一种靶向筛选外源基因双整合位点提高人C5单抗表达产量的方法技术

本发明专利技术提供了一种以靶向筛选外源基因双整合位点提高人C5单抗表达产量的方法，包括：(1)将人补体C5抗体的轻、重链编码基因分别插入两个真核表达载体；(2)获得重组轻、重链编码质粒并共转染至中国仓鼠(CHO)DG44细胞；(3)用FISH技术筛选轻、重链编码基因双整合定位在染色体1q1和1q13的细胞克隆。本发明专利技术筛选获得的1q1和1q13区支持轻、重链编码基因的强转录，可实现人C5单克隆抗体在CHO‑DG44细胞中的高效和稳定表达，其产物可用于治疗因C5水平升高而受累的各种疾病。

【技术实现步骤摘要】
一种靶向筛选外源基因双整合位点提高人C5单抗表达产量的方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种靶向筛选双整合位点提高人补体C5单克隆抗体表达产量的方法。
技术介绍
人C5单克隆抗体(“Soliris”，也称为依库株单抗)先后被批准用于“阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)”和“非典型溶血尿毒综合征(aHUs)”。其它适应症如“难治性重症肌无力”已完成临床试验，“复发性视神经脊髓炎谱系疾病”和“抗体介导的排斥反应”也已进入临床试验的后期阶段。依库珠单抗是目前全球最昂贵的药物，除了因治疗疾病的特殊定价外，早期生物技术和重组蛋白表达体系制约了抗体的表达产量，也是导致该药成本偏高的重要因素。中国目前尚无生产依库株单抗的企业，进口药的昂贵价格尚不能满足中国患者逐年增加的临床需求，同时也需要低成本药物的生产方法。宿主细胞自身遗传稳定性，如宿主染色体或基因组变异(位置效应)是导致重组蛋白表达差异变化的重要原因。表达治疗性重组蛋白的生产用细胞系大多为CHO细胞及其亚型，包括CHO-K1、CHO-S和DG44等，这些细胞有共同的遗传特征，即染色体非整倍性，大约为18-21条染色体，且只有1号染色体本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种靶向筛选双整合位点提高人补体C5单克隆抗体表达产量的方法，其特征在于，所述靶向筛选的双整合位点是位于中国仓鼠卵巢(CHO)细胞1号染色体长臂。

【技术特征摘要】
1.一种靶向筛选双整合位点提高人补体C5单克隆抗体表达产量的方法，其特征在于，所述靶向筛选的双整合位点是位于中国仓鼠卵巢(CHO)细胞1号染色体长臂。2.权利要求1所述的方法，其特征在于，所述靶向筛选的双整合位点是染色体1q1和1q13区。3.权利要求1所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将人C5抗体的轻、重链编码基因(如SEQIDNO:1和SEQIDNO:2)分别插入真核表达载体，制备轻、重链重组表达质粒；(2)将步骤(1)获得的轻、重链重组表达质粒共转染至CHO细胞，经MTX加压和半固体培养筛选，制备单克隆细胞；(3)采用荧光...

【专利技术属性】
技术研发人员：高小平，张晟，代燕平，何刚，程琳，王雯茜，付伟，
申请(专利权)人：成都贝爱特生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51