本发明专利技术涉及一株噬菌体，具体是涉及一株副溶血弧菌噬菌体及其在增强水产动物免疫力方面的应用，属于水产养殖领域。将所述的噬菌体投置于幼年大菱鲆的养殖水体中，采用浸泡免疫的方法，为期一周。可增强幼年大菱鲆血清中免疫相关酶的活性及快速激活先天性免疫代谢通路中免疫基因的表达，增强幼年大菱鲆的先天性免疫能力，其生产成本低和生产方法相对简便，适用于工业规模化生产。
A Vibrio parahaemolyticus Phage and its application in enhancing immunity of aquatic animals
The invention relates to a bacteriophage, in particular to a Vibrio parahaemolyticus bacteriophage and its application in enhancing immunity of aquatic animals, belonging to the field of aquaculture. The bacteriophage was immersed in the cultured water of juvenile turbot for one week. It can enhance the activity of immune-related enzymes in the serum of juvenile turbot, activate the expression of immune genes in innate immune metabolic pathway and enhance the innate immunity of juvenile turbot. Its production cost is low and the production method is relatively simple. It is suitable for industrial scale production.
【技术实现步骤摘要】
一株副溶血弧菌噬菌体及其在增强水产动物免疫力方面的应用
本专利技术涉及一株噬菌体，具体是涉及一株副溶血弧菌噬菌体及其在增强水产动物免疫力方面的应用，属于水产养殖领域。
技术介绍
副溶血弧菌(VibrioParahaemolyticus)是革兰氏阴性的棒状、弧状、卵圆状无芽孢菌，属于弧菌属(Vibrio)，是一种常见嗜盐性的革兰氏阴性菌，主要的栖息地是海水。其广泛存在于海水和海产品中,分布极广，在海水中可存活47天。其是我国沿海地区海水鱼及贝类常见的致病菌，通常引起胃肠感染，也可以引起肠道外感染，会导致海水鱼类患有出血症。近几年来，副溶血弧菌被认为是南美白对虾早期死亡综合症的主要病原体，和多数肝胰脏肿大，边缘不清晰、肝胰脏萎缩、肝颜色异常都有关系。副溶血弧菌被公认为是水产养殖领域中重要的细菌致死病原菌之一。近年来我国水产养殖发展迅速，但病害也逐年严重。据不完全统计，目前水产养殖病害多达300余种，每年发生病害的养殖面积约占总养殖面积的1/10，年损失量占养殖总量的15％～30％，年经济损失达数百亿元，严重威胁水产养殖业的可持续发展。由于水产养殖具有细菌感染风险高的特点，出于预防和治疗目的，在养殖过程中使用抗生素成为水产行业的普遍做法。抗生素在过去多年中被广泛使用，导致细菌耐药性基因加速扩散，耐药型细菌种类不断增加。此外，抗生素滥用还导致了水产品药物残留、破坏水体环境、危害有益微生物等一些列严重的后果。副溶血弧菌为条件致病菌，当水产动物自身免疫力下降时，易感染副溶血弧菌发生疾病。在水产养殖过程中长期使用抗生素及消毒剂会降低了水产动物的机体免疫力，无形中增加了水产动物患病的风险和几率。噬菌体是一种(phage，bacteriophage)是寄生于细菌、霉形体、螺旋体、放线菌以及蓝细菌等中的一类病毒，亦称细菌病毒。仅感染并且破坏宿主细菌，并且是可以仅在宿主细菌内自我复制的特定病毒类型。与抗生素相比具有强宿主特异性，目前已有较多研究指出噬菌体在水产养殖中能够有效控制致病菌的增值，起到降低养殖水体和水产动物体内致病菌数量的作用，报道有噬菌体对铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)、沙门菌(Salmonella)、副溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus)等细菌均有较好的抑制效果。但是在噬菌体对水产动物免疫力方面的报道有所欠缺，提高鱼类免疫力非常重要，目前常用的是在饲料中添加部分糖类物质或者几种灭活疫苗等措施，但是，饲料添加剂使用不当，造成水体内饲料过剩会污染养殖水体；部分灭活疫苗的研制，耗时长，造价高。针对这一系列存在问题，本专利技术提供一株水产养殖过程中能够起到增强水产动物免疫力作用的副溶血弧菌噬菌体。
技术实现思路
