抗Stathmin单克隆抗体及其用途制造技术

本发明专利技术主要涉及可特异性识别和结合由STMN1基因编码的蛋白Stathmin的单克隆抗体(例如本文所述的C3和C16单克隆抗体)，产生所述单克隆抗体的杂交瘤，包含所述单克隆抗体的组合物，以及所述单克隆抗体的使用方法和用途。

【技术实现步骤摘要】
抗Stathmin单克隆抗体及其用途专利
本专利技术涉及免疫学领域。具体地，本专利技术主要涉及可特异性识别和结合蛋白Stathmin的单克隆抗体(例如本文所述的C3和C16单克隆抗体)，产生所述单克隆抗体的杂交瘤，包含所述单克隆抗体的组合物，以及所述单克隆抗体的使用方法和用途。专利技术背景食管鳞状细胞癌(esophagealsquamouscellcarcinoma，ESCC)是我国多发的消化道恶性肿瘤，其早期症状不明显，诊断时多为中晚期，因此预后不良。目前，已发现和可用于食管癌的血清标志物敏感性偏低，文献报道中灵敏度最高的Cyfra21-1也仅有45.5％，单独应用于食管癌的诊断价值不大。因此，临床上仍然缺乏食管鳞癌特异的诊断标志物。本专利技术人的前期工作应用蛋白质组学技术筛选用于诊断和监测的食管鳞癌特异标志物。经二维电泳(2DE)分离-基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱(matrix-assistedlaserdesorption/ionizationtimeofflightmassspectrometry，MALDI-TOF-MS)分析了8对伴随淋巴结转移和无淋巴结转移ESCC组织的差异蛋白表达谱，提示Stathmin是一种在食管鳞癌中高表达的蛋白。Stathmin(STMN1)是近年来研究较多的一个微管解聚蛋白，通过磷酸化调节自身活性从而影响细胞内微管系统动力平衡，对细胞周期的变化起着重要作用。研究发现在多种人类恶性肿瘤中Stathmin过表达，故亦称为癌蛋白18(Op18)。实验室前人通过ELISA检测食管鳞癌患者以及正常人血清Stathmin水平，提示食管鳞癌患者血清中Stathmin浓度升高并与食管癌淋巴结转移相关。利用血清Stathmin浓度对食管鳞癌诊断的灵敏度达到93.3％特异性达到86.7％，均显著优于目前已有的食管癌肿瘤标志物，提示Stathmin可作为食管鳞癌诊断、治疗和判断预后的一个新的血清标志物，辅助临床诊断。然而，市售的Stathmin抗体检测效果不佳，价格昂贵，工作浓度偏高。因此，仍然存在对效果更好、使用成本更低的优质Stathmin抗体的需要。
技术实现思路
在本专利技术中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。并且，本文中所用的蛋白质和核酸化学、分子生物学、细胞和组织培养、微生物学、免疫学相关术语和实验室操作步骤均为相应领域内广泛使用的术语和常规步骤。同时，为了更好地理解本专利技术，下面提供相关术语的定义和解释。如本文中所使用的，术语“Stathmin(STMN-1)”是本领域内熟知的，其是由人STMN1基因编码的微管解聚蛋白。在本申请中，“Stathmin”、“stathmin-1”和“STMN-1”可互换使用。Stathmin通过磷酸化调节自身活性从而影响细胞内微管系统动力平衡，对细胞周期的变化起着重要作用。Stathmin在多种人类恶性肿瘤包括食管鳞癌中过表达，故其亦被称为癌蛋白18(Op18)。Stathmin蛋白的示例性编码核苷酸序列如SEQIDNO：1所示。如本文中所使用的，术语“抗体”是指通常由两对相同的多肽链(每对具有一条“轻”(L)链和一条“重”(H)链)组成的免疫球蛋白分子。抗体轻链可分类为κ和λ轻链。重链可分类为μ、δ、γ、α或ε，并且分别将抗体的同种型定义为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在轻链和重链内，可变区和恒定区通过大约12或更多个氨基酸的“J”区连接，重链还包含大约3个或更多个氨基酸的“D”区。各重链由重链可变区(VH)和重链恒定区(CH)组成。重链恒定区由3个结构域(CH1、CH2和CH3)组成。各轻链由轻链可变区(VL)和轻链恒定区(CL)组成。轻链恒定区由一个结构域CL组成。抗体的恒定区可介导免疫球蛋白与宿主组织或因子，包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(C1q)的结合。VH和VL区还可被细分为具有高变性的区域(称为互补决定区(CDR))，其间散布有较保守的称为构架区(FR)的区域。各VH和VL由按下列顺序：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4从氨基末端至羧基末端排列的3个CDR和4个FR组成。各重链/轻链对的可变区(VH和VL)分别形成抗体结合部位。氨基酸至各区域或结构域的分配遵循KabatSequencesofProteinsofImmunologicalInterest(NationalInstitutesofHealth，Bethesda，Md.(1987and1991))，或Chothia&Lesk(1987)J.Mol.Biol.196：901-917；Chothia等人(1989)Nature342：878-883的定义。术语“抗体”不受任何特定的产生抗体的方法限制。例如，其包括，特别地，重组抗体、单克隆抗体和多克隆抗体。抗体可以是不同同种型的抗体，例如，IgG(例如，IgG1，IgG2，IgG3或IgG4亚型)，IgA1，IgA2，IgD，IgE或IgM抗体。如本文中所使用的，术语抗体的“抗原结合部分”是指全长抗体的一个或多个部分，所述部分保持结合抗体所结合的相同抗原(例如，Stathmin)的能力，与完整抗体竞争对抗原的特异性结合。通常参见，FundamentalImmunology，Ch.7(Paul，W.，ed.，第2版，RavenPress，N.Y.(1989)，其以其全文通过引用合并入本文，用于所有目的。可通过重组DNA技术或通过完整抗体的酶促或化学断裂产生抗原结合部分。在一些情况下，抗原结合部分包括Fab、Fab′、F(ab′)2、Fd、Fv、dAb和互补决定区(CDR)片段、单链抗体(例如，scFv)、嵌合抗体、双抗体(diabody)和这样的多肽，其包含足以赋予多肽特异性抗原结合能力的抗体的至少一部分。如本文中所使用的，术语“Fd片段”意指由VH和CH1结构域组成的抗体片段；术语“Fv片段”意指由抗体的单臂的VL和VH结构域组成的抗体片段；术语“dAb片段”意指由VH结构域组成的抗体片段(Ward等人，Nature341：544-546(1989))；术语“Fab片段”意指由VL、VH、CL和CH1结构域组成的抗体片段；术语F(ab′)2片段”意指包含通过铰链区上的二硫桥连接的两个Fab片段的抗体片段。在一些情况下，抗体的抗原结合部分是单链抗体(例如，scFv)，其中VL和VH结构域通过使其能够产生为单个多肽链的连接体配对形成单价分子(参见，例如，Bird等人，Science242：423-426(1988)和Huston等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA85：5879-5883(1988))。此类scFv分子可具有一般结构：NH2-VL-接头-VH-COOH或NH2-VH-接头-VL-COOH。合适的现有技术接头由重复的GGGGS氨基酸序列或其变体组成。例如，可使用具有氨基酸序列(GGGGS)4的接头，但也可使用其变体(Holliger等人(1993)，Proc.Natl.Acad.Sci.USA90：6444-6448)。可用于本专利技术的其它接头包括由Alfthan等人(1995)本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.特异性结合Stathmin的单克隆抗体或其抗原结合部分，所述单克隆抗体由保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，具有保藏号CCTCC NO：C2016185或CCTCC NO：C201713的杂交瘤产生。

