扩增胆管细胞的方法技术

技术编号：39640245 阅读：6 留言：0更新日期：2023-12-09 11:05

本发明专利技术涉及体外扩增胆管细胞的方法，其包括在法尼醇

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【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】扩增胆管细胞的方法
[0001]资助
[0002]本工作得到了欧洲肝脏研究协会
(EASL)
的支持
。
引起本申请的项目根据欧盟地平线
2020
研究与创新计划
(
拨款协议号
741707)
，接受了来自欧洲研究理事会
(ERC)
的资助
。
[0003]领域
[0004]本专利技术涉及人类胆管细胞类器官的分离和增殖，例如以用于疾病建模
、
药物筛选和再生医学
。
[0005]背景
[0006]类器官具有独特的组织修复潜力，因为它们保留了其来源组织的关键功能和特征
。
然而，它们修复天然上皮并恢复其复杂性的能力尚未在人类中得到确认，而类器官的移植和体内存活仅在数量有限的动物研究中得到证实
(1)。
胆管上皮为解决这一挑战和在人类中开发概念验证研究展现了一种典型的和临床上重要的系统
。
实际上，将胆汁从肝脏转移到十二指肠的胆源性系统病症占儿科的
70
％，并且占成人肝移植的多达三分之一
(2)。
这导致了对治疗替代物，如基于细胞的治疗的迫切需求
。
此外，适合再生医学应用的类器官可易于从称为胆管细胞的胆源性上皮细胞得到
(3)。
最后，胆管也概括了在其他空腔器官中发现的上皮多样性
(4)。
实际上，沿着胆管树
(biliary tree)
的...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.
体外扩增胆管细胞的方法，其包括：
(i)
提供胆管细胞群体；以及
(ii)
在法尼醇
X
受体
(FXR)
激动剂存在下培养所述群体以产生经
FXR
处理的胆管细胞的扩增群体
。2.
如权利要求1所述的方法，其中所述法尼醇
X
受体
(FXR)
激动剂是鹅去氧酸
(CDA)
或奥贝胆酸
(OCA)。3.
如权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述胆管细胞是原代胆管细胞或从
iPSC
分化的胆管细胞
。4.
如前述权利要求中任一项所述的方法，其中在包含所述法尼醇
X
受体
(FXR)
激动剂
、
表皮生长因子
(EGF)、
经典
Wnt
信号传导抑制剂和非经典
Wnt
信号传导增强剂的扩增培养基中培养所述群体，以产生经
FXR
处理的胆管细胞的扩增群体
。5.
如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述经
FXR
处理的胆管细胞在所述扩增培养基中形成类器官
。6.
如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述胆管细胞是肝外胆管细胞
。7.
如权利要求1‑5中任一项所述的方法，其中所述胆管细胞是肝内胆管细胞
。8.
如权利要求1‑5中任一项所述的方法，其中所述胆管细胞是胆囊胆管细胞
。9.
如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述扩增培养基是营养培养基，其包含
FXR
激动剂
、
表皮生长因子
(EGF)、
经典
Wnt
信号传导抑制剂和非经典
Wnt
信号传导增强剂
。10.
如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述非经典
Wnt
信号传导增强剂是
Wnt
激动剂
。11.
如权利要求
10
所述的方法，其中所述
Wnt
激动剂是
R
‑
脊椎蛋白
。12.
如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述经典
Wnt
信号传导抑制剂是
Dickkopf
相关蛋白
1(DKK
‑
1)。13.
如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述原代胆管细胞可以获自或分离自来自供体个体的原代胆汁组织
。14.
如前述权利要求中任一项所述的方法，其中将群体在所述扩增培养基的
3D
培养物中进行培养
。15.
如权利要求
14
所述的方法，其中所述扩增培养基还包含支架基质，任选地在所述支架基质内是脱细胞的人类或非人类组织细胞外基质
。16.
如前述权利要求中任一项所述的方法，其中扩增培养基包含支架基质和补充有
(i)EGF
，
(ii)
所述经典
Wnt
抑制剂，
(iii)
所述非经典
Wnt
增强剂以及
(iv)
所述
FXR
激动剂的营养培养基
。17.
如权利要求
15
所述的方法，其中扩增培养基由支架基质和补充有
(i)EGF
，
(ii)
所述经典
Wnt
抑制剂，
(iii)
所述非经典
Wnt
增强剂以及
(iv)
所述
FXR
激动剂的营养培养基组成
。18.
如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述营养培养基是化学上明确的
。19.
如权利要求
18
所述的方法，其中所述化学上明确的营养培养基是
William
’
s E
培养基，其任选地补充有烟酰胺
、
碳酸氢钠
、2
‑
磷酸
‑
L
‑
抗坏血酸三钠盐
、
丙酮酸钠
、
葡萄糖
、HEPES、ITS+
预混物
、
地塞米松
、glutamax、
青霉素和链霉素中的一种或多种
。20.
如前述权利要求中任一项所述的方法，其中胆管细胞是人类的
。
21.
如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述胆管细胞群体没有干细胞
。22.
如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述扩增群体中的胆管细胞表达
CK7、CK18、CK19、HNF1B、
γ
谷氨酰转移酶
(GGT)、CFTR、SCR、SSTR2、
顶端盐和胆汁转运体
(ASBT)、
水通道蛋白1和阴离子交换剂
2、FGF19、SOX17。23.
如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述扩增群体中的胆管细胞显示出
ALP
活性
、GGT
活性
、MDR1
介导的分泌
、
对分泌素和生长抑素的生理反应
、
胆汁酸的输出
、CFTR
介导的氯化物转移
、
对
ATP
和乙酰胆碱的生理反应以及响应于
VEGF
的增加的增殖
。24.
如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述扩增群体中的胆管细胞不表达
MHC
抗原或以低于原代胆管细胞的水平表达
MHC
抗原
。25.
如前述权利要求中任一项所述的方法，其中将所述胆管细胞在所述扩增培养基中培养
20
代或更多代
。26.
如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法包括破坏胆管细胞类器官使得所述扩增群体包括单个细胞
。27.
如前述权利要求中任一项所述的方法，其包括将所述经
FXR
处理的胆管细胞的扩增群体接种到生物相容性支架中，任选地在所述支架基质内是脱细胞的人类或非人类组织细胞外基质
。28.
如权利要求
26
所述的方法，其包括在包含
RXR
激动剂
、
表皮生长因子
(EGF)、
经典
Wnt
信号传导抑制剂和非经典
Wnt/
信号传导增强剂的扩增培养基中培养所述生物相容性支架，使得所述胆管细胞填充所述支架
。29.
如权利要求
27
或<...

【专利技术属性】
技术研发人员：福蒂奥斯，
申请(专利权)人：剑桥企业有限公司，
类型：发明
国别省市：

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