T淋巴细胞扩增的方法技术

本发明专利技术涉及用于具有记忆样表型的T淋巴细胞的扩增的方法，其中增加记忆诱导化合物，诸如2‑羟基戊二酸(2HG)的细胞内浓度以便促进记忆样表型的维持。这例如在细胞免疫治疗中可以是有用的。记忆诱导化合物可以是式(I)，其中：p是0或1，并且当p是0时，Y是‑CH2‑或‑C＝，并且当p是1时，Y选自‑CH‑、CH2、‑NH‑、‑S和‑O‑；‑R1是‑H、‑(CH2)nCH3、‑(CH2)nCH2CO2H、‑CH2Ph或‑CH2PhOCH2Ph；并且当Y是‑CH‑、CH2、‑NH‑、‑S或‑O‑时，X是选自‑H、‑OH、‑NH2、‑SH、‑(CH2)nCH3‑(CH2)nCH2CO2H、‑F、‑Cl、‑Br和‑I的单键基团，或者是选自＝O和＝S的双键基团；并且当Y是双键‑C＝时，X是‑H；并且每个n独立地是0至12。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】T淋巴细胞扩增的方法
本专利技术涉及用于T淋巴细胞的体外扩增，例如用于过继性T细胞治疗的方法。
技术介绍
使用天然存在或T细胞受体(TCR)工程化的自体T淋巴细胞的过继性转移的基于细胞免疫治疗的策略是在癌症和其它病况的情况下递送有效临床响应的有希望的新方法。目前，T细胞从患者的外周血或肿瘤中分离，体外操作和扩增，然后再输注。存在执行过继性T细胞治疗的两种主要方法；从患者体内分离肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)，体外扩增和输注；或分离T淋巴细胞，体外修饰它们的T细胞受体(TCR)以识别特定的肿瘤抗原并且输注。当靶抗原在恶性细胞上稳健表达(即在B细胞白血病中表达的CD19抗原)时，嵌合抗原受体(CAR)方法通常是有效的。TIL方法在显示高突变率的癌症类型(诸如黑素瘤)中最有效，因为在再输注T细胞中表现完整的个性化TCR库。两种方法都依赖于效应T淋巴细胞的产生，该效应T淋巴细胞是具有有限的更新和增殖能力的短寿命的高度溶细胞性T细胞。用过继性T细胞治疗获得的响应在短期内令人印象深刻，但迄今为止的长期成功受到限制。临床前研究示出，为了使响应持久，稳健的记忆响应是必不可少的，但迄今为止还没有关于自体记忆细胞产生的报道。因此，过继性T细胞治疗的主要挑战是产生持久的免疫响应。难以产生此类响应的一个原因是转移的细胞在转移后不能持续存在。这种持续性的缺乏是因为活化的T细胞在体外扩增期间变成具有有限更新和增殖能力的终末分化效应细胞。因此，体外扩增T淋巴细胞同时保留记忆样表型并且没有终末分化的方法将可用于增加过继性T细胞治疗中转移的细胞的持续性并且产生持久的免疫响应。
技术实现思路
本专利技术涉及增加T淋巴细胞中的记忆诱导化合物，诸如2-羟基戊二酸(2HG)的细胞内浓度促进记忆样表型的维持的发现。因此，增加T淋巴细胞中的记忆诱导化合物的细胞内浓度可用于细胞群的扩增，例如用于在细胞免疫治疗中持久的T细胞响应的产生。本专利技术的一个方面提供扩增T淋巴细胞群的方法，包括：提供初始T淋巴细胞群，增加T淋巴细胞中的记忆诱导化合物的细胞内浓度，并且培养T淋巴细胞，从而产生扩增的T淋巴细胞群。扩增群体中的记忆样T淋巴细胞的数量和/或比例相对于初始群体可增加。本专利技术的另一方面提供处理方法，包括：提供从供体个体获得的初始T淋巴细胞群，增加T淋巴细胞中的记忆诱导化合物的细胞内浓度，培养T淋巴细胞以产生扩增群体，并且；将扩增的T淋巴细胞群施用于接受者个体。本专利技术的另一方面提供用于T淋巴细胞的扩增的培养介质，所述培养介质包含记忆诱导化合物或记忆诱导化合物的前体形式。本专利技术的另一方面提供记忆诱导化合物或其前体形式在体外培养的T淋巴细胞中维持记忆样表型的用途。本专利技术的记忆诱导化合物可以是有机二酸，或者此类化合物的单酯或二酯形式。优选地，记忆诱导化合物具有式(I)：其中：p是0或1，并且当p是0时，Y是-CH2-或-C＝，并且当p是1时，Y选自-CH-、CH2、-NH-、-S和-O-；-R1选自-H、-(CH2)nCH3、-(CH2)nCH2CO2H、-CH2Ph或-CH2PhOCH2Ph；并且当Y是-CH-、CH2、-NH-、-S或-O-时，X是选自-H、-OH、-NH2、-SH、-(CH2)nCH3-(CH2)nCH2CO2H、-F、-Cl、-Br和-I的单键基团，或者X是选自＝O和＝S的双键基团；并且当Y是双键-C＝时，X是-H；每个n独立地是0至12。以及其单酯和二酯形式。优选的记忆诱导化合物包括2-羟基戊二酸(2HG)、琥珀酸和富马酸。