一种胶乳增强免疫比浊法测定血清淀粉样蛋白A检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种胶乳增强免疫比浊法测定血清淀粉样蛋白A检测试剂盒，所述试剂盒内分别放置有R1试剂以及R2试剂。该胶乳增强免疫比浊法测定血清淀粉样蛋白A检测试剂盒采用新型胶乳增强免疫比浊法，在EDAC的存在下，NHS通过与微球上的羧基反应形成中间活化酯羧基反应形成中间活化酯，从而使SAA检测试剂盒更灵敏，更稳定；而且在反应体系中添加Tween20或者Tergitol NP9等非离子型表面活性剂，使微球不会对蛋白质的结构产生影响，最大程度保持了蛋白质的活性稳定，且不会发生凝集现象。

A Kit for Detecting Serum Amyloid A by Latex Enhanced Immunoturbidimetry

The invention discloses a latex enhanced immunoturbidimetric assay kit for detecting serum amyloid A, in which R1 reagent and R2 reagent are respectively placed. In the presence of EDAC, NHS reacts with carboxyl groups of microspheres to form intermediate activated esters to form intermediate activated esters, which makes SAA detection kit more sensitive and stable; and in the presence of EDAC, NHS reacts with carboxyl groups of microspheres to form intermediate activated esters to form intermediate activated esters. The addition of Tween20 or Tergitol NP9 as non-ionic surfactants in the system made the microspheres not affect the structure of proteins, and kept the activity of proteins stable to the greatest extent, and did not agglutinate.

