一种表达环氧化物水解酶的工程菌及其构建方法和应用技术

本发明专利技术属于基因工程技术领域的一种表达环氧化物水解酶的工程菌及其构建方法和应用。所述表达环氧化物水解酶的工程菌，其是将环氧化物水解酶基因转入红球菌而得到的。本发明专利技术中所构建的工程菌，采用重组红球菌作为宿主菌，相比于重组大肠杆菌，其表达的环氧化物水解酶的酶活、热稳定性、pH稳定性、底物耐受性/产物耐受性都有明显的优势。利用本发明专利技术中的工程菌用于催化生产光学纯(R)‑ECH，相比于采用相同游离酶进行的催化，(R)‑ECH的浓度提高了46％，收率提高了31％。相对于游离酶或者重组大肠杆菌，重组红球菌的综合性能优势明显，具有良好的工业应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种表达环氧化物水解酶的工程菌及其构建方法和应用
本专利技术属于基因工程
，具体涉及一种表达环氧化物水解酶的工程菌及其构建方法和应用。
技术介绍
环氧化物水解酶(Epoxidehydrolases)是一类重要的工业酶，可选择性催化水解外消旋环氧化物而得到手性环氧化物和相应的邻位二醇，在医药、农药和香料等方面有广阔的应用前景。环氧化物水解酶广泛存在于细菌、真菌、动物、植物中，其催化过程不需要金属离子或者辅酶参与，具有底物谱宽、催化效率高、对映体选择性高等优点。手性环氧氯丙烷(ECH)是一种重要的手性合成砌块，在医药、农药、精细化工等领域有广泛的应用，比如，(R)-ECH是合成治疗心绞痛类药物(如美托洛尔、阿普洛尔)的关键手性中间体，(S)-ECH是他汀类药物的起始原料之一。目前已有很多研究者利用环氧化物水解酶拆分制备手性环氧氯丙烷。Choi等利用黑曲霉(Aspergillusniger)在环己烷-水(体积比为98:2)的两相体系中拆分(S)-ECH，底物浓度60mM，ee值大于99％，收率20％(Choi,etal.,1999,JBiosciBioeng,88:339-341)。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种表达环氧化物水解酶的工程菌，其是将环氧化物水解酶基因转入红球菌而得到的。

【技术特征摘要】
1.一种表达环氧化物水解酶的工程菌，其是将环氧化物水解酶基因转入红球菌而得到的。2.根据权利要求1所述的工程菌，其特征在于，所述环氧化物水解酶基因来源于放射农杆菌。3.根据权利要求2所述的工程菌，其特征在于，所述环氧化物水解酶基因的核苷酸序列如序列表SEQIDNO.1所示。4.根据权利要求1-3任一项所述的工程菌，其特征在于，所述红球菌为赤红球菌，优选的，所述赤红球菌为敲除酰胺酶基因和腈水合酶基因的赤红球菌。5.根据权利要求1-4任一项所述的工程菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：优化环氧化物水解酶基因并合成，将环氧化物水解酶基因接入质粒构建环氧化物水解酶的表达载体；将环氧化物水解酶的表达载体转化到赤红球...

【专利技术属性】
技术研发人员：于慧敏，梁有向，焦松，王苗苗，
申请(专利权)人：清华大学，
类型：发明
国别省市：北京,11