本发明专利技术公开了一种EGFR/ALK/ROS1基因突变联合检测方法，包括以下步骤：提取样本DNA；设计用于扩增EGFR/ALK/ROS1基因片段的特异性引物；利用单管多重PCR扩增反应得到目标片段；设计用于EGFR/ALK/ROS1基因片段的单碱基延伸引物；EGFR/ALK/ROS1基因片段单碱基延伸；核酸质谱分析测量目标DNA序列，能够有效地对非小细胞肺癌患者展开EGFR/ALK/ROS1基因突变联合检测，为此类患者开展个性化精准诊治奠定临床及科研基础。本发明专利技术还涉及一种EGFR/ALK/ROS1基因突变联合检测试剂盒。
【技术实现步骤摘要】
一种EGFR/ALK/ROS1基因突变联合检测方法及检测试剂盒
本专利技术涉及生物医学领域，尤其是涉及一种EGFR/ALK/ROS1基因突变联合检测方法及检测试剂盒。
技术介绍
在肺癌分子靶向治疗领域，研究热点主要集中在EGFR、ALK和ROS1靶点上。在NSCLC患者中，东亚人群EGFR基因突变比例约为35-40％，约90％突变为外显子19缺失和L858R突变；ALK基因融合比例约为3～11％；ROS1基因融合比例约为2-4％。EGFR基因是NSCLC患者接受酪氨酸激酶抑制剂(TyrosineKinaseInhibitors,TKIs)如易瑞沙、特罗凯、凯美纳等靶向药物治疗的重要生物标记物，ALK基因融合和ROS1基因融合的NSCLC患者可从靶向药物赛可瑞治疗中获益。美国国立综合癌症网络(NCCN)临床实践指南、欧洲肿瘤内科学会(ESMO)肺癌共识以及中国晚期非小细胞肺癌分子靶向治疗专家共识均明确建议：NSCLC患者在接受治疗之前应先检测EGFR、ALK和ROS1基因，根据基因状态决定相应的治疗策略，并建议有条件的单位同时进行三个基因的检测。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种EGFR/ALK/ROS1基因突变联合的检测方法和检测试剂盒。一种EGFR/ALK/ROS1基因突变联合检测方法，包括以下步骤：提取样本DNA；设计用于扩增EGFR/ALK/ROS1基因片段的特异性引物；利用单管多重PCR扩增反应得到目标片段；设计用于EGFR/ALK/ROS1基因片段的单碱基延伸引物；EGFR/ALK/ROS1基因片段单碱基延伸；核酸质谱分析测量目标DNA序列。进一步地，所述EGFR/ALK/ROS1基因突变联合片段包括EGFR-1片段、ALK-2片段及ROS1-3片段。进一步地，所述用于扩增EGFR/ALK/ROS1基因片段的特异性引物包括：用于扩增所述EGFR-1片段的特异性引物，正向引物为：SEQIDNos：1或2，反向引物为SEQIDNos：3或4；用于扩增所述ALK-2片段的特异性引物，正向引物为：SEQIDNos：5或6，反向引物为SEQIDNos：7或8；用于扩增所述ROS1-3片段的特异性引物，正向引物为：SEQIDNos：9或10，反向引物为SEQIDNos：11或12。进一步地，所述用于EGFR/ALK/ROS1基因片段的单碱基延伸引物包括：用于EGFR-1片段的单碱基延伸引物，序列为SEQIDNos：61；用于ALK-2片段的单碱基延伸引物，序列为SEQIDNos：62；用于ROS1-3片段的单碱基延伸引物，序列为SEQIDNos：63。进一步地，所述利用单管多重PCR扩增反应包括以下步骤：Taq酶激活，DNA变性。进一步地，Taq酶激活时温度为95℃。进一步地，Taq酶激活时间为15分钟。进一步地，DNA变性时温度为95℃。进一步地，DNA变性时间为15秒。一种EGFR/ALK/ROS1基因突变联合检测试剂盒，包括：用于扩增EGFR/ALK/ROS1基因片段的特异性引物，特异性引物包括SEQIDNos：1或2、SEQIDNos：3或4、SEQIDNos：5或6、SEQIDNos：7或8、SEQIDNos：9或10、SEQIDNos：11或12；用于EGFR/ALK/ROS1基因片段的单碱基延伸引物，单碱基延伸引物包括SEQIDNos：61、SEQIDNos：62、SEQIDNos：63。相比现有技术，本专利技术通过设计特异性引物扩增EGFR/ALK/ROS1基因片段，设计单碱基延伸引物使EGFR/ALK/ROS1基因片段的单碱基延伸，再通过核酸质谱分析测量目标DNA序列，能够有效地对非小细胞肺癌患者展开EGFR/ALK/ROS1基因突变联合检测，为此类患者开展个性化精准诊治奠定临床及科研基础。附图说明图1为本专利技术一种EGFR/ALK/ROS1基因突变联合检测方法的流程图。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。需要说明的是，当组件被称为“固定于”另一个组件，它可以直接在另一个组件上或者也可以存在居中的组件。当一个组件被认为是“连接”另一个组件，它可以是直接连接到另一个组件或者可能同时存在居中组件。