A method for producing, capturing, and purifying recombinant human lysosomal proteins is described. Such recombinant human lysosomal proteins can contain high levels of mannose Pharmaceutical compositions including such recombinant human lysosomal proteins, and therapeutic methods and uses of such recombinant human lysosomal proteins are also described.
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于选择高M6P重组蛋白的方法
本专利技术的原理和实施例总体上涉及制造重组蛋白，特别是具有高含量的甘露糖-6-磷酸的溶酶体酶。
技术介绍
溶酶体贮积失调是一组常染色体隐性遗传疾病，其特征在于细胞的糖鞘脂、糖原、或黏多糖在细胞内的区室(称为溶酶体)内的积累。患有这些疾病的个体携带编码在催化一种或多种这些物质的水解方面有缺陷的酶的突变基因，这些物质随后在溶酶体中积累。例如，庞贝氏病，又称为酸性麦芽糖酶缺乏症或糖原贮积症II型，是若干种溶酶体贮积失调之一。溶酶体失调的其他实例包括戈谢病、GM1-神经节苷脂贮积症、岩藻糖苷贮积症、粘多糖贮积症、胡尔勒-施埃尔病(Hurler-Scheiedisease)、尼曼-皮克A和B病(Niemann-PickA和B)，以及法布里氏病(Fabrydisease)。庞贝氏病还被分类为神经肌肉疾病或代谢性肌病。庞贝氏病的发病率被估计为在40,000人中约1例，并且是由GAA基因的突变引起的，该GAA基因编码酶溶酶体α-葡糖苷酶(EC:3.2.1.20)，该酶也常被称为酸性α-葡糖苷酶。酸性α-葡糖苷酶通过在溶酶体内将糖原催化水解为葡萄糖来...
【技术保护点】
1.一种用于生产重组人溶酶体蛋白的方法，该方法包括：在一种生物反应器中培养宿主细胞，这些宿主细胞分泌重组人溶酶体蛋白；从该生物反应器去除介质；将该介质过滤以提供滤液；将该滤液加载到阴离子交换色谱(AEX)柱上，以捕获该溶酶体蛋白；并且从该AEX柱上洗脱第一蛋白产物。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.03.30 US 62/315,400;2017.02.10 US 62/457,5841.一种用于生产重组人溶酶体蛋白的方法，该方法包括：在一种生物反应器中培养宿主细胞，这些宿主细胞分泌重组人溶酶体蛋白；从该生物反应器去除介质；将该介质过滤以提供滤液；将该滤液加载到阴离子交换色谱(AEX)柱上，以捕获该溶酶体蛋白；并且从该AEX柱上洗脱第一蛋白产物。2.如权利要求1所述的方法，其中该重组人溶酶体蛋白是重组人α-葡糖苷酶(rhGAA)。3.如权利要求2所述的方法，其中该rhGAA包括与SEQIDNO:2具有至少95％一致性的氨基酸序列。4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，该方法进一步包括：将该第一蛋白产物加载到固定的金属亲和色谱(IMAC)柱上；并且从该IMAC柱上洗脱第二蛋白产物。5.如权利要求4所述的方法，该方法进一步包括：将该第二蛋白产物加载到第三色谱柱上；并且从该第三色谱柱上洗脱第三蛋白产物。6.如权利要求5所述的方法，其中该第三色谱柱选自阳离子交换色谱(CEX)柱和尺寸排阻色谱(SEC)柱。7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中对该介质的过滤选自交替切向流过滤(ATF)和切向流过滤(TFF)。8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，该方法进一步包括使该第一蛋白产物、该第二蛋白产物、和该第三蛋白产物的一种或多种中的病毒失活。9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，该方法进一步包括将该第二蛋白产物或该第三蛋白产物过滤，以提供一种经过滤的产物，并且用该经过滤的产物填充小瓶。10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，该方法进一步包括将该经过滤的产物冻干。11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中这些宿主细胞包括中国仓鼠卵巢(C...
【专利技术属性】
技术研发人员：晃·V·杜，拉塞尔·戈乔尔，
申请(专利权)人：阿米库斯治疗学公司，
类型：发明
国别省市：美国,US
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