【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及结合至胶质细胞源性神经营养因子家族受体α样(gfral)蛋白并抑制其活性的抗体。本专利技术还涉及作为恶病质状态以及涉及食物摄入减少和肌肉和脂肪量减少的病症的治疗靶标的gdf15-gfral信号传导通路。
技术介绍
1、称为“胶质细胞源性神经营养因子家族受体α样蛋白”的细胞表面受体由gfral基因编码，所述基因位于人染色体6p12.1上并且具有编码394个氨基酸的序列的9个外显子。
2、在发育中的小鼠脑中，已显示大脑皮层和海马体中gfral的mrna水平在出生时达到最大值并且后来下降，表明它可能参与神经保护和脑发育[1]。在成年小鼠中，gfral转录物主要在中枢神经系统中发现。已发现其表达仅限于脑干的某些神经元，特别是在最后区(ap)和孤束核(孤核束，nts)中。随后，在睾丸和脂肪组织中也检测到低水平的gfral表达[2，3，4，5]。
3、gfral的配体已被鉴定为激素gdf15(生长和分化因子15)[2，3，4，5，6]。与gdf15相互作用后，gdf15-gfral复合物与ret(酪氨酸蛋白激酶受体)相互作用，并且通过激活mapk、akt和plc-γ信号传导通路诱导细胞信号传导。已经显示这种信号传导具有调节食物摄入、能量消耗和体重的下游效应[2，3，4，5]。活性信号传导复合物是包含gdf15-gfral-ret的同二聚体的六个多肽的组装体。
4、gdf15是tgf-β家族的较远成员。它是应激诱导的细胞因子并且可以通过组织损伤[7]、电离辐射[8]、缺氧[9]、炎症[10]、
5、高水平的gdf15与一些癌症患者的恶病质有关。体内癌症的存在可以增加gdf15的水平，驱使癌症恶病质。恶病质是多因素疾病，其特征在于骨骼肌和脂肪组织损失所致的体重减轻、代谢调节失衡和食物摄入减少[19]。据估计，恶病质影响全球多达74％的患有多种类型癌症的患者，其中在头颈癌、胰腺癌、胃癌和肝癌中发病率最高[20]。癌症恶病质不仅会对患有癌症的患者的生活质量有负面影响[21，22]，还会减弱抗癌化疗的有效性[23，24]并且增加其毒性[25，26，27]，导致癌症相关的死亡率增加[27，28，29]和医疗资源消耗增加。除癌症以外的一系列病症也与恶病质相关，包括肺和心脏病症(例如，充血性心力衰竭、慢性阻塞性肺疾病)，以及慢性肾病、获得性免疫缺陷综合征(aids)，以及囊性纤维化、多发性硬化、运动神经元病、帕金森病、痴呆、结核病、多系统萎缩症、汞中毒、克罗恩病、类风湿性关节炎和乳糜泻的晚期状态。
6、在恶病质动物模型中，施用针对gdf15的单克隆抗体导致食物摄入增加，运动功能和能量消耗更好，并且能够逆转体重减轻并且恢复骨骼肌[30，31]。阻断gdf15-gfral通路逆转由癌症恶病质引起的体重减轻并且延长存活期[30]。据报道，抑制脑干神经元中ret信号传导复合物的抗gfral拮抗剂抗体在注射入荷瘤小鼠时可逆转过度脂质氧化并且预防癌症恶病质[32]。在2019年，启动了一项使用抗gfral单克隆抗体ngm120的临床试验，用于治疗癌症厌食/恶病质综合征(nct04068896)。
7、食用鼠粮的gfral-/-(“敲除”)小鼠呈现正常体重，并且它们就像野生型小鼠一样，在食用高脂饮食时变得肥胖。根据一些报道，gfralgfral敲除小鼠在食用高脂饮食时变得比野生型小鼠略重。与媒介物治疗的小鼠相比，用gdf15治疗的野生型小鼠表现出显著减少的食物摄入和持续的体重减轻，而gfral-/-小鼠是gdf15的作用难治的[3，4]。这说明了gdf15-gfral信号传导对体重增加的抑制。此外，已示出gdf15过表达可保护小鼠免于患上肥胖症并且改善其在食用高脂饮食时的葡萄糖耐量[11，33]。在喂食鼠粮或高脂饮食的小鼠或大鼠中，gdf15施用减少食物摄入和体重。患有自发性肥胖的食蟹猴在暴露于重组has-gdf15 4周后显示食物摄入减少，导致显著的体重减轻[2，3，4，5，6]。在大鼠模型中，血清gdf15水平与肿瘤体积正相关，并且与食物摄入负相关，并且证明gdf15通过恶心和涌吐诱导厌食[34，35]。
8、还有报道称gdf15-gfral通路与妊娠剧吐[36]高度相关。