本专利技术提供一种可以用于水产养殖中，起到增强水产动物免疫力作用的副溶血弧菌噬菌体，为目前水产养殖疾病防控提供一种安全、无毒副作用的产品来源。本专利技术的目的在于提供了副溶血弧菌噬菌体Vibrioparahaemolyticusbacteriophageqdvp001的应用，该噬菌体在水产养殖过程中可提高水产动物的免疫力。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：一株副溶血弧菌噬菌体，保藏编号：CCTCCNO：M2011143，保藏日期为2011年4月26日，该噬菌体对幼年大菱鲆的免疫力具有增强作用。所述的噬菌体的裂解液。裂解液可由发酵生产得到。一种所述副溶血弧菌噬菌体或其裂解液在水产养殖过程中增强水产动物免疫力方面的应用，该噬菌体qdvp001保存于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉、武汉大学，保藏编号：CCTCCNO：M2011143，保藏日期为2011年4月26日，分类学命名：副溶血弧菌噬菌体qdvp001(Vibrioparahaemolyticusbacteriophageqdvp001)。所述的水产动物包括但不限于鱼、虾、鳖、蛙等水产养殖动物。作为优选，将噬菌体或其裂解液投入在养殖水体中，使养殖水体中的噬菌体数量最低达到107cfu/mL。作为优选，所述的水产动物为幼年大菱鲆。将所述的噬菌体投置于幼年大菱鲆的养殖水体中，采用浸泡免疫的方法，为期一周。可增强幼年大菱鲆血清中免疫相关酶的活性及快速激活先天性免疫代谢通路中免疫基因的表达，增强幼年大菱鲆的先天性免疫能力，其生产成本低和生产方法相对简便，适用于工业规模化生产。作为优选，所述噬菌体在幼年大菱鲆养殖水体中的投喂剂量≥109cfu/L，时间≥一天。一种含有所述的噬菌体或所述的裂解液的制剂，该制剂用于增强水产动物免疫力。一种含有所述的噬菌体或所述的裂解液的饲料添加剂。以上所述的应用，当用于幼年大菱鲆时，投喂剂量和方式为：109cfu/L水体，投置于养殖水体中，时间≥一天。以上所述的应用，用于增强水产动物的免疫力，防控养殖过程中可能发生的副溶血弧菌引发的细菌性疾病，同时通过提高水产动物机体免疫力来预防各种可能发生的其它疾病。本专利技术对噬菌体qdvp001裂解液中的组成物进行分析，考虑其中的内毒素可能对水产动物免疫力产生影响。检测添加噬菌体裂解液中的内毒素含量，并在实验中采取设置内毒素对照组来合理解释结果。本专利技术的研究对象选择的是体长约为15cm，体重约为50g的大菱鲆幼鱼。相较于成鱼，幼鱼阶段更易遭受细菌性疾病的威胁，在水产养殖过程中，预防各类疾病的主要阶段是幼鱼阶段。本专利技术通过饲养幼年大菱鲆作为动物实验，于不同的处理时间采集血清用于免疫相关酶：碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、超氧化物歧化酶(SOD)、髓过氧化物酶(MPO)、溶菌酶的酶活检测，采集脾脏组织用于总RNA的提取，利用高通量手段进行转录组学分析，通过分析其免疫相关基因的表达量和免疫代谢通路证明副溶血弧菌噬菌体dqvp001裂解液的加入对幼年大菱鲆的免疫力产生积极的影响。与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：1)获得一种增强鱼类免疫系统功能的新型免疫增强剂，并为研发渔用抗菌剂及免疫增强剂提供候选材料。2)使用噬菌体作为免疫增强剂的方式是直接放入养殖水体中，采用浸泡的手段，操作便捷，避免了鱼体损伤及捕捞过程对鱼产生的胁迫压力。浸泡后噬菌体的大菱鲆，其免疫相关酶的活性呈现显著性增高，其先天性免疫基因表达水平与免疫之前相比有显著差异。3)使用后无药残，降低耐药性菌株产生的概率。基于上述优点，这类免疫增强剂在水产养殖中将会有广阔应用前景；其生产成本低和生产方法相对简便，适用于工业规模化生产。综上，本专利技术副溶血弧菌噬菌体qdvp001及其裂解液能够起到提高鱼体免疫力的作用，有利于促进水产动物健康成长，且制备方法较为简便，易于工业化生产。附图说明图1是内毒素含量检测标准曲线；图2是经内毒素和噬菌体qdvp001裂解液处理后不同时间点幼年大菱鲆血清AKP含量图；图3是经内毒素和噬菌体qdvp001裂解液处理后不同时间点幼年大菱鲆血清ACP含量图；图4是经内毒素和噬菌体qdvp001裂解液处理后不同时间点幼年大菱鲆血清SOD含量图；图5是经内毒素和噬菌体qdvp001裂解液处理后不同时间点幼年大菱鲆血清MPO含量图；图6是经内毒素和噬菌体qdvp001裂解液处理后不同时间点幼年大菱鲆血清中溶菌酶含量图；图2-图6中，不同的小字母表示差异显著(P<0.本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一株副溶血弧菌噬菌体，其特征在于：保藏编号 ：CCTCC NO ：M2011143，保藏日期为 2011 年4 月 26 日，该噬菌体对幼年大菱鲆的免疫力具有增强作用。
【技术特征摘要】
1.一株副溶血弧菌噬菌体，其特征在于：保藏编号：CCTCCNO：M2011143，保藏日期为2011年4月26日，该噬菌体对幼年大菱鲆的免疫力具有增强作用。2.权利要求1所述的噬菌体的裂解液。3.权利要求1所述的噬菌体或权利要求2所述的裂解液在水产养殖过程中增强水产动物免疫力方面的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：将噬菌体或其裂解液投入在养殖水体中，使养殖水体中的噬菌体...
【专利技术属性】
技术研发人员：王静雪，林洪，王腾，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：山东,37
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