一步纯化固定化ɑ-氨基酸脂酰基转移酶的方法技术

本发明专利技术涉及酶固定化技术领域，具体公开一种一步纯化固定化ɑ‑氨基酸脂酰基转移酶的方法，通过对ɑ‑氨基酸脂酰基转移酶进行醛基化标记，并在宿主细胞内对ɑ‑氨基酸脂酰基转移酶和甲酰甘氨酸合成酶进行同步诱导，得到高表达量的菌株，将菌体破碎取上清，与氨基载体混合后即可一步实现ɑ‑氨基酸脂酰基转移酶的固定化，无需额外的纯化步骤。本发明专利技术方法节省了操作步骤，并保证了目标蛋白的表达，且用普通的氨基载体即可固定化，适于工业化生产。

【技术实现步骤摘要】
一步纯化固定化ɑ-氨基酸脂酰基转移酶的方法
本专利技术涉及酶固定化
，具体涉及一种一步纯化固定化ɑ-氨基酸脂酰基转移酶的方法。
技术介绍
酶的固定化(Immobilizationofenzymes)是用固体材料将酶束缚或限制于一定区域内,仍能进行其特有的催化反应、并可回收及重复利用的一类技术。固定化酶在保持其高效专一及温和的酶催化反应特性的同时,又克服了游离酶的不足之处,呈现贮存稳定性高、分离回收容易、可多次重复使用、操作连续可控，工艺简便等一系列优点。而且具有节省资源与能源、减少或防治污染，符合可持续发展的战略要求。固定化酶技术可分为吸附法、结合法、交联法、和包埋法。其中共价结合法由于其固相载体与酶分子间以更加稳定的共价键相连接，使用过程中酶不容易脱落而得到广泛应用。酶和载体的共价结合主要由载体表面的活性功能基团和酶表面的活性氨基酸残基，通过化学反应而结合。但是这种结合一般是载体随机地和蛋白质氨基酸残基的氨基等基团结合，而缺少目标蛋白特异性和结合位点特异性，易造成非特异结合。在这种情况下，为了提高固定化酶酶活，一般需要对目的蛋白进行纯化，增加了操作步骤和成本。另外随机结合会引本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种一步纯化固定化ɑ‑氨基酸脂酰基转移酶的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)将ɑ‑氨基酸酯酰基转移酶基因与醛基化标签基因融合；(2)将步骤(1)融合后的基因和甲酰甘氨酸合成酶基因分别连接到原核表达载体上；(3)将构建好的载体转入宿主细胞，对两种酶进行同步诱导表达；(4)离心收集诱导完的菌体，破碎后离心收集上清，与氨基载体混合进行固定化。

【技术特征摘要】
1.一种一步纯化固定化ɑ-氨基酸脂酰基转移酶的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)将ɑ-氨基酸酯酰基转移酶基因与醛基化标签基因融合；(2)将步骤(1)融合后的基因和甲酰甘氨酸合成酶基因分别连接到原核表达载体上；(3)将构建好的载体转入宿主细胞，对两种酶进行同步诱导表达；(4)离心收集诱导完的菌体，破碎后离心收集上清，与氨基载体混合进行固定化。2.如权利要求1所述的一步纯化固定化ɑ-氨基酸脂酰基转移酶的方法，其特征在于：所述ɑ-氨基酸酯酰基转移酶基因来源于鞘氨醇杆菌属，所述甲酰甘氨酸合成酶基因来源于肺炎链球菌属。3.如权利要求1所述的一步纯化固定化ɑ-氨基酸脂酰基转移酶的方法，其特征在于：步骤(1)具体为：在所述ɑ-氨基酸酯酰基转移酶基因的起始密码子前或终止密码子前加编码包含SEQIDNO:1的氨基酸序列的核苷酸序列。4.如权利要求1所述的一步纯化固定化ɑ-氨基酸脂酰基转移酶的方法，其特征在于：步...

【专利技术属性】
技术研发人员：李晨辉，刘超，王红权，李燕飞，康丽娟，马福民，姜召红，梁云科，李晓微，
申请(专利权)人：河北善泉生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：河北,13