要筛选并鉴别出具有良好功效的用于预防腺病毒导致的急性上呼吸道感染的病毒株。
技术实现思路
本专利技术针对上述领域的需求，开发了用于预防腺病毒感染的急性呼吸道传染病的疫苗，经试验证明，所专利技术的疫苗具有有效的免疫活性，具体如下：本专利技术的一方面，公开了一种人工筛选获得的55型腺病毒，其毒株编号为DW55-C20，保藏号为CGMCCNo.13789。另一方面，公开了一种腺病毒疫苗原液,是上述55型腺病毒接种到细胞工厂中产生的收获液经过滤去除细胞碎片和杂菌之后收集的病毒液。所述55型腺病毒DW55-C20的滴度值不低于7.8±0.5LgCCID50/ml。再另一方面，提供了一种腺病毒疫苗制品，其特征在于：由免疫活性成分和药学上可接受的辅料组成，所述免疫活性成分是上述7型腺病毒接种到细胞工厂中产生的收获液，经过滤去除细胞碎片和杂菌之后的纯化产物进一步地，疫苗制品为口服包芯片，所述药学上可接受的辅料指作为冻干保护成分的脱脂牛奶和乳糖；作为包衣成分的微晶纤维素和乳糖；每片包芯片指，所述55型腺病毒DW55-C20病毒不低于4.5LgCCID50/mL。进一步地，提供一种腺病毒疫苗制品，其特征在于：为半成品，是在上述55型腺病毒接种到细胞工厂中产生的收获液经过滤去除细胞碎片和杂菌之后的病毒液中加入终浓度为w/w4-10％的蔗糖和w/w1-5％的人血白蛋白，经混匀、冻干制得的冻干制品。进一步地，提供一种腺病毒疫苗制品，其特征在于，为包芯片剂，是在上述半成品中加入赋形剂、崩解剂、助流剂混合制成；所述55型腺病毒含量不低于6.5±1.0LgCCID50。所述赋形剂为无水乳糖，在所述包芯片片剂中质量百分比为15－20％；所述崩解剂包括微晶纤维素和甲基丙烯酸二乙烯基苯聚合物，在所述包芯片片剂中质量百分比分别为15-25％、2-4％；所述助流剂为硬脂酸镁，在所述包芯片片剂中质量百分比为0.3-0.6％；其余为所述冻干制品。本专利技术的另一方面，提供了上述任一疫苗制品的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)将权本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株55型腺病毒，毒株编号DW55‑C20，保藏号为CGMCC No.13790。

【技术特征摘要】
1.一株55型腺病毒，毒株编号DW55-C20，保藏号为CGMCCNo.13790。2.一种腺病毒疫苗原液,是权利要求1所述的55型腺病毒接种到细胞工厂中产生的收获液经过滤去除细胞碎片和杂菌之后收集的病毒液，其滴度值可到7.8±0.5LgCCID50/ml。3.一种腺病毒疫苗制品，其特征在于：由免疫活性成分和药学上可接受的辅料组成，所述免疫活性成分是权利要求1所述55型腺病毒接种到细胞工厂中产生的收获液，经过滤去除细胞碎片和杂菌之后的纯化产物。4.根据权利要求3所述的疫苗制品，其特征在于，为口服包芯片，所述药学上可接受的辅料指作为冻干保护成分的脱脂牛奶和乳糖；作为包衣成分的微晶纤维素和乳糖；每片包芯片中所述55型腺病毒DW55-C20病毒不低于4.5LgCCID50/ml。5.一种腺病毒疫苗半成品，其特征在于：是在权利要求1所述55型腺病毒接种到细胞工厂中产生的收获液，经过滤去除细胞碎片和杂菌之后的病毒液中加入终浓度为w/w4-10％的蔗糖和w/w1-5％的人血白蛋白，经混匀、冻干制得的冻干制品。6.一种腺病毒疫苗制品，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：高正伦，张海雯，刘巍，刘荷中，
申请(专利权)人：北京晨寰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11