The invention relates to a medicine for repairing wounds, in particular to a preparation method of a novel medical cell repairing agent. Specific preparation steps are: isolation, purification and culture of human amniotic mesenchymal stem cells, preparation of sodium alginate compound, preparation of cell repair agent. The invention establishes a preparation method of human amniotic mesenchymal stem cells and a corresponding stem cell bank, which is ready for the large-scale production and application of a repairing agent for human amniotic mesenchymal stem cells.
【技术实现步骤摘要】
一种新型医用细胞修复剂的制备方法
:本专利技术涉及修复创伤的药剂,尤其是涉及一种新型医用细胞修复剂的制备方法。
技术介绍
:皮肤创伤修复是一个复杂的生物学过程,它启动一系列复杂的生物学事件,包括炎症、组织新生及组织重构。虽然许多研究采用不同的方法治疗皮肤创伤修复,但愈合质量低、附属器官不可再生等依然是皮肤创伤愈合过程中的关键问题。目前,皮肤移植是修复大面积皮肤损伤的最有效方法。近年来,人工合成皮肤已经被用来治疗皮肤损伤,但并不是一种完美的皮肤替代物,也存在着一系列的问题:目前使用的人工合成皮肤种子细胞是自体或异体的表皮细胞。自体表皮细胞数量不足,异体表皮细胞则存在着排异反应;目前使用的人工合成皮肤中存在着活细胞,但是保存是个问题,若临时制备需要时间较长,而皮肤损伤需要在尽快的时间内使用人工合成皮肤;目前使用的人工合成皮肤不具有创面新生皮形成血管的能力,容易坏死。而间充质干细胞已经被证实是皮肤创伤修复的有效种子细胞。已有诸多实验研究结果证实BMSCs在促进创面愈合方面起到积极的作用。Badiavas将骨髓间充质干细胞移植到深II度烧伤创面,发现其明显促进创面的愈合。付小兵等将BMSCs移植至猪深度烧伤创面,发现创面愈合速度明显加快,表皮增厚,真皮神经纤维增多,大大改善了创面愈合质量。文献报道BMSCs还参与表皮、汗腺及创面血管的重建。这些研究结果表明BMSCs是非常好的皮肤组织工程种子细胞。创伤愈合的各个阶段都有生长因子的参与和调控,生长因子对治疗慢性难愈合皮肤创口和大面积烧伤创面有着广阔的应用前景。但是作为临床应用,获得骨髓间充质干细胞时手续比较复杂,提供 ...
【技术保护点】
1.一种新型医用细胞修复剂的制备方法,其特征在于,具体的制备步骤为,(1)海藻酸钠复合剂的制备称取1~10g无水海藻酸钠,加入到100ml玻璃瓶中,接着加入40ml去离子水均匀搅拌至溶解,再加入20ml甘油混匀,然后加入40ml的无血清间充质干细胞培养基充分混匀;再往玻璃瓶中添加表皮生长因子EGF 1mg、碱性成纤维细胞生长因子bFGF 2mg、血管生长因子VEGF 2mg,搅拌均匀后得到海藻酸钠复合剂;(2)细胞修复剂的制备向1ml步骤1制得的海藻糖复合剂中加入1.0×106细胞/ml人羊膜间充质干细胞悬液1ml,再加入1ml质量浓度为1%的透明质酸钠液,搅拌均匀后即得细胞修复剂。
【技术特征摘要】
1.一种新型医用细胞修复剂的制备方法,其特征在于,具体的制备步骤为,(1)海藻酸钠复合剂的制备称取1~10g无水海藻酸钠,加入到100ml玻璃瓶中,接着加入40ml去离子水均匀搅拌至溶解,再加入20ml甘油混匀,然后加入40ml的无血清间充质干细胞培养基充分混匀;再往玻璃瓶中添加表皮生长因子EGF1mg、碱性成纤维细胞生长因子bFGF2mg、血管生长因子VEGF2mg,搅拌均匀后得到海藻酸钠复合剂;(2)细胞修复剂的制备向1ml步骤1制得的海藻糖复合剂中加入1.0×106细胞/ml人羊膜间充质干细胞悬液1ml,再加入1ml质量浓度为1%的透明质酸钠液,搅拌均匀后即得细胞修复剂。2.根据权利要求1所述的细胞修复剂的制备方法,其特征在于,人羊膜间充质干细胞的制备步骤为,(1)分离纯化取无菌采集羊膜组织,生物安全柜内置于预冷的PBS中冲洗,若胎盘连带绒毛膜,需先分离绒毛膜和羊膜,取出羊膜,丢弃绒毛膜;剪羊膜组织为2cm×2cm的羊膜小条,等体积加入2U/ml中性蛋白酶消化30min,再加两倍半羊膜体积的5.5mg/mlV型胶原酶和2U/ml透明质酸酶1:1混...
【专利技术属性】
技术研发人员:马步鹏,李栋,宋芸娟,
申请(专利权)人:北京壹典壹生生物技术有限公司,
类型:发明
国别省市:北京,11
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