The invention provides a purification method of insoluble lipopeptide, which mainly solves the problems of insoluble crude products and low yield in the present purification method. The technical proposal of the invention is to dissolve the sample by heating the ammonia solution first, so as to improve the solubility of the lipopeptide. Then the product was purified by high performance liquid chromatography (HPLC). The polymer column was used as mobile phase with alkaline solvent to improve the yield of the product. The C4 column was purified for two times and converted to salt at the same time, which reduced the one-step purification process. It can effectively reduce the use of organic solvents, shorten the time, achieve low cost, high yield, and is suitable for industrial scale-up production.
【技术实现步骤摘要】
一种难溶性脂肽的纯化制备方法
本专利技术属于多肽纯化领域,具体涉及一种脂肽的纯化方法。技术背景美容肽或美容胜肽,是属于降解的小分子胶原蛋白,含氨基酸基团,一般由2-10个氨基酸组成。胜肽也是人体中原本就存在的成分,是一种由氨基酸组成的链状结构。我们所熟悉的蛋白质,就是一种多胜肽链。胜肽的生物学活性取决于其氨基酸组成和序列,人体内各种生理进程几乎都是由特定的氨基酸序列组成的多肽或者蛋白质调控的。因此,生物活性肽成为了化妆品研发和应用的全新方向和思路,并且功能越来越细分,如:抗衰老、抗过敏、修复、抗氧化、抗水肿、促进毛发再生、抑制黑色素生成、丰胸、减肥等。脂肽(棕榈酰六肽)即为美容肽的一种,是一种属于Matrikine系列的信号肽,特别与修复年龄相关性皮肤损伤有关。在弹力蛋白的整个分子结构中六肽VGVAPG片段重复了六次之多,因此被称作“springfragment”。棕榈酰六肽具有趋化作用,可以促进真皮成纤维细胞迁移、增殖和基质大分子合成(如弹力蛋白,胶原蛋白等),为皮肤提供支撑。同时它还可以诱导成纤维细胞和单核细胞到特定的位置以达到伤口修复和组织更新。棕榈酰六肽具有类似能抑制神经传导物质,阻断神经肌肉间的传导功能,避免肌肉过度收缩,就能防止细纹形成,能够减缓肌肉收缩的力量,让肌肉放松,减少动态纹的发生与消除细纹;有效重新组织胶原弹力,可以增加弹力蛋白的活性,使脸部线条放松,皱纹抚平改善松弛。可用于化妆品内,作为抗皱成分,且效果极佳。因此这条脂肽在美容品中得到了广泛的应用,但因这条多肽的氨基酸都是疏水性的,同时含有一个溶解性很差的棕榈酸,使其溶解性很差, ...
【技术保护点】
1.一种难溶性脂肽的纯化方法,其特征在于:包括下述步骤:(1)将脂肽粗品溶于氨水中,放于水浴锅中加热搅拌直至溶液呈澄清状态,冷却,用滤膜过滤,收集滤液;(2)用反相高效液相色谱法进行纯化,填料为反相聚合物色谱柱,流动相A为质量百分比为0.05%~0.1%的碳酸氢铵水溶液,流动相B为纯乙腈溶液,梯度洗脱,流动相梯度为A:B由(60~40):(40~60)到(40~20):(60~80),收集主峰;(3)用反相高效液相色谱法进行二次纯化同时转盐,填料为C4反相硅胶柱,流动相C为体积百分比为1~5%的冰醋酸水溶液,流动相D为体积百分比为1~5%的冰醋酸乙腈溶液,梯度洗脱,流动相梯度为C:D由(50~40):(50~60)到(30~20):(70~80),收集检测合格后的主峰,减压蒸馏,冷冻干燥,得到纯度大于98%以上的脂肽。
【技术特征摘要】
1.一种难溶性脂肽的纯化方法,其特征在于:包括下述步骤:(1)将脂肽粗品溶于氨水中,放于水浴锅中加热搅拌直至溶液呈澄清状态,冷却,用滤膜过滤,收集滤液;(2)用反相高效液相色谱法进行纯化,填料为反相聚合物色谱柱,流动相A为质量百分比为0.05%~0.1%的碳酸氢铵水溶液,流动相B为纯乙腈溶液,梯度洗脱,流动相梯度为A:B由(60~40):(40~60)到(40~20):(60~80),收集主峰;(3)用反相高效液相色谱法进行二次纯化同时转盐,填料为C4反相硅胶柱,流动相C为体积百分比为1~5%的冰醋酸水溶液,流动相D为体积百分比为1~5%的冰醋酸乙腈溶液,梯度洗脱,流动相梯度为C:D由(50~40):(50~60)到(30~20):(70~80),收集检测合格后的主峰,减压蒸馏,冷冻干燥,得到纯度大于98%以上的脂肽。2.根据权利要求1所述的一种难溶性脂肽的纯化方法,其特征在于:所述步骤(1)中,水浴锅加热温度为35~45℃,氨水溶液的浓度为质量百分比10%,脂肽粗品的溶解浓度为20mg/ml~40mg/ml。3.根据权利要求2所述的一种难溶性脂肽的纯化方法,其...
【专利技术属性】
技术研发人员:秦敬国,任丽萍,徐海红,徐红岩,
申请(专利权)人:江苏吉泰肽业科技有限公司,
类型:发明
国别省市:江苏,32
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