糖化白蛋白检测试剂盒、制备方法及其应用方法技术

本发明专利技术公开了一种糖化白蛋白检测试剂盒、制备方法及其应用方法。该糖化白蛋白检测试剂盒包括R1试剂、R2试剂和R3试剂，R1检测试剂包括第一缓冲剂、果糖氨基酸氧化酶、过氧化氢酶、维生素C、防腐剂、稳定剂，R2检测试剂包括第二缓冲剂、碳酸钠、3

【技术实现步骤摘要】
糖化白蛋白检测试剂盒、制备方法及其应用方法


[0001]本专利技术涉及临床医学参数检测
，具体涉及一种糖化白蛋白检测试剂盒、制备方法及其应用方法。

技术介绍

[0002]血清白蛋白是血液中的葡萄糖与血清白蛋白的N
‑
末端发生非酶促糖基化反应的产物，是一种能够反映过去2
‑
3周平均血糖水平的一项重要指标，在治疗效果的确认和临床用药量的调整方面具有更加突出的优势，因此其测定结果的准确性具有重要意义。
[0003]糖化白蛋白的检测方法主要包括亲和层析法、高效液相色谱法、免疫法、酶法等，其中层析法和高效液相色谱法需要对待测样品进行复杂的预处理，同时仪器昂贵，耗时长，成本高，不适合临床的常规分析使用。临床上检测糖化白蛋白的常规方法主要是酶法，即果糖氨基酸氧化酶法，也称为酮氨氧化酶法。
[0004]酮氨氧化酶法的主要过程为：在待测血清或血浆中加入蛋白酶，将糖化白蛋白分解为氨基酸、糖化氨基酸；由糖化白蛋白分解得到的糖化氨基酸在酮氨氧化酶的作用下，分解为葡萄糖酮醛、氨基酸和过氧化氢；生成的过氧化氢与显色剂反应，生成特定颜色的物质，测定吸光度，计算得到糖化白蛋白的浓度。
[0005]目前，多种用于糖化白蛋白检测的试剂盒被开发出来，如申请号为201410401260.X、201811120574.7和201911287909.9的中国专利公开的技术方案，这些试剂盒基本都包括两种试剂，首先分解糖化白蛋白，得到含糖化氨基酸的溶液，然后在酶的作用下生成过氧化氢，使过氧化氢与显色剂反应，产生与糖化白蛋白浓度对应的色素，根据吸光度得到糖化白蛋白的浓度。
[0006]但采用现有技术的试剂盒测定糖化白蛋白存在蛋白酶酶活不高，无法消除内源糖化氨基酸的影响，过氧化氢与色素的反应相对于过氧化氢的生成过程滞后，导致部分过氧化氢分解，使测定结果偏低，过氧化氢与显色剂生成的色素稳定性不足等问题，导致糖化白蛋白的测定结果不准确。因此，需要开发一种能够解决上述问题的糖化白蛋白检测试剂盒、制备方法及其应用方法。