9、因此，由gdf15-gfral-ret复合物诱导的信号传导调节食物摄入和体重，并且其活性在诸如癌症恶病质的病症中起重要作用。通过抑制gdf15-gfral-ret复合物的活性，例如通过抑制该复合物在细胞表面的形成，拮抗剂提供了对这些和其他病症的潜在治疗性治疗途径。由cimino等人,pnas 118(27)2021描述了通过外源性和内源性gdf15对下丘脑-垂体-肾上腺(hpa)轴的激活，其内容通过引用并入本文。
技术实现思路
1、本专利技术提供了针对人gfral的抗体。我们产生并且选定了针对gfral蛋白的抗体，所述抗体以高效力抑制gfral的活性，拮抗其下游信号传导。这些抗体展现了与表达gfral的细胞表面上的gfral的高亲和力结合，并且在表达gfral的细胞中抑制gdf15诱导的胞内信号传导。与gfral胞外结构域结合的抗体可以抑制gdf15-gfral-ret复合物的形成，例如，通过抑制ret与gdf15-gfral的缔合来实现。我们选定了在使用人gfral的测定中展示出高亲和力和高效力的抗体，结合了对非人gfral(例如，小鼠gfral)的交叉反应性。
2、将本专利技术的示例性抗体命名为quel-0101、quel-0201和quel-0301。此外，将本专利技术的相关抗体命名为quel-0102、quel-0103、quel-0104、quel-0105、quel-0302、quel-0303和quel-0304。本专利技术扩展到抗gfral结合分子，其掺入quel-0101、quel-0201或quel-0301的抗原结合序列，或者quel-0102、quel-0103、quel-0104、quel-0105、quel-0302、quel-0303或quel-0304中任一种的抗原结合序列，如它们的互补决定区(cdr)，例如，重链cdr(hcdr)hcdr1、hcdr2和/或hcdr3和/或轻链cdr(lcdr)lcdr1、lcdr2和/或lcdr3，以及任选地重链和/或轻链可变(vh和/本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种结合人GFRAL的抗体，所述抗体包含抗体重链可变(VH)结构域和抗体轻链可变(VL)结构域，
2.一种结合人GFRAL的抗体，所述抗体包含
3.一种结合人GFRAL的抗体，所述抗体包含
4.根据权利要求3所述的抗体，其中所述VH结构域由通过基因区段IGHV1-3(例如，IGHV1-3*01)、IGHD5-18(例如，IGHD5-18*01)和IGHJ6(例如，IGHJ6*02)的重组产生的核苷酸序列编码。
5.一种与QUEL-0201IgG竞争结合人GFRAL的抗体，所述QUEL-0201IgG包含QUEL-0201VH结构域SEQ ID NO:12和QUEL-0201VL结构域SEQ ID NO:17。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的抗体，所述抗体以如通过表面等离子体共振确定的1nM或更强的亲和力结合人GFRAL。
7.根据权利要求6所述的抗体，所述抗体以如通过表面等离子体共振确定的100pM或更强的亲和力结合人GFRAL。
8.根据权利要求6所述的抗体，所述抗体以在50pM-20
9.根据权利要求1至8中任一项所述的抗体，所述抗体与小鼠GFRAL交叉反应，对小鼠GFRAL的亲和力在其对人GFRAL的亲和力的10倍以内。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的抗体，所述抗体以15nM或更强的效力抑制GFRAL，其中所述效力在响应于GDF15的ERK磷酸化的体外测定中被确定为IC50。
11.根据权利要求10所述的抗体，其中所述效力是10nM或更强。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的抗体，所述抗体包含
13.根据任一项前述权利要求所述的抗体，所述抗体包含
14.根据权利要求13所述的抗体，所述抗体包含
15.根据权利要求14所述的抗体，所述抗体包含
16.根据权利要求14或权利要求15所述的抗体，其中所述一个或两个氨基酸改变是保守取代。
17.根据任一项前述权利要求所述的抗体，所述抗体包含所述QUEL-0201VH结构域SEQID NO:12和所述QUEL-0201VL结构域SEQ ID NO:17。
18.一种结合人GFRAL的抗体，所述抗体包含抗体重链可变(VH)结构域和抗体轻链可变(VL)结构域，
19.一种结合人GFRAL的抗体，所述抗体包含抗体重链可变(VH)结构域和抗体轻链可变(VL)结构域，