【技术实现步骤摘要】
一种胶乳增强免疫比浊法测定血清淀粉样蛋白A检测试剂盒
本专利技术涉及检测
，尤其涉及一种胶乳增强免疫比浊法测定血清淀粉样蛋白A检测试剂盒。
技术介绍
血清淀粉样蛋白A（serumamyloidA，SAA)是一种急性时限反应蛋白，属于载脂蛋白家族中的异质类蛋白质，相对分子量约12000。在急性时限反应中，经IL-1、IL-6和TNF刺激，SAA在肝脏中由被激活的巨噬细胞和纤维母细胞合成，可升高到最初浓度的100-1000倍，但半衰期极短，只有50分钟左右。血清淀粉样蛋白A与高密度脂蛋白(HDL)有关，它能在炎症期间调节高密度脂蛋白的代谢。血清淀粉样蛋白A一个特别重要的特性是其降解产物能以淀粉样蛋白A(AA)原纤维的方式沉积在不同的器官中，在慢性炎症疾病中这是一种严重的并发症。目前，应用于血清SAA检测的方法包括酶联免疫吸附法、放射性免疫检测法、免疫层析法、免疫散射比浊法、胶乳增强免疫比浊法等等。酶联免疫吸附法操作繁琐，耗时，自动化水平低；放射性免疫分析法虽然具有特异性强灵敏度高的特点，但也存在潜在放射性污染，因此也逐渐不被接受；乳胶增强免疫比浊法较之免疫层析法具有更高的灵敏度和准确度。羧基微球和SAA抗体的化学交联是乳胶增强免疫比浊法的关键，EDC可将微球上的羧基活化，活化的羧基能与SAA抗体中的氨基反应形成肽键。但此方法制备得到的蛋白质-微球中，蛋白质和胶乳微球直接接触，胶乳微球的表面会对抗体的结构产生影响，从而会使蛋白质的活性有所下降，最终会降低试剂的灵敏度。为此，我们提出了一种胶乳增强免疫比浊法测定血清淀粉样蛋白A检测试剂盒。
技术实现思路
本专利技术提出了一种胶乳增强免疫比浊法测定血清淀粉样蛋白A检测试剂盒，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。本专利技术提出了一种胶乳增强免疫比浊法测定血清淀粉样蛋白A检测试剂盒，所述试剂盒内分别放置有R1试剂以及R2试剂。本专利技术还提供了一种R1试剂，其原料配方如下：反应缓冲液25-75mM、反应增强剂0.5%-3%（w/v）、防腐剂0.1%-0.5%（w/v）、表面活性剂0.1%-2%（w/v），PH=7.0-8.0。优选的，所述反应缓冲液具体为PBS缓冲溶液、Tris-HCl缓冲溶液、MES缓冲溶液、HEPES缓冲溶液、甘氨酸缓冲溶液、醋酸缓冲溶液以及DIPSO缓冲溶液中的一种或者多种混合物；反应增强剂具体为PEG2000、PEG6000、PEG8000以及PEG12000中的一种或者多种混合物；防腐剂具体为Proclin-300、庆大霉素或者是NaN3；表面活性剂为Tween20、TritonX-100以及TergitolNP9中的一种或者多种混合物。优选的其原料最优配方如下：HEPES缓冲液50mM、PEG800010g/L、NaN31g/L、BSA2g/L、明胶1g/L、NaCl1.3g/L、TritonX-1000.2%,PH=7.0-8.0。本专利技术还提供了一种R2试剂，其原料配方如下：包被有血清淀粉样蛋白A抗体的胶乳颗粒0.2%-1%（w/v）、缓冲液25-75mM、防腐剂0.1%-0.5%（w/v）、表面活性剂0.1%-2%（w/v），PH=7.0-8.0优选的，反应缓冲液具体为PBS缓冲溶液、Tris-HCl缓冲溶液、MES缓冲溶液、HEPES缓冲溶液、甘氨酸缓冲溶液、醋酸缓冲溶液以及DIPSO缓冲溶液中的一种或者多种混合物；防腐剂具体为Proclin-300、庆大霉素或者是NaN3；表面活性剂具体为Tween20、TritonX-100以及TergitolNP9中的一种或者多种混合物。优选的其原料最优配方如下：包被有血清淀粉样蛋白A抗体的胶乳颗粒0.4%、HEPES缓冲溶液50mM、NaN31g/L、甘油1%、山梨醇1.5%、蛋白胨1.2%、BSA1g/L、NaCl2.9g/L、TritonX-1000.2%，PH=7.0-8.0。本专利技术还提供了一种包被有血清淀粉样蛋白A抗体的胶乳颗粒的制备方法，具体步骤如下：（1）、称取11.5gNHS以及19.2gEDAC，并将其溶于500ml的DIW中，再加入0.5MMESbuffer100mL，调整PH为6.0-6.5，再加入10%的胶乳微球100mL，其中胶乳微球的直径为100-300nm，加水至1L，室温下搅拌反应15-30分钟；（2）、用0.05-0.1M的MESbuffer清洗两次，离心后超声重悬微球到1%；（3）、用0.05-0.1M的MESbuffer，pH值为7-9的稀释抗体使其最终蛋白浓度为1g/L；（4）、将微球溶液和抗体溶液1:1混合，室温下搅拌孵育2-4hr；（5）、离心去上清，用0.05-0.1M的MESbuffer清洗两次，重悬保存，即得到包被有血清淀粉样蛋白A抗体的胶乳颗粒。本专利技术提出的一种胶乳增强免疫比浊法测定血清淀粉样蛋白A检测试剂盒，有益效果在于：该胶乳增强免疫比浊法测定血清淀粉样蛋白A检测试剂盒采用新型胶乳增强免疫比浊法，在EDAC的存在下，NHS通过与微球上的羧基反应形成中间活化酯羧基反应形成中间活化酯，并添加抗体稳定剂，从而使SAA检测试剂盒更灵敏，更稳定。而且在反应体系中添加Tween20或者TergitolNP9等非离子型表面活性剂，使微球不会对蛋白质的结构产生影响，最大程度保持了蛋白质的活性稳定。且不会发生凝集现象。具体实施方式下面结合具体实施例来对本专利技术做进一步说明。实施例1本专利技术提出了一种胶乳增强免疫比浊法测定血清淀粉样蛋白A检测试剂盒，所述试剂盒内分别放置有R1试剂以及R2试剂。本专利技术还提供了一种R1试剂，其原料配方如下：HEPES缓冲液50mMPEG800010g/LNaN31g/L明胶1g/LBSA2g/LNaCl1.3g/LTritonX-1000.2%PH=7.4本专利技术还提供了一种R2试剂，配方如下：包被有SAA抗体的胶乳颗粒0.4%HEPES缓冲液50mMPEG800010g/LNaN31g/L甘油1%山梨醇1.5%蛋白胨1.2%BSA1g/LNaCl2.9g/LTritonX-1000.2%PH=7.0本专利技术还提供了一种包被有血清淀粉样蛋白A抗体的胶乳颗粒的制备方法，具体步骤如下：（1）、称取11.5gNHS以及19.2gEDAC，并将其溶于500ml的DIW中，再加入0.5MMESbuffer100mL，调整PH为6.0-6.5，再加入10%的胶乳微球100mL，其中胶乳微球的直径为120nm，定容至1L，室温下搅拌反应15分钟；（2）、用0.05-0.1M的MESbuffer清洗两次，离心后超声重悬微球到1%；（3）、用0.05-0.1M的MESbuffer，pH值为7-9的稀释抗体使其最终蛋白浓度为1g/L；（4）、将微球溶液和抗体溶液1:1混合，室温下搅拌孵育2hr；（5）、离心去上清，用0.05-0.1M的MESbuffer清洗两次，重悬保存，即得到包被有血清淀粉样蛋白A抗体的胶乳颗粒。实施例2本专利技术提出了一种胶乳增强免疫比浊法测定血清淀粉样蛋白A检测试剂盒，所述试剂盒内分别放置有R1试剂以及R2试剂。本专利技术还提供了一种R1试剂，其原料配方如下：Tris-HCl缓冲液75mMPEG800015g/LNaN31.5g/L明胶2g/L本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种胶乳增强免疫比浊法测定血清淀粉样蛋白A检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒内分别放置有R1试剂以及R2试剂。

