一种细菌纤维素高产菌株的构建方法技术

本发明专利技术公开了一种细菌纤维素高产菌株的构建方法。即通过同源重组的方法敲除木葡萄糖醋酸杆菌中的葡萄糖脱氢酶基因，并通过外源引入FLP蛋白表达途径消除抗性标记基因。本发明专利技术还公开了利用所述方法构建的细菌纤维素高产菌株和利用该菌株生产细菌纤维素的方法。利用本发明专利技术的菌株可显著地提高细菌纤维素的产量。

【技术实现步骤摘要】
一种细菌纤维素高产菌株的构建方法
本专利技术涉及基因工程和发酵工程领域。确切的说，本专利技术涉及细菌纤维素的高产菌株及其制备方法。
技术介绍
近年来，细菌纤维素由于其高纯度，以及优良的性质如高亲水性、高生物相容性以及良好的机械性能被广泛应用于各个行业，如生物医药行业中的伤口辅料，造纸行业中纸张的改性，以及食品行业。木葡萄糖醋酸杆菌合成细菌纤维素有直接和非直接两种合成途径，其中非直接合成途径通过磷酸戊糖途径和糖异生途径合成细菌纤维素，在直接合成途径中己糖磷酸盐通过异构化和磷酸化，直接合成细菌纤维素。其中的4个主要酶促反应步骤：(1)葡萄糖在葡萄糖激酶的作用下合成6-磷酸葡萄糖；(2)6-磷酸葡萄糖在变位酶的作用下转变成1-磷酸葡萄糖；(3)1-磷酸葡萄糖在UDPG焦磷酸化酶的作用下转化为尿苷二磷酸葡萄糖(UDPG)；(4)UDPG在纤维素合成酶的作用下转化为β-1，4-葡萄糖苷链，再装配成细菌纤维素。在木葡萄糖醋酸杆菌的代谢初期，约有95％葡萄糖将通过葡萄糖脱氢酶转化成葡萄糖酸。因此通过基因工程的手段将葡萄糖生成葡萄糖酸的代谢途径切除将有效地提高木葡萄糖醋酸杆菌的菌体量和细菌纤维素产量本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种细菌纤维素高产菌株的构建方法，其特征在于，所述方法为：(1)葡萄糖脱氢酶编码基因的敲除：利用同源重组的方法对木葡萄糖醋酸杆菌目的基因进行基因敲除。(2)敲除子的筛选：通过氨苄平板对敲除子进行筛选。(3)氨苄抗性的消除：外源导入FLP合成系统对抗性标记进行消除。(4)发酵培养：重组菌株发酵培养及产量的测定。

【技术特征摘要】
1.一种细菌纤维素高产菌株的构建方法，其特征在于，所述方法为：(1)葡萄糖脱氢酶编码基因的敲除：利用同源重组的方法对木葡萄糖醋酸杆菌目的基因进行基因敲除。(2)敲除子的筛选：通过氨苄平板对敲除子进行筛选。(3)氨苄抗性的消除：外源导入FLP合成系统对抗性标记进行消除。(4)发酵培养：重组菌株发酵培养及产量的测定。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，消除或减弱葡萄糖酸合成能力是指葡萄糖酸合成过程中所涉及到的葡萄糖脱氢酶的活性部分或完全缺失。3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述方法还包括增强细菌纤维素生产菌株中细菌纤维素合成途径以及异源表达生产细菌纤维素...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟成，尤勇，贾士儒，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：天津,12