一种检测粪便脱落细胞DNA甲基化状态用于分析大肠癌的试剂盒制造技术

一种检测粪便脱落细胞DNA甲基化状态用于分析大肠癌的试剂盒，具体为提供一种从大肠癌粪便脱落细胞中检测与大肠癌相关的PDX1基因甲基化的试剂盒及其应用，本发明专利技术通过设计特异性甲基化引物检测PDX1基因甲基化的核酸序列，实现对大肠癌的筛查和辅助诊断，通过荧光定量PCR法分析PDX1基因标志物的甲基化水平，并根据所报告的CT值判读样本的阳性或阴性结果。在临床前研究中可以检测出绝对多数的大肠癌和大部分的癌前腺瘤；能检测到90％的早期大肠癌，64％的癌前腺瘤(≥1厘米)，特异性为100％，且完全无创，仅需4.5克粪便，无症状人群接受度高。

A kit for detecting DNA methylation status of fecal exfoliated cells for colorectal cancer analysis

A kit for detecting DNA methylation status of fecal exfoliated cells for analysis of colorectal cancer is provided, in particular, a kit for detecting methylation of PDX1 gene related to colorectal cancer from fecal exfoliated cells of colorectal cancer and its application. The kit detects methylation sequence of PDX1 gene by designing specific methylation primers. To screen and diagnose colorectal cancer, the methylation level of PDX1 gene markers was analyzed by fluorescence quantitative PCR, and the positive or negative results of samples were interpreted according to the reported CT values. In preclinical studies, absolute majority of colorectal cancers and most precancerous adenomas can be detected; 90% of early colorectal cancers can be detected, 64% of precancerous adenomas (> 1 cm), specificity is 100%, and completely non-invasive, only 4.5 grams of feces are needed, and the acceptance of asymptomatic population is high.

【技术实现步骤摘要】
一种检测粪便脱落细胞DNA甲基化状态用于分析大肠癌的试剂盒
本专利技术属于分子生物学领域，涉及一种甲基化特异性PCR法筛查大肠癌的试剂盒，适用于检测粪便脱落细胞中是否存在结大肠癌突变DNA。
技术介绍
大肠癌是人类最常见的恶性肿瘤之一，其发病率位居全球恶性肿瘤第三位。据世界卫生组织统计，全世界大肠癌的年发病率为一百二十万，年病死率约为六十万。大肠癌的发病率在发达国家中渐趋稳定。以中国为首的发展中国家，随着人们生活方式以及饮食结构的改变，大肠癌的发病率呈直线上升趋势，有统计表显示年增长率约为4.2％，已经成为我国女性第三位、男性第四位的恶性肿瘤。大肠癌患者的生存率与肿瘤分期密切相关，早期大肠癌术后5年生存率超过90％，但多数患者就诊时已处于进展期。由于93％的大肠癌源于腺瘤，早期多无特异性症状，而从腺瘤发展到癌需要3～17年，这就为早期筛查提供了时间基础，有效的早期筛查能够及时发现癌前病变，采取相应的治疗措施，提高患者生存率。根据世界卫生组织提出的建议，适合开展筛查的疾病应符合5个条件：(1)此疾病在这一地区发病率高；(2)有合适的筛查手段；(3)筛查后可以进行有效治疗；(4)通过筛查本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测与大肠癌相关的PDX1基因甲基化特异性扩增的引物和探针，其特征在于，所述PDX1基因甲基化特异性扩增的正向引序列为SEQ ID NO:1，反向引物序列为SEQ ID NO:2，荧光探针序列为SEQ ID NO:3，其中荧光探针5′端标记FAM，3′端标记MGB。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测与大肠癌相关的PDX1基因甲基化特异性扩增的引物和探针，其特征在于，所述PDX1基因甲基化特异性扩增的正向引序列为SEQIDNO:1，反向引物序列为SEQIDNO:2，荧光探针序列为SEQIDNO:3，其中荧光探针5′端标记FAM，3′端标记MGB。2.权利要求1所述引物和探针在制备检测大肠癌试剂盒试剂中的应用。3.一种用于检测与大肠癌相关的PDX1基因甲基化特异性扩增的试剂盒，其特征在于，包含荧光定量反应液，所述荧光定量反应液为权利要求1所述的PDX1基因甲基化特异性扩增的引物和探针。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCRMasterMix，内标基因的引物及探针，裂解液，蛋白酶K，漂洗液，亚硫酸氢盐溶液。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述PCRMasterMix中含有Taq聚合酶、dNTP和PCRBuffer；所述内标基因为人类管家基因GAPDH。6.权利要求3-5任一项所述试剂盒在检测大肠癌试剂中的应用。7.根据权利要求3～5任一所述试剂盒的使用方法，其特征在于，所述试剂盒检测大肠癌的步骤如下：(1)收集一定数量人大肠癌...

【专利技术属性】
技术研发人员：邵琦，
申请(专利权)人：安徽达健医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽,34