用于金黄色葡萄球菌Staphopain B蛋白检测的B细胞抗原表位肽及其试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种用于金黄色葡萄球菌Staphopain B蛋白检测的B细胞抗原表位肽及其试剂盒，所述的B细胞抗原表位肽的核心氨基酸序列为：SVSQNPNDPHLG、ATKNTDTYNA或PWDTELSIQDADS。本发明专利技术的技术方案的B细胞抗原表位肽，用于金黄色葡萄球菌Staphopain B蛋白检测，具有良好的免疫原性，且具有良好的SA特异性，可作为筛选患者血清的诊断试剂，其能用于血流

B cell epitope peptide and its kit for the detection of Staphylococcus aureus Staphopain B protein

The present invention provides a method for B cell epitope peptide and kit for detection of Staphylococcus aureus Staphopain B protein, the B cell epitope peptide core amino acid sequence: SVSQNPNDPHLG, ATKNTDTYNA or PWDTELSIQDADS. The technical scheme of the invention of the B cell epitope peptide for the detection of Staphylococcus aureus Staphopain B protein has good immunogenicity, and has good SA specificity and can be used as diagnostic reagents for screening patients, which can be used to flow

【技术实现步骤摘要】
用于金黄色葡萄球菌StaphopainB蛋白检测的B细胞抗原表位肽及其试剂盒
本专利技术涉及一种抗原表位肽，尤其涉及一种用于金黄色葡萄球菌StaphopainB蛋白检测的B细胞抗原表位肽及其试剂盒。
技术介绍
金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)是临床分离的重要致病菌和定植菌之一，可导致大量的严重的、甚至危及生命的感染性疾病。2008-2015年Mohnarin资料显示，综合医院耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistantstaphylococcusaureus，MRSA)分离株占S.aureus67.6％、ICU中高达84.8％；S.aureus居肺部感染G+球菌第一位，其中MRSA分离率26.3％；医院的败血症血培养阳性结果中S.aureus约占3-5％。而S.aureus泛耐药株的出现，大大增加了S.aureus菌感染治疗的难度，增加患者住院的时间。约5-10％的住院患者会产生院内感染，医院的病人越多，则感染的几率越大。MRSA是导致院内感染的常见病原菌。MRSA对大多数抗生素耐药的特性，给感染的治疗带来了巨大的挑战，特别是对糖肽类抗生素中介耐药的S.aureus的出现。MRSA感染成为了一个全球性的问题。世界各地区均有一些MRSA感染的大型疫情的报告。MRSA已经造成了包括败血症、心内膜炎和脑膜炎等严重的感染。MRSA引起的感染因其抗生素的治疗、隔离设施和材料和住院时间的延长而花费巨大，快速筛查S.aureus携带状况和检测致病菌是预防S.aureus感染及时治疗的关键。S.aureus在自然环境中普遍存在，多定植于人的腹股沟、腋下、鼻腔及会阴部。葡萄球菌感染可导致脓肿(葡萄球菌和白细胞)。S.aureus能够产生蛋白水解酶(如lytm和staphopainB等)，促进了脓肿扩散过程。葡萄球菌感染可导致肺炎、心内膜炎、骨髓炎和关节腔感染等。约25％～35％免疫缺陷患者(如肿瘤、使用免疫抑制剂、AIDS等)会发生严重并发症(甚至败血症)。半胱氨酸蛋白酶StaphopainB是已知的金葡致病蛋白，且在金葡菌中的表达丰富，在体外，StaphopainB将LL-37降解成较短的肽片段，LL-37显着抑制金黄色葡萄球菌的生物膜形成，而降解产物没有观察到这样的作用。StaphopainB是葡萄球菌蛋白酶激活级联中的最终酶，小鼠模型中，staphopainB敲除菌株的毒力减弱。另外，StaphopainB能破坏结缔组织，造成凝血和激肽系统的紊乱，同时能直接与宿主免疫细胞作用，在金黄色葡萄球菌的存活和/或致病性中具重要性。对于金葡感染的检测手段，传统培养检测方法主要有选择性增菌培养和生化鉴定，如免疫胶乳凝胶试验、耐热核酸酶试验、血浆凝固酶试验，其缺点在于耗时长、操作繁琐复杂。此外，血流感染方面，基于培养的方法还有其缺点主要在于血培养的阳性率较低(20％-25％)，且培养过长同样耗时过长。因此，脱离培养，直接或者间接性检测“生物标志物”也是早期诊断开发研究的重要方向。如分子杂交(FISH)、QPCR等分子标志物靶向方法，尽管可以做到直接检测金葡的分子标志物，但成本高，如QPCR，大约100元/样本，且存在污染的可能性较高且操作同样繁琐等缺点限制了其临床广泛应用。