2-羟基戊二酸(2HG)可包括R-2-羟基戊二酸(R-2HG，也称为D-2-羟基戊二酸)、S-2-羟基戊二酸(S-2HG，也称为L-2-羟基戊二酸)或其混合物。附图说明图1示出VHL-HIF信号传导调节2-羟基戊二酸水平。VhlFI/FI、Vhl-I-和Hif1α-I-Vhl-I-CD8+T淋巴细胞代谢组的主要组分分析。括号内示出每个PC的百分比变化。图2示出VHL-HIF信号传导调节2-羟基戊二酸水平。图2A示出按代谢组学筛选的p值递降顺序排列的代谢物。图2B示出VhlFI/FI、Vhl-I-和Hif1α-I-Vhl-I-CD8+T淋巴细胞中2HG的相对水平。每个点代表单独的小鼠。图2C示出用αCD3和αCD28抗体活化48小时并且然后在IL-2中再培养5天的VhlFI/FI和Vhl-I-CD8+T淋巴细胞中的总2HG(S-2HG+R-2HG)水平的LC-MS/MS定量；每个基因型n＝4只单独的小鼠。图2D和图2E示出在重建或不重建VHL的情况下(D)RCC4和(E)786-O细胞中的总2HG(S-2HG+R-2HG)水平的LC-MS/MS定量；n＝3；EV＝空载体。图2F示出在具有或不具有VHL缺失的情况下MEF中的总2HG(S-2HG+R-2HG)水平的LC-MS/MS定量；n＝2至4个单独的分离物。在适用的情况下，示出每个小组的p值(成对比较的双尾学生t检验和多重比较的单向方差分析)。误差条表示标准差并且B和C中的每个点代表单独的小鼠，ns＝非显著。图3示出2-羟基戊二酸的低氧诱导依赖于CD8+T淋巴细胞中的HIF-1α而非HIF-2α。图3A示出从C57BL/6J小鼠中分离并且用αCD3+αCD28抗体活化48小时的CD8+T淋巴细胞中的总2HG(S-2HG+R-2HG)的LC-MS/MS定量。然后将细胞在21％或1％的氧气中用IL-2再培养48小时；每个条件n≥11只小鼠。图3B示出通过对细胞体积归一化确定的总2HG(S-2HG+R-2HG)的总细胞内浓度。图3C示出来自如3A中培养的CD8+T淋巴细胞的总2HG(S-2HG+R-2HG)的1H-NMR分析。图3D示出来自如图3a培养的CD8+T淋巴细胞的细胞内代谢物提取物中的S-2HG和R-2HG的对映选择性分析；n＝23只小鼠。图3E示出CD8+T淋巴细胞中的总2HG(S-2HG+R-2HG)的细胞内浓度，该CD8+T淋巴细胞从Hif1αfI/fI和Hif1α-I-小鼠中分离，用αCD3+αCD28抗体活化48小时并且在21％或1％的氧气中用IL-2再培养48小时；每个基因型n＝4只小鼠。图3F示出CD8+T淋巴细胞中的总2HG(S-2HG+R-2HG)的细胞内浓度，该CD8+T淋巴细胞从Hif2αfI/fI和Hif2α-I-小鼠中分离，用αCD3+αCD28抗体活化48小时并且在21％或1％的氧气中用IL-2再培养48小时；每个基因型n＝4只小鼠。图3G示出在活化后的指示时间从C57BL/6J小鼠中分离的原初和活化的CD8+T淋巴细胞中的总2HG(S-2HG+R-2HG)的细胞内量。每个时间点n≥4只小鼠。在适用的情况下，示出每个小组的p值(成对比较的双尾学生t检验(A、B)、多重比较的单向方差分析(D)和分组数据的双向方差分析(E、F))。误差条表示标准差；A、B、D和G中的每个点代表单独的小鼠。图4示出谷氨酰胺是低氧CD8+T淋巴细胞中2HG的来源。图4A和图4B示出CD8+T淋巴细胞中的总2HG(S-2HG+R-2HG)的13C-同位素体谱图，该CD8+T淋巴细胞活化并且如图3A在(A)1％和(B)21％的氧气中用未标记的底物、U-13C-葡萄糖或本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种扩增T淋巴细胞群的方法，包括：提供初始T淋巴细胞群，增加所述T淋巴细胞中的记忆诱导化合物的细胞内浓度，并且培养所述T淋巴细胞，从而产生扩增的T淋巴细胞群，其中所述记忆诱导化合物具有式(I)；

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.11.02 GB 1519340.21.一种扩增T淋巴细胞群的方法，包括：提供初始T淋巴细胞群，增加所述T淋巴细胞中的记忆诱导化合物的细胞内浓度，并且培养所述T淋巴细胞，从而产生扩增的T淋巴细胞群，其中所述记忆诱导化合物具有式(I)；其中：p是0或1，并且当p是0时，Y是-CH2-或-C＝，并且当p是1时，Y选自-CH-、CH2、-NH-、-S和-O-；-R1是-H、-(CH2)nCH3、-(CH2)nCH2CO2H、-CH2Ph或-CH2PhOCH2Ph；并且当Y是-CH-、CH2、-NH-、-S或-O-时，X是选自-H、-OH、-NH2、-SH、-(CH2)nCH3-(CH2)nCH2CO2H、-F、-Cl、-Br和-I的单键基团，或者是选自＝O和＝S的双键基团；并且当Y是双键-C＝时，X是-H；并且每个n独立地是0至12。