一种利用SUMO融合表达系统制备重组肝素酶I的方法及其所制备的SUMO_肝素酶I融合蛋白技术方案

本发明专利技术公开了利用SUMO融合表达系统制备重组肝素酶I的方法及其所制备的肝素酶I，该制备方法包括下列步骤：选择来自肝素黄杆菌(Pedobacter heparinus)的肝素酶I序列，其氨基酸序列如SEQIDNo.1所示，共384aa；去除信号肽序列，获得肝素酶I的DNA序列，如SEQIDNo.2；将所述肝素酶I的DNA序列插入带有N端SUMO蛋白标签的pSMART载体质粒；将正确的质粒转化至BL21(DE3)大肠杆菌感受态细胞中，挑取单克隆，通过发酵和纯化获得融合蛋白；用SUMO蛋白酶将SUMO标签蛋白从融合蛋白上切割下来，即获得肝素酶I。本发明专利技术的优点是：提高目标蛋白质的可溶性、促进目标蛋白质的正确折叠，避免形成包涵体；降低纯化成本、提高纯化效率；SUMO蛋白标签分子量较小，对肝素酶I的酶活性影响较小，获得纯化的肝素酶I。

【技术实现步骤摘要】
一种利用SUMO融合表达系统制备重组肝素酶I的方法及其所制备的SUMO_肝素酶I融合蛋白本专利技术涉及生物
，尤其涉及涉及一种利用SUMO融合表达系统制备重组肝素酶I(HeparinaseI)的方法。
技术介绍
肝素酶主要从一些利用肝素为碳源的细菌中分离得到，最初来源于肝素黄杆菌(Pedobacterheparinus)，从肝素黄杆菌中分离纯化出的肝素酶有三种，分别为肝素酶I、肝素酶II、肝素酶III。肝素酶的主要作用是降解肝素，在酶降解法生产低分子肝素和超低分子肝素中有广泛应用。目前用于低分子肝素生产的肝素酶产品主要有两种来源：一是直接从产肝素酶的微生物中发酵提取(深圳市海普瑞药业股份有限公司，CN102286448B)；二是通过基因工程技术构建重组肝素酶工程菌，发酵提取重组肝素酶。直接从产肝素酶的微生物(如肝素黄杆菌等)中提取肝素酶I，发酵条件和纯化工艺相对复杂，通过菌种选育提高产量的潜力有限。基因工程重组技术已广泛应用于蛋白质制备，在构建工程菌时，选择合适的蛋白纯化标签，与目标蛋白质形成融合蛋白，可以提高蛋白质的可溶性、屏本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用SUMO融合表达系统制备重组肝素酶I的方法，其特征在于，包括下列步骤：/nS01：选择来自肝素黄杆菌(Pedobacter heparinus)的肝素酶I序列，其氨基酸序列如SEQIDNo.1所示，共384aa；/nS02：去除信号肽序列，获得肝素酶I的DNA序列，如SEQIDNo.2；/nS03：将所述肝素酶I的DNA序列插入带有N端SUMO蛋白标签的pSMART载体质粒；/nS04：将正确的质粒转化至BL21(DE3)大肠杆菌感受态细胞中，挑取单克隆，经发酵和纯化获得SUMO_肝素酶I融合蛋白；/nS05：用SUMO蛋白酶将SUMO标签蛋白从步骤S04所述的SUMO_肝素酶I融...

【技术特征摘要】
1.一种利用SUMO融合表达系统制备重组肝素酶I的方法，其特征在于，包括下列步骤：
S01：选择来自肝素黄杆菌(Pedobacterheparinus)的肝素酶I序列，其氨基酸序列如SEQIDNo.1所示，共384aa；
S02：去除信号肽序列，获得肝素酶I的DNA序列，如SEQIDNo.2；
S03：将所述肝素酶I的DNA序列插入带有N端SUMO蛋白标签的pSMART载体质粒；
S04：将正确的质粒转化至BL21(DE3)大肠杆菌感受态细胞中，挑取单克隆，经发酵和纯化获得SUMO_肝素酶I融合蛋白；
S05：用SUMO蛋白酶将SUMO标签蛋白从步骤S04所述的SUMO_肝素酶I融合蛋白上切割下来，即获得肝素酶I。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括融合蛋白表达条件的优化步骤。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述融合蛋白的优化条件是融合蛋白在15℃以0.2m...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋建华，张亮，邢岭，吴双，高伟，
申请(专利权)人：上海宝维医药技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31