当一个组件被认为是“设置于”另一个组件，它可以是直接设置在另一个组件上或者可能同时存在居中组件。本文所使用的术语“垂直的”、“水平的”、“左”、“右”以及类似的表述只是为了说明的目的。除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。本文所使用的术语“及/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。请参阅图1，本专利技术涉及一种EGFR/ALK/ROS1基因突变联合检测方法，包括以下步骤：提取样本DNA；设计用于扩增EGFR/ALK/ROS1基因片段的特异性引物；利用单管多重PCR扩增反应得到目标片段；设计用于EGFR/ALK/ROS1基因片段的单碱基延伸引物；EGFR/ALK/ROS1基因片段单碱基延伸；核酸质谱分析测量目标DNA序列。EGFR/ALK/ROS1基因片段包括EGFR-1片段、ALK-2片段及ROS1-3片段。用于扩增EGFR/ALK/ROS1基因片段的特异性引物包括：用于扩增所述EGFR-1片段的特异性引物，正向引物为：SEQIDNos：1或2，反向引物为SEQIDNos：3或4；用于扩增所述ALK-2片段的特异性引物，正向引物为：SEQIDNos：5或6，反向引物为SEQIDNos：7或8；用于扩增所述ROS1-3片段的特异性引物，正向引物为：SEQIDNos：9或10，反向引物为SEQIDNos：11或12。EGFR-1基因的正向引物SEQIDNos：1的序列为：TTGAACGTGTGATTGGCAGAAAC，EGFR-1基因的正向引物SEQIDNos：2的序列为：GGAATGAGATAGTTTCTG，EGFR-1基因的反向引物SEQIDNos：3的序列为：TCTCCCTCATGACGCTGCGGAA，EGFR-1基因的反向引物SEQIDNos：4的序列为：ATATGGAGTAGGGTCACCCACCC，ALK-2基因的正向引物SEQIDNos：5的序列为：TGATGGGCACTTGGATTACTTTCAC，ALK-2基因的正向引物SEQIDNos：6的序列为：TAACCAGGCGTGGTGGGTTCTTC，ALK-2基因的反向引物SEQIDNos：7的序列为：CAATGGACATGAACAACCCT，ALK-2基因的反向引物SEQIDNos：8的序列为：ACTGATTGACCAGTTAAACATC，ROS1-3基因的正向引物SEQIDNos：9的序列为：GCCATTGCCCAGGGAGGGAAAGTT，ROS1-3基因的正向引物SEQIDNos：10的序列为：TACCAC本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种EGFR/ALK/ROS1基因突变联合检测方法，其特征在于，包括以下步骤：提取样本DNA；设计用于扩增EGFR/ALK/ROS1基因片段的特异性引物；利用单管多重PCR扩增反应得到目标片段；设计用于EGFR/ALK/ROS1基因片段的单碱基延伸引物；EGFR/ALK/ROS1基因片段单碱基延伸；核酸质谱分析测量目标DNA序列。
【技术特征摘要】
1.一种EGFR/ALK/ROS1基因突变联合检测方法，其特征在于，包括以下步骤：提取样本DNA；设计用于扩增EGFR/ALK/ROS1基因片段的特异性引物；利用单管多重PCR扩增反应得到目标片段；设计用于EGFR/ALK/ROS1基因片段的单碱基延伸引物；EGFR/ALK/ROS1基因片段单碱基延伸；核酸质谱分析测量目标DNA序列。2.根据权利要求1所述的EGFR/ALK/ROS1基因突变联合检测方法，其特征在于：所述EGFR/ALK/ROS1基因片段包括EGFR-1片段、ALK-2片段及ROS1-3片段。3.根据权利要求2所述的EGFR/ALK/ROS1基因突变联合检测方法，其特征在于：所述用于扩增EGFR/ALK/ROS1基因片段的特异性引物包括：用于扩增EGFR-1片段的特异性引物，正向引物为：SEQIDNos：1或2，反向引物为SEQIDNos：3或4；用于扩增ALK-2片段的特异性引物，正向引物为：SEQIDNos：5或6，反向引物为SEQIDNos：7或8；用于扩增ROS1-3片段的特异性引物，正向引物为：SEQIDNos：9或10，反向引物为SEQIDNos：11或12。4.根据权利要求2所述的EGFR/ALK/ROS1基因突变联合检测方法，其特征在于：所述用于EGFR/ALK/ROS1基因片段的单碱基延伸引物包括：用于EGFR-1片段的单碱基延伸引物，序列为SEQI...
【专利技术属性】
技术研发人员：田军龙，张为，王文忠，胡军，陈苏平，
申请(专利权)人：为康苏州基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。