脂溶性生理活性物质的制备方法技术

本发明专利技术提供了脂溶性生理活性物质的制备方法，该方法包括：在特定的表面活性剂的存在下，将含有脂溶性生理活性物质的微生物细胞或微生物细胞破碎物的水性悬浮液与有机溶剂混合，将脂溶性生理活性物质提取到有机溶剂相中。通过所述制备方法，可以不使用特殊的脱水、干燥设备，并且可以在不存在因溶剂与菌体成分的分离性恶化而导致的收率降低的情况下而进行提取，可以有效的工业生产。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及。具体而言，涉及通过从含有脂溶性生理活性物质的微生物细胞或其微生物细胞破碎物 的水性悬浮液中提取脂溶性生理活性物质，从而制备脂溶性生理活性物质的方法。
技术介绍
生物体中有用的脂溶性生理活性物质已知有很多。其中，辅酶Q是广泛分布于从细菌至哺乳动物的生物体内的必需成分，已知是作为生物体内细胞中的线粒体电子传递体系的组成成分。辅酶Q除了在线粒体中被反复的氧化和还原，承担电子传递体系中的传递成分的功能外，辅酶Q中的还原型辅酶Q已知还具有抗氧化作用。在人中，辅酶Q的侧链具有10个重复结构的辅酶QlO是主成分，在生物体内，其通常存在约40-90%的还原型。辅酶Q的生理作用可列举通过线粒体活化作用激活能量生产、激活心脏机能、稳定细胞膜的效果、通过抗氧化作用而保护细胞的效果等。一直以来，辅酶QlO中的氧化型辅酶QlO被用作充血型心力衰竭药或健康食品；近年来，逐渐认知具有更高生理活性作用的还原型辅酶Q10。辅酶QlO等脂溶性生理活性物质可以通过例如合成、发酵、自天然物中提取等而获得。必要时，还可以将获得的提取物，通过层析纯化、析出结晶而结晶化，获得更高纯度的物质。例如，为了获得辅酶Q10，一般可以培养生产辅酶QlO的微生物，使用有机溶剂从该微生物的悬浮液中提取微生物中的辅酶QlO的方法。一直以来，关于提取微生物细胞中所包含的有用成分的操作，已知有将培养后的微生物的水性悬浮液脱水，形成湿菌体，并使其与有机溶剂接触的方法；将水性悬浮液脱水后进一步干燥，将干燥菌体与有机溶剂接触的方法；直接将水性悬浮液与有机溶剂接触，在液-液之间提取的方法。专利文献I中记载了离心处理培养后的Phaffia酵母的悬浮液，回收菌体，将回收了的菌体喷雾干燥后，用己烷、乙醇等混合溶剂边破碎菌体边提取菌体中的虾青素(astaxanthin)的例子。此外，还已知培养genus Mortierella的菌体,在将菌体悬浮液脱水、干燥后，通过己烷提取含有花生四烯酸的油的例子(专利文献2);将培养了 genusMucor菌体的培养液破碎，冷冻干燥后，通过己烷等溶剂提取Y -亚麻酸的例子(专利文献3)。在这些提取方法中，将干燥菌体与作为提取溶剂的有机溶剂混合，完成提取操作后，通过固液分离去除菌体残渣，可以获得含有目标物质的有机相。专利文献4中公开了，使含有辅酶QlO的微生物的湿菌体或干燥菌体在低温下与甲醇接触，去除菌体内外的杂质后，再在高温下与甲醇接触，提取辅酶QlO的例子。在此类固-液提取操作中，由于菌体和提取溶剂的比重差大，因此具有易于提取后固液分离，目标物质损失少，可以高效提取的优点。但是，在这些方法中，在提取前，从培养后的微生物的水性悬浮液中将大量的水分通过离心分离、喷雾干燥器、冷冻干燥机等装置而脱水、干燥的步骤是必需的，而且由于菌体中残留的含水率，存在不能获得充分的提取率的情况，此外还有装置成本、运输成本高等问题。将微生物的水性悬浮液不进行脱水、干燥而提取的例子已知有直接将培养后的微生物的破碎悬浮液与己烷、2-丙醇等有机溶剂接触，提取菌体内的辅酶QlO (专利文献5)。在此类液-液提取操作中，不进行脱水、干燥微生物，可以以高收率、大处理量提取目标物质，但是，在使用有机溶剂提取微生物细胞或该细胞破碎物的水性悬浮液，特别是该细胞破碎物的水性悬浮液，尤其是物理处理的该细胞破碎物的水性悬浮液的情况下，由于存在一部分蛋白质等细胞成分而易于发生乳化现象等，使含有目标物质的有机相大量困于微生物细胞的破碎悬浮液中，不仅存在不能有效分离有机相，导致收率降低的问题，而且存在所用的提取溶剂的回收率低的问题。此外，还存在除疏水性有机溶剂外，必须使用一定量的亲水性有机溶剂等，使操作复杂化、成本增加的问题。此外一直以来，在液-液提取中使用表面活性剂的情况下，由于因界面效果而增加了水相和有机溶剂相的亲和性，易于产生均相化，导致常常需要长时间来分离水相和有机溶剂相，或者即使花费了时间也不能分离，必须根据情况通过离心分离等操作来强制分 离。因此，在一般的液-液提取中，在提取步骤中使用表面活性剂被认为不是优选的。现有技术文献专利文献专利文献1:特开平7-41687号公报专利文献2:特开2009-120840号公报专利文献3:特开平5-17796号公报专利文献4:专利第4275621号公报专利文献5:特开2008-253271号公报
