The invention discloses a human liver cell line with high expression of human serum albumin and its establishment method and application, belonging to the field of genetic engineering. The present invention aims to improve the synthesis function of hepatocyte lines, select albumin-related genes (ALB, gene ID: 213), and insert the genome of CRISPR/dCas9 system protein complex Synergistic Activation Mediator (SAM) into the genome of cell lines by lentivirus transfection, so as to stabilize the expression of cell lines. Over expression of complexes can achieve over expression regulation of albumin. The human liver cell line with high expression of human albumin can be used as a cell source in the biological artificial liver system.
【技术实现步骤摘要】
人血白蛋白高表达的人肝细胞系及其建立方法和应用
本专利技术属于基因工程领域，具体地说，是一种人血白蛋白高表达的人肝细胞系及其建立方法和应用。
技术介绍
人工肝支持系统借助于机械的、物理的装置通过清除内毒素、胆红素等有毒物质，补充白蛋白、氨基酸、凝血因子等有毒物质，暂时发挥肝脏的支持作用。临床治疗结果显示：人工肝支持系统能够显著提高肝衰竭的临床治愈、好转率。然而，非生物型人工肝支持系统尚不能完全替代肝脏的合成、代谢功能和生物转化等功能。随着肝细胞的分离培养和保存技术、肝细胞大规模培养技术及生物反应器日渐成熟，以肝细胞为生物活性成分的生物型人工肝(bioartificialliver,BAL)成为人工肝脏研究的热点。生物型人工肝其依靠接种于生物反应器中的肝细胞，可以提供肝脏的分泌、代谢，生物转化和解毒等功能，在理论上讲，几乎可以代替肝脏的全部功能。白蛋白(albumin，ALB)由肝脏实质细胞合成，占血浆总蛋白的40％-60％，是血清中的主要蛋白质成分。白蛋白在机体中具有重要的生理功能：维持血浆胶体渗透压的恒定；能与体内许多难溶性的小分子有机物和无机离子可逆地结合形成...
【技术保护点】
1.一种人血白蛋白高表达的人肝细胞系，命名为HepG2N，其特征在于，所述的人肝细胞系保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC NO:C201872，保藏日期为2018年4月10日。
【技术特征摘要】
1.一种人血白蛋白高表达的人肝细胞系，命名为HepG2N，其特征在于，所述的人肝细胞系保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCCNO:C201872，保藏日期为2018年4月10日。2.根据权利要求1所述的人血白蛋白高表达的人肝细胞系，其特征在于，所述的人肝细胞系是利用慢病毒载体运载调节蛋白基因组，整合进入原细胞基因组中而得到的细胞系。3.根据权利要求2所述的人血白蛋白高表达的人肝细胞系，其特征在于，所述的慢病毒载体一共包括三种慢病毒颗粒，分别运载三种蛋白复合体的激活元件的调节蛋白基因组，即dCas9-VP64、MS2-p65-HSF1和靶向特异性sgRNA。4.根据权利要求3所述的人血白蛋白高表达的人肝细胞系，其特征在于，所述的激活元件的调节蛋白基因组表达SAM蛋白复合体激活原件，组合成为SAM蛋白复合体。5.根据权利要求4所述的人血白蛋白高表达的人肝细胞系，其特征在于，所述的慢病毒载体内包含有筛选基因，也将一同被整合进入原细胞基因组中。6.根据权利要求5所述的人血白蛋白高表达的人肝细胞系，其特征在于，所述的筛选基...
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