分离基质制造技术

本发明专利技术涉及包含至少11mg/ml与多孔载体共价偶联的Fc‑结合配体的分离基质，其中：a)所述配体包含碱稳定的蛋白A结构域的多聚体，和b)所述多孔载体包含具有56‑70微米的体积加权的中位直径(d50,v)和55‑80mg/ml的干固体重量的交联聚合物颗粒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】分离基质
本专利技术涉及亲和色谱的领域，且更特别地涉及蛋白A的突变的免疫球蛋白-结合结构域，其可用于免疫球蛋白的亲和色谱。本专利技术还涉及所述突变的结构域的多聚体和涉及含有突变的结构域或多聚体的分离基质。专利技术背景免疫球蛋白代表全世界生产或开发的最普遍的生物制药产品。对于这种特定治疗市场的高商业需求以及由此的价值已导致重点放在制药公司上，以使它们各自的mAb生产过程的生产力最大化，同时控制相关的成本。亲和色谱在大多数情况下作为这些免疫球蛋白分子，例如单克隆或多克隆抗体的纯化中的关键步骤之一而使用。一类特别感兴趣的亲和试剂是能够特异性结合免疫球蛋白分子的不变部分的蛋白，这样的相互作用是独立于抗体的抗原-结合特异性的。这样的试剂可广泛用来从不同的样品(例如但不限于血清或血浆制备物或细胞培养物来源的原料)亲和色谱回收免疫球蛋白。这样的蛋白的例子是葡萄球菌蛋白A，其含有能够结合来自不同物种的IgG免疫球蛋白的Fc和Fab部分的结构域。这些结构域通常被称为E-、D-、A-、B-和C-结构域。基于葡萄球菌蛋白A(SpA)的试剂由于它们的高亲和性和选择性，已发现广泛用于生物
，例如用于本文档来自技高网...

【技术保护点】
1. 一种分离基质，其包含至少11、例如至少15、15‑21、17‑21或18‑20 mg/ml与多孔载体共价偶联的Fc‑结合配体，其中：a)所述配体包含碱稳定的蛋白A结构域的多聚体，b)所述多孔载体包含具有56‑70微米的体积加权的中位直径(d50,v)和55‑80 mg/ml的干固体重量的交联聚合物颗粒。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.05.11 GB 1608229.9;2016.05.11 GB 1608232.3;201.一种分离基质，其包含至少11、例如至少15、15-21、17-21或18-20mg/ml与多孔载体共价偶联的Fc-结合配体，其中：a)所述配体包含碱稳定的蛋白A结构域的多聚体，b)所述多孔载体包含具有56-70微米的体积加权的中位直径(d50,v)和55-80mg/ml的干固体重量的交联聚合物颗粒。2.权利要求1的分离基质，其中所述交联聚合物颗粒包含交联多糖颗粒。3.权利要求1或2的分离基质，其中所述交联聚合物颗粒包含交联琼脂糖颗粒。4.任何前述权利要求的分离基质，其中所述交联聚合物颗粒具有对于Mw110kDa的葡聚糖，对应于0.69-0.85的反相凝胶过滤色谱Kd值的孔径。5.任何前述权利要求的分离基质，其中所述多聚体包含碱稳定的蛋白A结构域的四聚体、五聚体、六聚体或七聚体。6.任何前述权利要求的分离基质，其中所述多聚体包含碱稳定的蛋白A结构域的六聚体。7.任何前述权利要求的分离基质，以2.4min停留时间，其对于IgG具有至少45mg/ml、例如至少50或至少55mg/ml的10%穿透动态结合能力。8.任何前述权利要求的分离基质，以6min停留时间，其对于IgG具有至少60mg/ml、例如至少65、至少70或至少75mg/ml的10%穿透动态结合能力。9.任何前述权利要求的分离基质，其中在1.0M水性NaOH中在22+/-2C孵育31h后，以2.4min或6min停留时间对于IgG的10%穿透动态结合能力减少少于20%。10.任何前述权利要求的分离基质，在20mM磷酸盐缓冲液、180mMNaCl、pH7.5中，其对于IgG2具有低于0.2mg/ml、例如低于0.1mg/ml的离解常数。11.任何前述权利要求的分离基质，当以300+/-10mm床高度在FineLineTM35柱中装填时，其具有至少0.58、例如至少0.60MPa的最大压力。12.任何前述权利要求的分离基质，其中所述碱稳定的蛋白A结构域包含葡萄球菌蛋白A(SpA)的亲本Fc-结合结构域的突变体，所述突变体由SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:22、SEQIDNO51或SEQIDNO52定义，其中至少在对应于SEQIDNO:4-7的位置11的位置的天冬酰胺或丝氨酸残基已被突变为选自谷氨酸、赖氨酸、酪氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸、丙氨酸、组氨酸和精氨酸的氨基酸。13.权利要求12的分离基质，其中在对应于SEQIDNO:4-7的位置11的位置的氨基酸残基为谷氨酸或赖氨酸或已被突变为谷氨酸或赖氨酸。14.权利要求12或13的分离基质，其中在对应于SEQIDNO:4-7的位置9的位置的氨基酸残基是丙氨酸。15.权利要求12或13的分离基质，其中在对应于SEQIDNO:4-7的位置9的位置的氨基酸残基已被缺失。16.权利要求12-15中任一项的分离基质，其中在对应于SEQIDNO:4-7的位置40的位置的氨基酸残基为缬氨酸或已被突变为缬氨酸。17.权利要求12-16中任一项的分离基质，其中在对应于SEQIDNO:4-7的位置1、2、3、4、5、6、7、8、56、57或58的位置的一个或多个氨基酸残基已被缺失。18.权利要求1-11中任一项的分离基质，其中所述碱稳定的蛋白A结构域包含具有由SEQIDNO53定义或与SEQIDNO53具有至少80%或至少90、95%或98%同一性的氨基酸序列的Fc-结合多肽，X1QX2AFYEILX3LPNLTEEQRX4X5FIX6X7L...

【专利技术属性】
技术研发人员：GJ罗德里戈，T布约克曼，M安德，JU汉森，
申请(专利权)人：通用电气医疗集团生物工艺研发股份公司，
类型：发明
国别省市：瑞典,SE