一种适于工业化的固定化天冬氨酸酶以及利用其生产L-天冬氨酸的方法技术

本发明专利技术提供了一种一步纯化固定化方法来固定天冬氨酸酶，并利用其生产L‑天冬氨酸，该方法能够有效避免引入其他无关蛋白带来的安全风险，且不需要对酶进行纯化，相对传统固定化方法更节约，更有效，可显著提高单位酶活，显著缩短反应时间，提高生产效率，具有广阔的推广前景。

【技术实现步骤摘要】
一种适于工业化的固定化天冬氨酸酶以及利用其生产L-天冬氨酸的方法
本专利技术涉及酶固定化技术及氨基酸生产领域，具体涉及一种利用固定化天冬氨酸酶生产天冬氨酸的方法。
技术介绍
天门冬氨酸(Asparticacid),又称氨基丁二酸。L-天门冬氨酸是构成蛋白质的20种基本氨基酸之一,可作为氨解毒剂、肝机能促进剂、疲劳恢复剂等医药品和添加剂用于各种清凉饮料的生产,还可作为生化试剂,培养基和有机合成中间体。L-天门冬氨酸与L-苯丙氨酸(L-phenylalanine)合成的二肽甜味剂阿斯巴甜(Aspartame)。由天门冬氨酸合成的天门冬氨酸钾镁盐(脉安定)可用于治疗心率失常、心动过速、心力衰竭、心肌梗塞、心绞痛、肝炎和肝硬化等疾病,天门冬氨酸氨基氢的取代衍生物可以作为治疗神经类疾病和大脑疾病的药物,它的聚合物聚天门冬氨酸是目前正在大力推广的一种新型绿色阻垢剂和水处理剂。天门冬氨酸的生产主要包括化学法和生物催化法。化学法主要用于生产天门冬氨酸的外消旋体DL-天门冬氨酸。生物催化法包括游离细胞、固定化细胞及固定化酶法。目前工业上主要利用游本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种一步纯化固定化天冬氨酸酶的方法，其特征在于包括以下步骤：/n(1)将天冬氨酸酶基因与甲酰甘氨酸合成酶识别序列融合，所述甲酰甘氨酸合成酶识别序列包含醛基化标签并可被甲酰甘氨酸合成酶识别；/n(2)将步骤(1)融合后的基因和甲酰甘氨酸合成酶基因分别连接到原核表达载体上；/n(3)将构建好的载体转入大肠杆菌，对两种酶进行同步诱导表达；/n(4)离心收集诱导完的菌体，破碎后离心收集上清，与氨基载体混合进行固定化。/n

【技术特征摘要】
1.一种一步纯化固定化天冬氨酸酶的方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)将天冬氨酸酶基因与甲酰甘氨酸合成酶识别序列融合，所述甲酰甘氨酸合成酶识别序列包含醛基化标签并可被甲酰甘氨酸合成酶识别；
(2)将步骤(1)融合后的基因和甲酰甘氨酸合成酶基因分别连接到原核表达载体上；
(3)将构建好的载体转入大肠杆菌，对两种酶进行同步诱导表达；
(4)离心收集诱导完的菌体，破碎后离心收集上清，与氨基载体混合进行固定化。


2.如权利要求1所述的一步纯化固定化天冬氨酸酶的方法，其特征在于：所述天冬氨酸酶基因为大肠杆菌天冬氨酸酶基因的天然形式、基因重组形式或突变形式；所述甲酰甘氨酸合成酶基因来源于肺炎链球菌属。


3.如权利要求1所述的一步纯化固定化天冬氨酸酶的方法，其特征在于：步骤(1)中所述醛基化标签为：5’CTGTGCACACCATCGCGG3’。


4.如权利要求1所述的一步纯化固定化天冬氨酸酶的方法，其特征在于：步骤(1)融合后的基因连接到pET30a载体获得ASPase-30a表达载体，甲酰甘氨酸合成酶基因利用Gateway系统，先连接到Topo载体，再重组至PDEST17载体上，获得FGE-pdest17载体。


5.如权利要求1所述的一步纯化固定化天冬氨酸酶的方法，其特征在于：步骤(3)中所述同步诱导表达的方法为：将转...

【专利技术属性】
技术研发人员：李晨辉，李港，马小涵，李何鸿晔，何瑞红，李燕飞，裴金玲，刘超，
申请(专利权)人：河北善泉生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：河北;13