一种筛选促干细胞归巢药物的方法、重组载体和细胞株技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体为一种重组载体以及含有这种重组载体的稳转细胞株，可用于筛选促干细胞归巢药物。这种重组载体含有CXCR4启动子序列和luc2荧光素酶报告基因；且luc2荧光素酶报告基因位于CXCR4启动子序列下游。含有上述的重组载体以及内参荧光酶载体的稳转细胞株可以用于检测CXCR4基因的表达活性水平，进而用于高通量筛选促进干细胞归巢的药物。因此，上述稳转细胞株，加入候选药物进行刺激，通过luc2相对荧光强度，可评价该候选药物促进CXCR4启动子表达的活性，从而筛选干细胞归巢的药物或者筛选治疗或辅助治疗心肌梗死的药物，有广阔的应用前景。

A Method for Screening Homing Drugs for Stem Cells, Recombinant Vectors and Cell Lines

The invention relates to the field of biotechnology, in particular to a recombinant vector and a stable cell line containing the recombinant vector, which can be used for screening stem cell homing promoting drugs. The recombinant vector contains CXCR4 promoter sequence and luc2 luciferase reporter gene, and luc2 luciferase reporter gene is located downstream of CXCR4 promoter sequence. The stable cell lines containing the above recombinant vectors and internal reference fluorescent enzyme vectors can be used to detect the expression level of CXCR4 gene, and then be used for high throughput screening of drugs promoting stem cell homing. Therefore, the above-mentioned stable cell lines can be stimulated by the addition of candidate drugs, and the relative fluorescence intensity of luc2 can be used to evaluate the activity of the candidate drugs in promoting the expression of CXCR4 promoter, so as to screen drugs for stem cell homing or drugs for treatment or adjuvant treatment of myocardial infarction, which has broad application prospects.

【技术实现步骤摘要】
一种筛选促干细胞归巢药物的方法、重组载体和细胞株
本专利技术属于生物
，具体涉及能稳定表达CXCR4启动子基因的双荧光素酶报告细胞株的构建方法及其应用，更具体地说，本专利技术提供一种能用于筛选促干细胞归巢药物的稳转细胞株的构建方法，并用其筛选可能的药物单体，为高通量筛选促干细胞归巢药物提供了生物材料。
技术介绍
心肌梗死(myocardialinfarction,MI)导致的进行性心力衰竭依然是现代心脏病的巨大挑战。通过移植自体或异体间充质干细胞(mesenchymalstemcell,MSCs)能增强心脏功能，缩小梗死面积，延缓心衰进程，在MI的治疗中具有广阔的应用前景。然而，移植后MSCs较低的心脏留存率严重限制了其治疗效果。研究显示，静脉注射后仅有2％的干细胞归巢至心脏，冠脉注射为15％,而直接注射到心肌内也仅有11％的留存率，大部分细胞分散在肺，肝和脾。因此促进移植后更多的干细胞向心肌梗死区归巢是增强MSCs治疗MI作用的关键。CXC趋化因子受体4[chemokine(C-X-Cmotif)receptor4,CXCR4]和其配体基质细胞衍生因子-1α(stromalc本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组载体，其特征在于，含有CXCR4启动子序列和luc2荧光素酶报告基因；所述的luc2荧光素酶报告基因位于CXCR4启动子序列下游。

【技术特征摘要】
1.一种重组载体，其特征在于，含有CXCR4启动子序列和luc2荧光素酶报告基因；所述的luc2荧光素酶报告基因位于CXCR4启动子序列下游。2.权利要求2所述的重组载体，其特征在于，为含有CXCR4启动子序列和luc2荧光素酶报告基因的pGL4.17载体。3.一种稳转细胞株，其特征在于，含有权利要求1或2所述的重组载体以及表达内参荧光酶的载体。4.权利要求3所述的稳转细胞株，其特征在于，所述的内参荧光酶为海肾荧光素酶。5.权利要求3所述的稳转细胞株，其特征在于，其宿主细胞为人胚肾上皮细胞293。6.权利要求1或2所述的一种重组载体在检测CXCR4启动子表达的活性、CXCR4启动子表达的活性、筛选促干细胞归巢的药物或者筛选治疗或辅助治疗心肌梗死的药物方面的应用。7.权利要求3～5任一项所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：王莹，赵亮，徐冉驰，王强利，王亚辉，李英，国海东，蔡昊，付云飞，吴心语，
申请(专利权)人：上海中医药大学，
类型：发明
国别省市：上海,31