技术实现思路
专利技术要解决的问题如上所述，一直以来，在从微生物细胞中提取脂溶性生理活性物质等有用成分的提取操作中，提取前对微生物脱水或干燥等必需要特殊的设备，提取后含有有用成分的溶剂与菌体成分的分离性差，收率不充分，还必须使用多种溶剂等，导致操作复杂化、成本增加的问题。本专利技术的一个目的是，提供从含有脂溶性生理活性物质的微生物细胞中，提取脂溶性生理活性物质，可以有效进行工业生产的制备方法，所述方法不使用特殊的脱水、干燥设备，并且不存在由于溶剂与菌体成分的分离性恶化而导致收率降低。专利技术解决问题的手段为了解决上述问题进行深入研究，结果发现使含有脂溶性生理活性物质的微生物细胞或微生物细胞破碎物的水性悬浮液中存在特定的表面活性剂，进行使用有机溶剂的提取操作，不仅可以提高有机溶剂与水性悬浮液的亲和性，而且在混合、静置后，可以加快油水分离，有效提取脂溶性生理活性物质，也适合工业生产，完成本专利技术。换言之，本专利技术为如下所述。[I]，该方法包括在选自聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物型表面活性剂、蔗糖脂肪酸酯类、甘油脂肪酸酯类、脱水山梨糖醇脂肪酸酯类、聚醚多元醇型表面活性剂、聚氧乙烯烷基醚型表面活性剂和烷基醚型表面活性剂中的至少一种非离子型表面活性剂的存在下，将含有脂溶性生理活性物质的微生物细胞或其微生物细胞破碎物的水性悬浮液与有机溶剂混合，提取脂溶性生理活性物质。[2]上述[I]记载的制备方法，其中，脂溶性生理活性物质是辅酶Q10。[3]上述[2]记载的制备方法，其中，辅酶QlO是还原型辅酶Q10，或是还原型辅酶QlO和氧化型辅酶QlO的混合物。[4]上述[I]- [3]的任一项记载的制备方法，其中，非离子型表面活性剂至少是聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物型表面活性剂。[5]上述[I]_[4]的任一项记载的制备方法，其中，相对于微生物细胞或微生物细胞破碎物的水性悬浮液，非离子型表面活性剂的添加量为0.01重量％以上。 [6]上述[1]-[5]的任一项记载的制备方法，其中，有机溶剂是疏水性有机溶剂。[7]上述[6]记载的制备方法，其中，还组合使用了亲水性有机溶剂。[8]上述[1]_[7]的任一项记载的制备方法，其中，提取是连续提取。[9]脂溶性生理活性物质的纯化方法，该方法包括在选自聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物型表面活性剂、蔗糖脂肪酸酯类、甘油脂肪酸酯类、脱水山梨糖醇脂肪酸酯类、聚醚多元醇型表面活性剂、聚氧乙烯烷基醚型表面活性剂和烷基醚型表面活性剂中的至少一种非离子型表面活性剂的存在下，将含有脂溶性生理活性物质的微生物细胞或其微生物细胞破碎物的水性悬浮液与有机溶剂混合，提取脂溶性生理活性物质。[10]上述[9]记载的纯化方法，其中，脂溶性生理活性物质是辅酶Q10。[11]上述[10]记载的纯化方法，其中，辅酶QlO是还原型辅酶Q10，或是还原型辅酶QlO和氧化型辅酶Q本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.07.22 JP 2010-1645311.脂溶性生理活性物质的制备方法，该方法包括在选自聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物型表面活性剂、蔗糖脂肪酸酯类、甘油脂肪酸酯类、脱水山梨糖醇脂肪酸酯类、聚醚多元醇型表面活性剂、聚氧乙烯烷基醚型表面活性剂和烷基醚型表面活性剂中的至少一种非离子型表面活性剂的存在下，将含有脂溶性生理活性物质的微生物细胞或其微生物细胞破碎物的水性悬浮液与有机溶剂混合，提取脂溶性生理活性物质。2.权利要求1记载的制备方法，其中，脂溶性生理活性物质是辅酶Q10。3.权利要求2记载的制...

【专利技术属性】
技术研发人员：金谷健登，铃木康之，神田彰久，横江和哉，
申请(专利权)人：株式会社钟化，
类型：
国别省市：