The present invention relates to ligands for chromatographic analysis with improved corrosion stability, such as ligands based on immunoglobulin binding protein, such as staphylococcal A protein, and methods for preparing and using the ligands.
【技术实现步骤摘要】
腐蚀稳定性色谱分析用配体本申请是申请日为2009年12月23日的第201310478275.1号专利技术名称为“腐蚀稳定性色谱分析用配体”的中国专利申请的分案申请。相关申请本申请要求申请号为No.61/203,664,申请日为2008年12月24日的美国临时专利申请的优先权,其全部内容在此全部并入本申请。
本专利技术涉及具有提高的腐蚀稳定性的色谱分析用配体,例如,基于免疫球蛋白结合蛋白(如,葡萄球菌A蛋白)的配体,以及包含此类配体的色谱分析基质。
技术介绍
在亲和色谱分析中使用的配体通常赋予对靶分子的高选择性,因此导致了对靶分子的高收率以及快速而经济的纯化。基于葡萄球菌A蛋白(SpA)的试剂以及色谱分析基质达到了在捕获和纯化抗体的亲和色谱分析中的广泛应用,并且由于其结合IgG而对免疫球蛋白和抗体的亲和性没有显著影响的能力,其同样广泛应用于抗体检测方法。据此,已经开发了多种包含A蛋白-配体的试剂以及介质,并且在商业上可获得,包括,例如,-vAHighCapacity,vAUltra和UltraPlus(Millipore)及ProteinASepharoseTM,MabSelectTM,MabSelectXtraTM和MabSelect(GEHealthcare)和PorosMabCaptureATM(AppliedBiosystems)。为了维持色谱分析用配体(所述配体包括,如,包含基于SpA的色谱分析用配体的树脂)的选择性和结合能力,需要对配体结合树脂(称作色谱分析基质)进行清洁,并且通常在碱性条件下清洗,如,使用氢氧化钠。举例来说,用于清洗和复原基质的 ...
【技术保护点】
1.一种碱稳定性色谱分析用配体,所述配体包含两个或更多个葡萄球菌A蛋白(SpA)或其功能性片段或变体的B结构域或者两个或更多个SpA或其功能性片段或变体的Z结构域。
【技术特征摘要】
2008.12.24 US 61/203,6641.一种碱稳定性色谱分析用配体,所述配体包含两个或更多个葡萄球菌A蛋白(SpA)或其功能性片段或变体的B结构域或者两个或更多个SpA或其功能性片段或变体的Z结构域。2.一种碱稳定性色谱分析用配体,所述配体包含两个或更多个葡萄球菌A蛋白(SpA)或其功能性片段或变体的B结构域或者两个或更多个SpA或其功能性片段或变体的Z结构域,其中所述两个或更多个B结构域或者两个或更多个Z结构域在色谱分析树脂的多于一个位点上附着于树脂。3.权利要求1或者权利要求2的碱稳定性色谱分析用配体,其中所述配体包含三个或更多个SpAB结构域或者三个或更多个SpAZ结构域。4.权利要求1或者权利要求2的碱稳定性色谱分析用配体,其中所述配体包含四个或更多个SpAB结构域或者四个或更多个SpAZ结构域。5.权利要求1或者权利要求2的碱稳定性色谱分析用配体,其中所述配体包含五个或更多个SpAB结构域或者五个或更多个SpAZ结构域。6.权利要求1或者权利要求2的碱稳定性色谱分析用配体,其中所述配体包含六个或更多个SpAB结构域或者六个或更多个SpAZ结构域。7.权利要求1或者权利要求2的碱稳定性色谱分析用配体,其中所述配体包含七个或更多个SpAB结构域或者七个或更多个SpAZ结构域。8.前述权利要求任一项的碱稳定性色谱分析用配体,进一步包括至少一个氨基酸的突变以改变与Fab的结合。9.权利要求8的碱稳定性色谱分析用配体,其中所述突变包括在第29位丙氨酸取代甘氨酸。10.一种色谱分析基质,包含权利要求1-9任一项所述的配体。11.一种从样品中亲和纯化一种或多种免疫球蛋白的方法,所述方法包括如下步骤:(a)提供含有一种或多种免疫球蛋白的样品;(b)在一种或多种免疫球蛋白同基质结合的条件下,将样品与权利要求10的基质接触;和(c)通过在适宜的条件下洗脱而回收一种或多种结合的免疫球蛋白。12.权利要求1-9任一项所述的配体,其中所述配体在0.5MNaOH中温育5...
【专利技术属性】
技术研发人员:N·卞,N·索伊斯,S·斯佩克特,K·莱文,
申请(专利权)人:EMD密理博公司,
类型:发明
国别省市:美国,US
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