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述扩增群体中的所述T淋巴细胞是记忆样T淋巴细胞。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述T淋巴细胞是CD8+T淋巴细胞。4.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述T淋巴细胞是CD4+T淋巴细胞。5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述记忆样T淋巴细胞具有包含CD62L高、CCR7高和CD44高的表型。6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述记忆样T淋巴细胞具有包含CD62L高和CD44高；或CCR7+和CD45RO+的表型。7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述初始群体中的所述T淋巴细胞是多克隆的。8.根据权利要求7所述的方法，其中所述初始T淋巴细胞群是肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)。9.根据权利要求8所述的方法，其中所述TIL从来自患有癌症病况的供体个体的肿瘤样品中分离。10.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述初始群体中的所述T淋巴细胞是单克隆的。11.根据权利要求10所述的方法，其中所述方法包括修饰所述T淋巴细胞以表达异源抗原受体。12.根据权利要求11所述的方法，其中所述异源抗原受体对肿瘤抗原具有特异性。13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括活化所述T淋巴细胞。14.根据权利要求13所述的方法，其中所述T淋巴细胞通过暴露于T细胞受体(TCR)激动剂而被活化。15.根据权利要求14所述的方法，其中所述TCR激动剂是呈递细胞的表面上的I类MHC分子上显示的肽。16.根据权利要求14所述的方法，其中所述TCR激动剂是呈递细胞的所述表面上的II类MHC分子上显示的肽。17.根据权利要求14所述的方法，其中所述TCR激动剂是结合到所述TCR的抗体。18.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述记忆诱导化合物具有式(II)：其中：p是1；Y选自-CH-、CH2、-NH-、-S和-O-；-R1是-H；X是选自-H、-OH、-NH2、-SH、-(CH2)nCH3-(CH2)nCH2CO2H、-F、-Cl、-Br和-I的单键基团，并且每个n独立地是0至12。19.根据权利要求1至17中任一项所述的方法，其中所述记忆诱导化合物具有式(III)：其中：p是1；-R1是-H、-(CH2)nCH3、-(CH2)nCH2CO2H、-CH2Ph或-CH2PhOCH2Ph；Y选自-CH-、CH2、-NH-、-S和-O-；X是选自＝O和＝S的双键基团；并且每个n独立地是0至12，以及其单酯和二酯形式，诸如其烷基单酯和二酯形式。20.根据权利要求1至17中任一项所述的方法，其中所述记忆诱导化合物具有式(IV)；其中：p是0；X是H；并且Y选自-CH-、CH2、-NH-、-S和-O-，以及其单酯和二酯形式，诸如其烷基单酯和二酯形式。21.根据权利要求1至17中任一项所述的方法，其中所述记忆诱导化合物是S-2-羟基戊二酸(S-2HG)。22.根据权利要求1至17中任一项所述的方法，其中所述记忆诱导化合物是R-2-羟基戊二酸(R-2HG)。23.根据权利要求1至17中任一项所述的方法，其中所述记忆诱导化合物是琥珀酸。24.根据权利要求1至17中任一项所述的方法，其中所述记忆诱导化合物是富马酸。25.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中通过在包含所述记忆诱导化合物的介质中培养所述T淋巴细胞，增加所述T淋巴细胞中的所述记忆诱导化合物的所述细胞内浓度。26....

【专利技术属性】
技术研发人员：兰德尔·约翰逊，弗朗西斯科德阿西斯·帕拉宗加西亚，佩特罗斯安德烈亚斯·泰拉奇斯，
申请(专利权)人：剑桥企业有限公司，
类型：发明
国别省市：英国,GB