20.一种结合人GFRAL的抗体，所述抗体包含VH结构域和VL结构域，
21.一种结合人GFRAL的抗体，所述抗体包含VH结构域和VL结构域，
22.一种结合人GFRAL的抗体，所述抗体包含VH结构域和VL结构域，
23.一种结合人GFRAL的抗体，所述抗体包含
24.一种结合人GFRAL的抗体，所述抗体包含
25.根据权利要求24所述的抗体，其中所述VH结构域由通过基因区段IGHV3-7(例如，IGHV3-7*01)、IGHD1-7(例如，IGHD1-7*01)和IGHJ4(例如，IGHJ4*02)的重组产生的核苷酸序列编码。
26.一种结合人GFRAL的抗体，所述抗体包含
27.根据权利要求26所述的抗体，其中所述VH结构域由通过基因区段IGHV3-7(例如，IGHV3-7*01)、IGHD1-20(例如，IGHD1-20*01)和IGHJ4(例如，IGHJ4*02)的重组产生的核苷酸序列编码。
28.一种与QUEL-0301IgG竞争结合人GFRAL的抗体，所述QUEL-0301IgG包含QUEL-0301VH结构域SEQ ID NO:22和QUEL-0301VL结构域SEQ ID NO:27。
29.根据权利要求18至28中任一项所述的抗体，所述抗体以如通过表面等离子体共振确定的1nM或更强的亲和力结合人GFRAL。
30.根据权利要求29所述的抗体，所述抗体以如通过表面等离子体共振确定的1pM或更强的亲和力结合人GFRAL。
31.根据权利要求29所述的抗体，所述抗体以在0.5pM-2pM范围的亲和力结合人GFRAL。
32.根据权利要求18至31中任一项所述的抗体，所述抗体与小鼠GFRAL交叉反应，具有如通过表面等离子体共振确定的10nM或更强的对小鼠GFRAL的亲和力。
33.根据权利要求18至32中任一项所述的抗体，所述抗体以15nM或更强的效力抑制GFRAL，其中所述...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种结合人gfral的抗体，所述抗体包含抗体重链可变(vh)结构域和抗体轻链可变(vl)结构域，
2.一种结合人gfral的抗体，所述抗体包含
3.一种结合人gfral的抗体，所述抗体包含
4.根据权利要求3所述的抗体，其中所述vh结构域由通过基因区段ighv1-3(例如，ighv1-3*01)、ighd5-18(例如，ighd5-18*01)和ighj6(例如，ighj6*02)的重组产生的核苷酸序列编码。
5.一种与quel-0201igg竞争结合人gfral的抗体，所述quel-0201igg包含quel-0201vh结构域seq id no:12和quel-0201vl结构域seq id no:17。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的抗体，所述抗体以如通过表面等离子体共振确定的1nm或更强的亲和力结合人gfral。
7.根据权利要求6所述的抗体，所述抗体以如通过表面等离子体共振确定的100pm或更强的亲和力结合人gfral。
8.根据权利要求6所述的抗体，所述抗体以在50pm-200pm范围的亲和力结合人gfral。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的抗体，所述抗体与小鼠gfral交叉反应，对小鼠gfral的亲和力在其对人gfral的亲和力的10倍以内。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的抗体，所述抗体以15nm或更强的效力抑制gfral，其中所述效力在响应于gdf15的erk磷酸化的体外测定中被确定为ic50。
11.根据权利要求10所述的抗体，其中所述效力是10nm或更强。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的抗体，所述抗体包含
13.根据任一项前述权利要求所述的抗体，所述抗体包含
14.根据权利要求13所述的抗体，所述抗体包含
15.根据权利要求14所述的抗体，所述抗体包含
16.根据权利要求14或权利要求15所述的抗体，其中所述一个或两个氨基酸改变是保守取代。
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18.一种结合人gfral的抗体，所述抗体包含抗体重链可变(vh)结构域和抗体轻链可变(vl)结构域，
