一种制备靶向间皮素的CAR-T细胞的方法技术

本发明专利技术提供了一种制备靶向间皮素的CAR‑T细胞的方法，括以下步骤：1)将含有靶向间皮素抗原的CAR编码序列的核酸导入PBMC，获得初始细胞；2)用间皮素抗原和抗CD28抗体接触1)中所述初始细胞、培养，其中所述间皮素抗原与所述抗CD28抗体的状态是非固定化的。本发明专利技术的方法，无需先包被固定的或悬浮的基质，极大地简化了操作流程，降低了成本；且获得的靶向间皮素的CAR‑T细胞在阳性率、增殖水平和效应记忆T细胞的比例都有明显升高，同时具有与间皮素抗原和CD28抗体包被法制得的CAR‑T细胞相同水平的肿瘤细胞杀伤力，但细胞因子水平明显下降，降低了细胞因子释放综合征(CRS)发生的潜在风险。

【技术实现步骤摘要】
一种制备靶向间皮素的CAR-T细胞的方法
本专利技术涉及医学免疫学领域，具体地涉及一种制备靶向间皮素的CAR-T细胞的方法。
技术介绍
以嵌合抗原受体(CAR)T细胞治疗技术为代表的过继性免疫细胞治疗技术已成为目前肿瘤治疗新技术开发的热点领域，基于T淋巴细胞的过继性免疫治疗在部分肿瘤中取得了一定的效果。在2017年诺华的Kymriah和凯特制药的Yescarta在美国被批准上市，但其定价分别高达47.5万美元和37.3万美元。高昂的价格主要原因在于目前的这两款CAR-T细胞药物都采用的是自体治疗方案，每次针对新的患者都需要从患者体内抽血分离PBMC细胞后重新制备，复杂的操作过程导致成本极高且难以控制。目前成熟的产品CAR-T细胞的制备方法通常包括从患者体内采血、分离T细胞、激活T细胞、CAR基因修饰T细胞获得CAR-T细胞、扩增CAR-T细胞，随后将扩增获得的CAR-T细胞配成制剂后对患者进行回输(ClinicalmanufacturingofCARTcells:foundationofapromisingtherapy.WangX,RivièreIMolTherOncolytics本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种制备靶向间皮素的CAR‑T细胞的方法，其特征在于，其包括以下步骤：1)将含有靶向间皮素抗原的嵌合抗原受体编码序列的核酸导入外周血单个核细胞(PBMC)，获得初始细胞；2)用间皮素抗原和抗CD28抗体接触1)中所述初始细胞、培养，其中所述间皮素抗原与所述抗CD28抗体的状态是非固定化的。

【技术特征摘要】
1.一种制备靶向间皮素的CAR-T细胞的方法，其特征在于，其包括以下步骤：1)将含有靶向间皮素抗原的嵌合抗原受体编码序列的核酸导入外周血单个核细胞(PBMC)，获得初始细胞；2)用间皮素抗原和抗CD28抗体接触1)中所述初始细胞、培养，其中所述间皮素抗原与所述抗CD28抗体的状态是非固定化的。2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述间皮素抗原为全长间皮素抗原或间皮素结构域III抗原，优选地，为间皮素结构域III抗原；所述间皮素结构域III抗原优选地包含IgGFc，所述IgGFc优选地为IgG4Fc；所述间皮素结构域III抗原优选地通过铰链与所述IgGFc融合，所述铰链优选地为CD8铰链。3.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述间皮素抗原还在N端包含信号肽，所述信号肽优选地为轻链信号肽；更优选地，所述间皮素抗原为间皮素结构域III抗原，在N端与轻链信号肽融合，在C端通过CD8铰链与IgG4Fc融合，氨基酸序列为SEQIDNO:2所示。4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述核酸为核酸构建体或mRNA，优选地为核酸构建体。5.根据权利要求4所述方法，其特征在于，所述核酸构建体为表达载体，任选地为病毒载体或转座子系统载体；所述病毒载体优选地为衍生自I型HIV的慢病毒载体，如pWPT或pWPXL；所述转座子系统优选地为改造的或未改造的SleepingBeauty转座子系统载体或PiggyBac转座子系统载体，更优选地为改造的或未改造的PiggyBac转座子系统载体，最优选地为改造的PiggyBac转座子系统载体，如CN105154473A中公开的pNB328转座子系统载体。6.根据权利要求4所述方法，其特征在于，所述核酸为mRNA，其含有5’端帽子结构、5...

【专利技术属性】
技术研发人员：金华君，何江川，江芏青，刘祥箴，黄晨，钱其军，
申请(专利权)人：上海细胞治疗工程技术研究中心集团有限公司，上海细胞治疗研究院，
类型：发明
国别省市：上海,31