技术实现思路
针对以上技术问题，本专利技术公开了一种用于金黄色葡萄球菌StaphopainB蛋白检测的B细胞抗原表位肽及其试剂盒，结合酶联免疫分析法，可用于血流S.aureus感染的早期诊断。对此，本专利技术采用的技术方案为：一种用于金黄色葡萄球菌StaphopainB蛋白检测的B细胞抗原表位肽，其核心氨基酸序列为：SVSQNPNDPHLG(如SEQIDNo.1所示)、ATKNTDTYNA(如SEQIDNo.2所示)或PWDTELSIQDADS(如SEQIDNo.3所示)。在体外免疫学实验研究中，应用ELISA方法检测的动物学实验、特异性实验和血清学结合实验中发现，含有上述核心氨基酸序列的合成肽具有良好的免疫原性、特异性和结合性。优选的，所述用于金黄色葡萄球菌StaphopainB蛋白检测的B细胞抗原表位肽的核心氨基酸序列为：SVSQNPNDPHLG(如SEQIDNo.1所示)、ATKNTDTYNA(如SEQIDNo.2所示)。进一步的，所述B细胞抗原表位肽的序列的至少一端连接有不超过5个氨基酸的保护肽。进一步的，所述B细胞抗原表位肽的序列的N端连接有两个氨基酸HS。进一步的，所述B细胞抗原表位肽的序列的C端连接有GG。本专利技术还公开了一种用于金黄色葡萄球菌StaphopainB蛋白检测的抗原，其是通过采用如上所述的用于金黄色葡萄球菌StaphopainB蛋白检测的B细胞抗原表位肽与载体蛋白偶联制备而成的。进一步的，所述载体蛋白为KLH。本专利技术还公开了一种用于金黄色葡萄球菌StaphopainB蛋白检测的试剂盒，其含有如上所述的用于金黄色葡萄球菌StaphopainB蛋白检测的B细胞抗原表位肽的包被物。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：本专利技术的技术方案的B细胞抗原表位肽用于金黄色葡萄球菌StaphopainB蛋白检测，具有良好的免疫原性，且具有良好的SA特异性，可作为筛选患者血清的诊断试剂，其能用于血流S.aureus感染的早期诊断，具有很大的临床价值。附图说明图1是本专利技术免疫前后间接ELISA法检测的合成肽P1与小鼠血清反应的OD值变化图。图2是本专利技术免疫前后间接ELISA法检测的合成肽P2与小鼠血清反应的OD值变化图。图3是本专利技术免疫前后间接ELISA法检测的合成肽P3与小鼠血清反应的OD值变化图。图4是本专利技术间接ELISA法检测合成肽P1与小鼠感染血清、多抗腹水及正常血清的反应对比图。图5是本专利技术间接ELISA法检测合成肽P2与小鼠感染血清、多抗腹水及正常血清的反应对比图。图6是本专利技术间接ELISA法检测合成肽P3与小鼠感染血清、多抗腹水及正常血清的反应对比图。图7是本专利技术正常人血清与合成肽P1的ELISA结果。图8是本专利技术恢复期患者血清与合成肽P1的ELISA结果。图9是本专利技术正常人血清与合成肽P2的ELISA结果。图10是本专利技术恢复期患者血清与合成肽P2的ELISA结果。图11是本专利技术正常人血清与合成肽P3的ELISA结果。图12是本专利技术恢复期患者血清与合成肽P3的ELISA结果。具体实施方式下面对本专利技术的较优的具体实施方式作进一步的详细说明。实施例1采用固相合成法按照以下步骤制备合成肽P1，所述合成肽P1的氨基酸序列为：合成肽P1：SVSQNPNDPHLG(如SEQIDNo.1所示)步骤S1：Fmoc-氨基酸与树脂相连取2-氯三苯基氯树脂CTC树脂1.0g(取代度为1.08mmol/g)加入到固相合成反应管中，用N，N'-二环己基碳二亚胺DCM30ml浸泡30min使CTC树脂充分溶胀，活化待用。随后加入1.5mmol的Fmoc-氨基酸-OH、二氯甲烷15ml、N，N-二异丙基乙基胺DIPEA0.42ml，震荡反应3h。反应结束后，将液体滤去，依次用甲醇、二氯甲烷洗涤树脂各3次，抽干待用。步骤S2：氨基酸的逐步连接在步骤S1反应得到的树脂中加入20％哌啶-DMF溶液15ml，震荡反应30min。将本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于金黄色葡萄球菌Staphopain B蛋白检测的B细胞抗原表位肽，其特征在于，其核心氨基酸序列为：SVSQNPNDPHLG、ATKNTDTYNA或PWDTELSIQDADS。

【技术特征摘要】
1.一种用于金黄色葡萄球菌StaphopainB蛋白检测的B细胞抗原表位肽，其特征在于，其核心氨基酸序列为：SVSQNPNDPHLG、ATKNTDTYNA或PWDTELSIQDADS。2.根据权利要求1所述的用于金黄色葡萄球菌StaphopainB蛋白检测的B细胞抗原表位肽，其特征在于：所述B细胞抗原表位肽的序列的至少一端连接有不超过5个氨基酸的保护肽。3.根据权利要求2所述的用于金黄色葡萄球菌StaphopainB蛋白检测的B细胞抗原表位肽，其特征在于：所述B细胞抗原表位肽的序列的N端连接有两个氨基酸HS。4.根据权利要求2所述的用于金黄色葡萄球菌Staphopai...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓启文，胡凯涛，郑金鑫，陈重，涂浩鹏，
申请(专利权)人：深圳市南山区人民医院，
类型：发明
国别省市：广东,44