19.一种结合人gfral的抗体，所述抗体包含抗体重链可变(vh)结构域和抗体轻链可变(vl)结构域，
20.一种结合人gfral的抗体，所述抗体包含vh结构域和vl结构域，
21.一种结合人gfral的抗体，所述抗体包含vh结构域和vl结构域，
22.一种结合人gfral的抗体，所述抗体包含vh结构域和vl结构域，
23.一种结合人gfral的抗体，所述抗体包含
24.一种结合人gfral的抗体，所述抗体包含
25.根据权利要求24所述的抗体，其中所述vh结构域由通过基因区段ighv3-7(例如，ighv3-7*01)、ighd1-7(例如，ighd1-7*01)和ighj4(例如，ighj4*02)的重组产生的核苷酸序列编码。
26.一种结合人gfral的抗体，所述抗体包含
27.根据权利要求26所述的抗体，其中所述vh结构域由通过基因区段ighv3-7(例如，ighv3-7*01)、ighd1-20(例如，ighd1-20*01)和ighj4(例如，ighj4*02)的重组产生的核苷酸序列编码。
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29.根据权利要求18至28中任一项所述的抗体，所述抗体以如通过表面等离子体共振确定的1nm或更强的亲和力结合人gfral。
30.根据权利要求29所述的抗体，所述抗体以如通过表面等离子体共振确定的1pm或更强的亲和力结合人gfral。
31.根据权利要求29所述的抗体，所述抗体以在0.5pm-2pm范围的亲和力结合人gfral。
32.根据权利要求18至31中任一项所述的抗体，所述抗体与小鼠gfral交叉反应，具有如通过表面等离子体共振确定的10nm或更强的对小鼠gfral的亲和力。
33.根据权利要求18至32中任一项所述的抗体，所述抗体以15nm或更强的效力抑制gfral，其中所述效力在响应于gdf15的erk磷酸化的体外测定中被确定为ic50。
34.根据权利要求33所述的抗体，其中所述效力是10nm或更强。
35.根据权利要求18至34中任一项所述的抗体，所述抗体包含
36.根据任一项前述权利要求所述的抗体，所述抗体包含
37.根据权利要求36所述的抗体，所述抗体包含
38.根据权利要求37所述的抗体，所述抗体包含
39.根据权利要求37或权利要求38所述的抗体，其中所述一个或两个氨基酸改变是保守取代。
40.根据权利要求18至39中任一项所述的抗体，所述抗体包含所述quel-0301vh结构域seq id no:22和所述quel-0301vl结构域seq id no:27。
41.根据权利要求18、20和23-28中任一项所述的抗体，所述抗体包含所述quel-0302vh结构域seq id no:123和所述quel-0302vl结构域seq id no:127。
42.根据权利要求18、21和23-28中任一项所述的抗体，所述抗体包含所述quel-0303vh结构域seq id no:132和所述quel-0303vl结构域seq id no:137。
43.根据权利要求18和22-28中任一项所述的抗体，所述抗体包含所述quel-0304vh结构域seq id no:141和所述quel-0304vl结构域seq id no:145。
44.一种结合人gfral的抗体，所述抗体包含抗体重链可变(vh)结构域和抗体轻链可变(vl)结构域，
45.一种结合人gfral的抗体，所述抗体包含抗体重链可变(vh)结构域和抗体轻链可变(vl)结构域，
46.一种结合人gfral的抗体，所述抗体包含vh结构域和vl结构域，
47.一种结合人gfral的抗体，所述抗体包含vh结构域和vl结构域，
48.一种结合人gfral的抗体，所述抗体包含vh结构域和vl结构域，
49.一种结合人gfral的抗体，所述抗体包含vh结构域和vl结构域，
50.一种结合人gfral的抗体，所述抗体包含
51.一种结合人gfral的抗体，所述抗体包含
52.根据权利要求51所述的抗体，...
【专利技术属性】
技术研发人员：S·奥拉希利，A·P·科尔，I·西米诺，EC·李，H·刘，A·卡彭特，
申请(专利权)人：剑桥企业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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