一种单克隆抗体ZK2C2及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种单克隆抗体ZK2C2及应用。本发明专利技术提供了一种IgG抗体，命名为ZK2C2，由轻链和重链组成；所述重链中的重链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3依次为序列表的序列3自N末端第45‑52位氨基酸残基、第70‑77位氨基酸残基和第116‑122位氨基酸残基；所述轻链中的轻链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3依次为序列表的序列5自N末端第45‑52位氨基酸残基、第70‑72位氨基酸残基和第109‑119位氨基酸残基。本发明专利技术还保护所述IgG抗体在制备用于抑制寨卡病毒的药物中的应用。本发明专利技术对于寨卡病毒病的防控具有重大的应用价值，将产生深远的社会意义。

【技术实现步骤摘要】
一种单克隆抗体ZK2C2及应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种单克隆抗体ZK2C2及应用。
技术介绍
寨卡病毒、登革热病毒、西尼罗河病毒及黄热病毒同属黄病毒属病毒。寨卡病毒病是由寨卡病毒引起的一种蚊媒传播感染性疾病，其临床表现轻微或不出现症状。主要表现为轻微发热、红疹(多数为斑丘疹)、头痛、关节痛、肌肉痛、无力以及非化脓性结膜炎等。近年来寨卡病毒先后在法国波利尼西亚及巴西爆发流行,并继续在全世界范围内特别是拉丁美洲及加勒比海区域迅速传播，已成为国际公共卫生紧急事件。寨卡病毒感染仅引起轻微的症状。但在波利尼西的流行中成人出现了严重的神经系统并发症-格林巴利综合征(Guillain-Barrésyndrome,GBS)，其发生率达1/4000。更为引人关注的是，随着寨卡病毒感染在巴西的出现，严重出生缺陷小头畸型也明显增加。据估计母亲感染寨卡病毒其胎儿小头畸型发生率高于成人神经系统并发症的几率。我国也有输入病例报道。目前针对寨卡病这一新发感染性疾病尚无有效的疫苗,更缺乏早期诊断及有效的治疗方法。进入21世纪相继出现导致人类严重感染的几种RNA病毒，如SARS、MERS冠状病毒，以及最近的埃博拉病毒和寨卡病毒。面对这些新发的传染性疾病凸现的主要问题是缺乏有效的医疗应对措施包括抗病毒治疗。抗病毒治疗依赖于广谱抗病毒药物的研发或从已有的药物中筛选出有效的治疗药物以快速应对这些新发的传染性疾病。单克隆抗体可大量生产，其与抗原结合的高亲和性和高特异性，大大减少了临床应用时的不良反应。同时可以对抗体分子进行改造以增加其抗病毒效力。抗体以其特异性和使用的灵活性成为感染性疾病治疗中非常有前景的手段。寨卡病毒与同属黄病毒属的登革病毒是经同一蚊媒传播的,常在同一地区流行。有研究表明人先后感染不同血清型的登革病毒，有加重疾病严重性的风险即预先感染的血清型登革病毒产生的抗体，可以结合再次感染的不同血清型登革病毒，但不能中和病毒，反而增加病毒的进入，加重病情。因此，寨卡病毒病的治疗或预防用抗体研制需要避免抗体与登革病毒的交叉反应。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种单克隆抗体ZK2C2及应用。本专利技术提供了一种IgG抗体，命名为ZK2C2，由轻链和重链组成；所述重链中的重链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3依次为序列表的序列3自N末端第45-52位氨基酸残基、第70-77位氨基酸残基和第116-122位氨基酸残基；所述轻链中的轻链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3依次为序列表的序列5自N末端第45-52位氨基酸残基、第70-72位氨基酸残基和第109-119位氨基酸残基。所述重链可变区具体由序列表的序列3自N末端第20至133位氨基酸残基组成。所述轻链可变区具体由序列表的序列5自N末端第20至129位氨基酸残基组成。所述重链具体可为如下(a)或(b)：(a)序列表的序列3自N末端第20-463位氨基酸残基组成的蛋白质；(b)序列表的序列3所示的蛋白质。所述轻链具体可为如下(c)或(d)：(c)序列表的序列5自N末端第20-235位氨基酸残基组成的蛋白质；(d)序列表的序列5所示的蛋白质。本专利技术还保护编码所述IgG抗体的基因。编码所述重链的基因具体为如下(1)或(2)或(3)：(1)序列表的序列4自5’末端第889-2280位核苷酸所示的DNA分子；(2)序列表的序列4自5’末端第946-2280位核苷酸所示的DNA分子；(3)序列表的序列4所示的DNA分子。编码所述轻链的基因具体为如下(4)或(5)或(6)：(4)序列表的序列6自5’末端第889-1596位核苷酸所示的DNA分子；(5)序列表的序列6自5’末端第946-1596位核苷酸所示的DNA分子；(6)序列表的序列6所示的DNA分子。本专利技术还保护所述IgG抗体在制备用于抑制寨卡病毒的药物中的应用。本专利技术还保护一种用于抑制寨卡病毒的药物，其活性成分为所述IgG抗体。本专利技术还保护所述IgG抗体在制备用于中和寨卡病毒的药物中的应用。本专利技术还保护一种用于中和寨卡病毒的药物，其活性成分为所述IgG抗体。本专利技术还保护所述IgG抗体在制备用于预防和/或治疗寨卡病毒病的药物中的应用。本专利技术还保护一种用于预防和/或治疗寨卡病毒病的药物，其活性成分为所述IgG抗体。以上任一所述寨卡病毒具体可为寨卡病毒GZ01株。本专利技术利用寨卡病毒的E蛋白作为钓饵，从感染者的外周血单个核细胞中筛选抗体生成的记忆B细胞，得到可同E蛋白特异结合的单克隆抗体。通过寨卡病毒蚀斑减少实验模型，筛选得到了具有中和活性同时具有良好的特异性的的单克隆抗体。本专利技术对于寨卡病毒病的防控具有重大的应用价值，将产生深远的社会意义。附图说明图1为ZK2C2抗体对寨卡病毒以及登革热病毒的中和活性结果。图2为ZK2C2抗体对动物的保护活性结果。具体实施方式以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。质粒pcDNA3.1(+)：Invitrogen公司，产品目录号V790-20。293T细胞：盖德，CRL-11268。PMD18T载体：Takara，产品目录号D101A。Vero细胞：ATCC公司，产品目录号CCL-81。C6/36细胞：ATCC公司，产品目录号CRL-1660。实施例中所用的寨卡病毒为寨卡病毒GZ01株(ZikavirusisolateGZ01)：参考文献：GenBankACCESSIONNO.KU820898。实施例中所用的登革1型病毒为Hawaii株。参考文献：CompleteGenomeSequencesofDengueVirusType1to4StrainsUsedfortheDevelopmentofCBER/FDARNAReferenceReagentsandWHOInternationalStandardCandidatesforNucleicAcidTesting；GenomeAnnouncements；January/February2016Volume4Issue1e01583-15。实施例中所用的登革2型病毒为NewGuinea株。参考文献：CompleteGenomeSequencesofDengueVirusType1to4StrainsUsedfortheDevelopmentofCBER/FDARNAReferenceReagentsandWHOInternationalStandardCandidatesforNucleicAcidTesting；GenomeAnnouncements；January/February2016Volume4Issue1e01583-15。AG6小鼠(AG6mice)：AG6小鼠为干扰素α、干扰素β和干扰素γ的受体缺陷型的小鼠，攻毒一定剂量的寨卡病毒后几天内死亡。参考文献：FlavivirusNS1proteinininfectedhostseraenhancesviralacquisitionbymosquitoes；JianyingLiu,etc本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种IgG抗体，由轻链和重链组成；所述重链中的重链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3依次为序列表的序列3自N末端第45‑52位氨基酸残基、第70‑77位氨基酸残基和第116‑122位氨基酸残基；所述轻链中的轻链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3依次为序列表的序列5自N末端第45‑52位氨基酸残基、第70‑72位氨基酸残基和第109‑119位氨基酸残基。

