一种用于检验CAR-T细胞杀伤效果的靶细胞及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种用于检验CAR‑T细胞杀伤效果的靶细胞CCC‑3T3，属于细胞工程技术领域；所述靶细胞CCC‑3T3为表达CAR‑T细胞靶抗原基因以及Caveolin‑1和caspase‑3的融合蛋白基因的小鼠成纤维样细胞。所述靶细胞CCC‑3T3的制备方法为：用慢病毒转染法将所述Caveolin‑1和caspase‑3的融合蛋白基因转入小鼠成纤维样细胞获得表达融合蛋白的CC‑3T3细胞；然后用慢病毒转染法将CAR‑T细胞靶抗原基因转入CC‑3T3细胞，获得靶细胞CCC‑3T3。所述靶细胞CCC‑3T3，杀伤背景低，对杀伤信号敏感，能准确反应效应细胞的特异性杀伤能力。

Target cell for testing killing effect of CAR-T cell and preparation method and application thereof

The present invention provides a target cell CCC_3T3 for testing the killing effect of CAR_T cells, belonging to the field of cell engineering technology. The target cell CCC_3T3 is a mouse fibroblast-like cell expressing the target antigen gene of CAR_T cells and the fusion protein gene of Caveolin_1 and caspase_3. The preparation method of the target cell CCC_3T 3 is as follows: the fusion protein genes of Caveolin_1 and caspase_3 are transfected into the fibroblast-like cells of mice by lentivirus transfection method to obtain CC_3T 3 cells expressing the fusion protein; and then the target antigen gene of CAR_T cells is transfected into CC_3T 3 cells by lentivirus transfection method to obtain the target cell CCC_3. T3. The target cell CCC_3T3 has low killing background, is sensitive to killing signal and can accurately reflect the specific killing ability of the effector cell.

【技术实现步骤摘要】
一种用于检验CAR-T细胞杀伤效果的靶细胞及其制备方法和应用
本专利技术属于细胞工程
，尤其涉及一种用于检验CAR-T细胞杀伤效果的靶细胞及其制备方法和应用。
技术介绍
杀伤功能是机体免疫功能的一个重要方面，免疫系统中有多种具有杀伤功能的靶细胞，如自然杀伤细胞(NK)、细胞毒性T细胞(CTL)、具有ADCC作用的单核细胞巨噬细胞等。CAR-T细胞全称为嵌合抗原受体T细胞，是目前较为有效的恶性肿瘤的治疗方式之一，和其它免疫疗法类似，它的基本原理就是利用病人自身的免疫细胞来清除癌细胞。常规的杀伤实验靶细胞，多采用人类永生化细胞或者肿瘤细胞，如K562细胞、293T细胞等，由于这些细胞是人类的永生化细胞，会有很多除了靶抗原蛋白以外的突变蛋白表达到细胞表面，或者被HLA分子递呈到细胞表面，这就导致效应细胞对靶细胞进行杀伤时，除了针对靶抗原的特异性杀伤以外，还有对其他蛋白的非特异性杀伤，杀伤背景高，当效应细胞中特异性T细胞CAR-T细胞比例较低时，就会出现假阴性结果。另外，常规的靶细胞还存在对杀伤信号不敏感，自身增殖速度过快，无法进行长时间杀伤实验等问题。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检验CAR‑T细胞杀伤效果的靶细胞CCC‑3T3，其特征在于，所述靶细胞CCC‑3T3为表达CAR‑T细胞靶抗原基因以及Caveolin‑1和caspase‑3的融合蛋白基因的小鼠成纤维样细胞。

【技术特征摘要】
1.一种用于检验CAR-T细胞杀伤效果的靶细胞CCC-3T3，其特征在于，所述靶细胞CCC-3T3为表达CAR-T细胞靶抗原基因以及Caveolin-1和caspase-3的融合蛋白基因的小鼠成纤维样细胞。2.根据权利要求1所述的靶细胞CCC-3T3，其特征在于，所述Caveolin-1和caspase-3的融合蛋白基因包括顺次连接的Caveolin-1基因、连接肽基因和caspase-3基因。3.根据权利要求1或2所述的靶细胞CCC-3T3，其特征在于，所述Caveolin-1基因的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示。4.根据权利要求1或2所述的靶细胞CCC-3T3，其特征在于，所述caspase-3基因的核苷酸序列如SEQIDNo.2所示。5.根据权利要求2所述的靶细胞CCC-3T3，其特征在于，所述连接肽的核苷酸序列如SEQIDNo.3所示。6.根据权利要求1或2所述的靶细胞CCC-3T3，其特征在于，所述CAR-T细胞靶抗原基因为CD19基因、CD2...

【专利技术属性】
技术研发人员：焦顺昌，张嵘，张天赋，
申请(专利权)人：焦顺昌，北京鼎成肽源生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11