一种重组载体CAR-CD244-antiPSMA的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种重组载体CAR‑CD244‑antiPSMA的制备方法，包括以下步骤：步骤1、将特异性抗体编码基因使用末端带有BfuAI限制性内切酶识别位点的引物进行PCR扩增；所述特异性抗体编码基因序列为PSMA抗体的部分序列，为序列表序列3；步骤2、将步骤1的PCR产物分别进行纯化；步骤3、将步骤2纯化的PCR产物在BfuAI限制性内切酶识别位点进行单酶切，并同时将含有改造的CD244骨架的克隆载体在BfuAI限制性内切酶识别位点进行单酶切；步骤4、将酶切后产物进行纯化；步骤5、将纯化后的产物按抗体片段与含有改造的CD244骨架的克隆载体摩尔比为3:1配比后，使用T4连接酶进行连接、转化、涂板、挑取单克隆提取质粒测序；将连接正确的质粒，命名为：重组载体CAR‑CD244‑antiPSMA。

【技术实现步骤摘要】
一种重组载体CAR-CD244-antiPSMA的制备方法本申请是分案申请，原申请的申请号为201710209997.5，申请日为2017年3月31日，专利技术名称为“一种CAR-NK细胞及其制备方法与应用”。
本专利技术涉及生物
，具体说是一种重组载体CAR-CD244-antiPSMA的制备方法。
技术介绍
细胞生物治疗是运用自身免疫系统的新型癌症治疗方法，是一种具有显著疗效的治疗模式。它运用分子生物学技术和细胞工程学技术，用生物制剂对从病人体内采集的免疫细胞在体外进行培养和扩增，再回输到病人体内，从而激发、增强机体自身的免疫功能，达到监视并杀灭病变细胞或修复受损细胞的目的。自然杀伤细胞(naturalkillercell，NK)属于粒状淋巴细胞，是机体重要的免疫细胞。二般认为NK细胞来源于骨髓淋巴样干细胞，其分化、发育依赖于骨髓或胸腺微环境，主要分布于外周血和脾脏，在淋巴结和其他组织中也有少量存在。NK细胞不表达特异性抗原识别受体，是不同于T、B淋巴细胞的第三类淋巴细胞。与其他淋巴细胞相比，NK细胞的杀伤活性无MHC限制，无需抗原预先致敏，因此称为自然杀伤活性。NK细胞胞本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组载体CAR‑CD244‑antiPSMA的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、将特异性抗体编码基因使用末端带有BfuAI限制性内切酶识别位点的引物进行PCR扩增；所述特异性抗体编码基因序列为PSMA抗体的部分序列，为序列表序列3；步骤2、将步骤1的PCR产物分别进行纯化；步骤3、将步骤2纯化的PCR产物在BfuAI限制性内切酶识别位点进行单酶切，并同时将含有改造的CD244骨架的克隆载体在BfuAI限制性内切酶识别位点进行单酶切；步骤4、将酶切后产物进行纯化；步骤5、将纯化后的产物按抗体片段与含有改造的CD244骨架的克隆载体摩尔比为3:1配比后，使用T4连接酶进行连接、转...

【技术特征摘要】
1.一种重组载体CAR-CD244-antiPSMA的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、将特异性抗体编码基因使用末端带有BfuAI限制性内切酶识别位点的引物进行PCR扩增；所述特异性抗体编码基因序列为PSMA抗体的部分序列，为序列表序列3；步骤2、将步骤1的PCR产物分别进行纯化；步骤3、将步骤2纯化的PCR产物在BfuAI限制性内切酶识别位点进行单酶切，并同时将含有改造的CD244骨架的克隆载体在BfuAI限制性内切酶识别位点进行单酶切；步骤4、将酶切后产物进行纯化；步骤5、将纯化后的产物按抗体片段与含有改造的CD244骨架的克隆载体摩尔比为3:1配比后，使用T4连接酶进行连接、转化、涂板、挑取单克隆提取质粒测序；将在所述改造的CD...

【专利技术属性】
技术研发人员：顾雨春，尹乐，
申请(专利权)人：北京呈诺医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11