【技术特征摘要】
1.一种胶乳增强免疫比浊法测定血清淀粉样蛋白A检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒内分别放置有R1试剂以及R2试剂。2.一种根据权利要求1所述的R1试剂，其特征在于：其原料配方如下：反应缓冲液25-75mM、反应增强剂0.5%-3%（w/v）、防腐剂0.1%-0.5%（w/v）、表面活性剂0.1%-2%（w/v），PH=7.0-8.0。3.根据权利要求2所述的一种R1试剂，其特征在于：所述反应缓冲液具体为PBS缓冲溶液、Tris-HCl缓冲溶液、MES缓冲溶液、HEPES缓冲溶液、甘氨酸缓冲溶液、醋酸缓冲溶液以及DIPSO缓冲溶液中的一种或者多种混合物；反应增强剂具体为PEG2000、PEG6000、PEG8000以及PEG12000中的一种或者多种混合物；防腐剂具体为Proclin-300、庆大霉素或者是NaN3；表面活性剂为Tween20、TritonX-100以及TergitolNP9中的一种或者多种混合物。4.根据权利要求3所述的一种R1试剂，其特征在于：其原料最优配方如下：HEPES缓冲液50mM、PEG80001%、NaN31g/L、BSA2g/L、明胶1g/L、NaCl1.3g/L、TritonX-1000.2%,PH=7.0-8.0。5.一种根据权利要求1所述的R2试剂，其特征在于，其原料配方如下：包被有血清淀粉样蛋白A抗体的胶乳颗粒0.2%-1%（w/v）、缓冲液25-75mM、防腐剂0.1%-0.5%（w/v）、表面活性剂0.1%-2%（w/v），PH=7.0-8.0。6.根据权利要求5所述的R2试剂，其特征在于，反应缓冲液...

【专利技术属性】
技术研发人员：王贤理，池万余，卢强，贾刚，
申请(专利权)人：浙江伊利康生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33