以肿瘤细胞PLK1为药靶的抗癌重组腺病毒的构建及用途制造技术

本发明专利技术公开了一种人工改造人类５型腺病毒（ＡＤＶ５）的构建方案，以及用该方案获取的重组腺病毒构建体在肿瘤治疗的具体用途。用ＰＣＲ扩增定点缺失、同源重组、转染、腺病毒单克隆纯化等技术，获得一种重组腺病毒构建体，其特征在于：ＡＤＶ５基因组Ｅ１Ａ保守序列２（ＣＲ２）编码序列２４个碱基缺失；ＡＤＶ５　　Ｅ３区２８５３２－２９３６０ｎｔ缺失；并在该区域反向插入部分ＰＬＫ１　　ｃＤＮＡ片段。该重组腺病毒构建体能选择性地在肿瘤细胞内复制增殖；插入的反义ＰＬＫ１ｃＤＮＡ片段在肿瘤细胞内特异性表达；对肿瘤细胞具有强效旁观者效应。从而特异性杀灭肿瘤细胞，同时对正常细胞无杀灭效应。该构建体在肿瘤治疗药物、诊断试剂的制备中具有独特的实用价值，同时也为肿瘤基因治疗提供了理想的基因靶点特异性治疗应用途径。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种人类5型腺病毒(Human adenovirus type 5，ADV5)重组体的构建方案，其技术特征在于定向缺失ADV5基因组的923-946nt序列(CTTACC TGC CAC GAG GCT GGC TTT，该序列编码E1A蛋白122至129位氨基酸)，在此基础上，进一步缺失ADV5 E3区28532-29360nt，在该缺失区域引入一个ClaI酶切位点；在ClaI酶切位点中反向插入820bp的外源性PLK1 cDNA片段(相当于PLK1 mRNA的960-161nt)，从而获取对肿瘤具有治疗作用的重组腺病毒构建体Δ923-946ADV5/ASPLK1。
技术实现思路
属于医学基因工程

技术介绍
恶性肿瘤正在成为危害人类健康的首要疾病。据国内最新流行病学调查资料显示我国现有癌症病人300多万人，每年死于恶性肿瘤的患者约为130万人，每年有160万到200万新发的恶性肿瘤病例，并以3％的速度递增，给我国人民的生活和健康造成巨大威胁，一定程度上制约了我国经济的可持续发展。目前，多数常见肿瘤的治疗仍面临着严峻的挑战，常规的肿瘤治疗手段无法从根本上清除恶性本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重组腺病毒构建体，其命名及技术特征在于：该构建体命名为Δ９２３－９４６ＡＤＶ５／ＡＳＰＬＫ１，它缺失了ＡＤＶ５９２３－９４６ｎｔ序列ＣＴＴ　　ＡＣＣ　　ＴＧＣ　　ＣＡＣ　　ＧＡＧ　　ＧＣＴ　　ＧＧＣ　　ＴＴＴ，该序列编码Ｅ１Ａ蛋白１２２至１２９位氨基酸，同时，它缺失了ＡＤＶ５　　Ｅ３区２８５３２－２９３６０ｎｔ，在该缺失区域引入一个ＣｌａＩ酶切位点，并在ＣｌａＩ酶切位点中反向插入相当于ＰＬＫ１　　ｍＲＮＡ的９６０－１６１ｎｔ的ｃＤＮＡ片段，其他基因组结构与野生型ＡＤＶ５完全相同。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：周剑峰，马丁，卢运萍，王世宣，陈刚，高庆蕾，
申请(专利权)人：深圳市奥尼克斯基因技术有限公司，
类型：发明
国别省市：94[中国|深圳]