【技术特征摘要】
1.特异性结合Stathmin的单克隆抗体或其抗原结合部分，所述单克隆抗体由保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，具有保藏号CCTCCNO：C2016185或CCTCCNO：C201713的杂交瘤产生。2.特异性结合Stathmin的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含SEQIDNO：13所示的CDR1以及其保守氨基酸替代物、SEQIDNO：14所示的CDR2以及其保守氨基酸替代物和SEQIDNO：15所示的CDR3以及其保守氨基酸替代物，以及所述轻链可变区包含SEQIDNO：16所示的CDR1以及其保守氨基酸替代物、SEQIDNO：17所示的CDR2以及其保守氨基酸替代物和SEQIDNO：18所示的CDR3以及其保守氨基酸替代物，或者所述重链可变区包含SEQIDNO：19所示的CDR1以及其保守氨基酸替代物、SEQIDNO：20所示的CDR2以及其保守氨基酸替代物和SEQIDNO：21所示的CDR3以及其保守氨基酸替代物，以及所述轻链可变区包含SEQIDNO：22所示的CDR1以及其保守氨基酸替代物、SEQIDNO：23所示的CDR2以及其保守氨基酸替代物和SEQIDNO：24所示的CDR3以及其保守氨基酸替代物。3.特异性结合Stathmin的抗体或其抗原结合部分，其与权利要求1或2所述的单克隆抗体竞争结合Stathmin上的相同表位，例如，所述表位具有SEQIDNO：5的序列。4.一种杂交瘤，以保藏号CCTCCNO：C2016185或CCTCCNO：C201713保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)。5.一种组合物，其包含权利要求1-3中任一项的抗体或其抗原结合部分。6.检测Stathmin在样品中的存在或其表达水平的方法，其包括使用权利要求1-3中任一项的抗体或其抗原结合部分，例如，所述样品包括但不限于，血液样品、组织样品和细胞样品；例如，所述抗体或其抗原结合部分还可包括可检测...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵晓航，孙玉琳，颜露，刘芳，周兰萍，许杨，韩改净，牛芳斐，
申请(专利权)人：中国医学科学院肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：北京,11