【技术特征摘要】
1.一种IgG抗体，由轻链和重链组成；所述重链中的重链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3依次为序列表的序列3自N末端第45-52位氨基酸残基、第70-77位氨基酸残基和第116-122位氨基酸残基；所述轻链中的轻链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3依次为序列表的序列5自N末端第45-52位氨基酸残基、第70-72位氨基酸残基和第109-119位氨基酸残基。2.如权利要求1所述的IgG抗体，其特征在于：所述重链可变区由序列表的序列3自N末端第20至133位氨基酸残基组成；所述轻链可变区由序列表的序列5自N末端第20至129位氨基酸残基组成。3.如权利要求2所述的IgG抗体，其特征在于：所述重链为如下(a)或(b)：(a)序列表的序列3自N末端第20-463位氨基酸残基组成的蛋白质；(b)序列表的序列3所示的蛋白质；所述轻链为如下(c)或(d)：(c)序列表的序列5自N末端第20-235位氨基酸残基组成的蛋白质；(d)序列表的序列5所示的蛋白质。4.编码权利要求3所述IgG抗体的基因，其特征在于：编码所述重链的基因...

【专利技术属性】
技术研发人员：张复春，庾蕾，张林琦，王若珂，高菲，
申请(专利权)人：广州市第八人民医院，清华大学，
类型：发明
国别省市：广东,44