技术实现思路

[0007]有鉴于此，本专利技术提供一种糖化白蛋白检测试剂盒、制备方法及其应用方法，通过设置先行消除内源糖化氨基酸影响的试剂，增加测定结果的准确性，在测定试剂中加入聚乙二醇，以增加生成的过氧化氢与显色剂之间的亲和性，增加反应速率，减少因过氧化氢分解而导致测定结果偏低的技术问题。
[0008]为达到此专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0009]第一方面，本专利技术提供一种糖化白蛋白检测试剂盒，所述糖化白蛋白检测试剂盒包括R1试剂、R2试剂和R3试剂；
[0010]所述R1试剂的组分及浓度如下：
[0011][0012]所述R2试剂的组分及浓度如下：
[0013][0014]所述R3试剂的组分及浓度如下：
[0015][0016][0017]优选地，所述第一缓冲剂包括pH8的tris缓冲液，第二缓冲剂包括pH10的tris缓冲液；第三缓冲剂包括pH7的tris缓冲液。
[0018]优选地，所述防腐剂为proclin300或者叠氮钠。
[0019]优选地，所述稳定剂为海藻糖或者蔗糖。
[0020]第二方面，本专利技术提供一种糖化白蛋白检测试剂盒的制备方法，所述糖化白蛋白检测试剂盒的制备方法包括以下步骤：
[0021]根据需要配制R1试剂的体积，按照如下配比计算并称取配料：第一缓冲剂50
‑
150mmol/L、果糖氨基酸氧化酶5
‑
100KU/L、过氧化氢酶2
‑
10KU/L、维生素C10
‑
100mmol/L、防
腐剂1
‑
5mL/L、稳定剂1
‑
5g/L，溶解于相应体积的去离子水中，得到R1试剂；
[0022]根据需要配制R2试剂的体积，按照如下配比计算并称取配料：第二缓冲剂60
‑
120mmol/L、碳酸钠10
‑
100mmol/L、3
‑
甲基苯并噻唑砜腙5
‑
20mmol/L、氯化钙0.5
‑
1g/L、EDTA1
‑
2 g/L、防腐剂1
‑
5mL/L、稳定剂1
‑
5g/L，溶解于相应体积的去离子水中，得到R2试剂；
[0023]根据需要配制R3试剂的体积，按照如下配比计算并称取配料：第三缓冲剂50
‑
100mmol/L、碱性蛋白酶1
‑
5KU/L、蛋白酶K5
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10 KU/L、果糖氨基酸氧化酶50
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200KU/L、过氧化物酶10
‑
30KU/L、聚乙二醇PEG
‑
4001
‑
8g/L、N
‑
乙基
‑
N
‑
(2
‑
羟基
‑3‑
磺丙基)
‑3‑
甲基苯胺钠盐2
‑
20mmol/L、防腐剂1
‑
5mL/L、稳定剂1
‑
5g/L，溶解于相应体积的去离子水中，得到R3试剂。
[0024]优选地，所述R1试剂的各组分加入顺序为第一缓冲剂、稳定剂、防腐剂、果糖氨基酸氧化酶、过氧化氢酶、维生素C。
[0025]优选地，所述R2试剂的各组分加入顺序为第二缓冲剂、EDTA、氯化钙、3
‑
甲基苯并噻唑砜腙、稳定剂、防腐剂、碳酸钠。
[0026]优选地，所述R3试剂的各组分加入顺序为第三缓冲剂、稳定剂、防腐剂、聚乙二醇PEG
‑
400、果糖氨基酸氧化酶、过氧化物酶、碱性蛋白酶、蛋白酶K、N
‑
乙基
‑
N
‑
(2
‑
羟基
‑3‑
磺丙基)
‑3‑
甲基苯胺钠盐。
[0027]第三方面，本专利技术提供一种糖化白蛋白检测试剂盒的应用方法，所述应用方法包括以下步骤：
[0028]将待测样品与所述R1试剂混合；
[0029]一定时间后加入所述R2试剂，振荡混匀，测定吸光度；
[0030]一定时间后加入所述R3试剂，振荡混匀，测定吸光度；
[0031]根据吸光度计算所述待测样品中糖化白蛋白的浓度。
[0032]相对于现有技术，本专利技术具有以下有益技术效果：
①
能够最大限度消除待测血液样品中内源糖化氨基酸的影响，提高测定准确性；
②
能够提高蛋白酶的活性，加快对糖化白蛋白的酶解速度；
③
能够使过氧化氢的生成速度与消耗速度协同，减少过氧化氢的分解，提高测定准确性；
④
能够增加过氧化氢与显色剂生成的色素稳定性，提高测定准确性。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种糖化白蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述糖化白蛋白检测试剂盒包括R1试剂、R2试剂和R3试剂；所述R1试剂的组分及浓度如下：所述R2试剂的组分及浓度如下：所述R3试剂的组分及浓度如下：2.根据权利要求1所述的糖化白蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述第一缓冲剂包括pH8的tris缓冲液，第二缓冲剂包括pH10的tris缓冲液；第三缓冲剂包括pH7的tris缓冲液。3.根据权利要求1所述的糖化白蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述防腐剂为proclin300或者叠氮钠。4.根据权利要求1所述的糖化白蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述稳定剂为海藻糖或
者蔗糖。5.一种糖化白蛋白检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述糖化白蛋白检测试剂盒的制备方法包括以下步骤：根据需要配制R1试剂的体积，按照如下配比计算并称取配料：第一缓冲剂50
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150mmol/L、果糖氨基酸氧化酶5
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100KU/L、过氧化氢酶2
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10KU/L、维生素C10
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100mmol/L、防腐剂1
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5mL/L、稳定剂1
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5g/L，溶解于相应体积的去离子水中，得到R1试剂；根据需要配制R2试剂的体积，按照如下配比计算并称取配料：第二缓冲剂60
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120mmol/L、碳酸钠10
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100mmol/L、3
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甲基苯并噻唑砜腙5
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20mmol/L、氯化钙0.5
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1g/L、EDTA1
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2 g/L、防腐剂1
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5mL/L、稳定剂1
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5g/L，溶解于相应体积的去离子水中，得到R2试剂；根据需要配制R3试剂的体积，按照如下配比计算并称取配料：第三缓冲剂50
‑
100mmol/L、碱性蛋白酶1
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【专利技术属性】
技术研发人员：王伊琳，王贤理，池万余，邓慰，卢强，王友群，
申请(专利权)人：浙江伊利康生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：